5.7. Analysis of cytokeratin proteo

5.7. Analysis of cytokeratin proteolysis and release by ELISA
In live epithelial cells, cytokeratins are insoluble because they
form aggregates constituting the intermediate filaments of the
cytoskeleton [55]. However, during cell death cytokeratin 18
(CK18) proteins are released and can be detected in the
supernatant. The type of cell death determines what this released
intermediate filament cytokeratin (CK18) looks like. The M30-
Apoptosense assay (Peviva AB, Bromma, Sweden) specifically
measures in the supernatant of dying cells a neo-epitope formed
by caspase-cleavage of CK18 at D396 (CK18D396-NE M30 neo-epitope),
reflecting caspase activation and subsequent apoptotic cell
death. The M65 ELISA (Peviva AB, Bromma, Sweden) measures
soluble full length CK18 released from dying cells and can be used
to assess overall death of epithelial cells due to both apoptosis and
necrosis [56]. The units of the two assays are calibrated against
identical standard material so that a ratio between caspase-cleaved
and total released CK18 can be calculated (M30:M65 ratio).
Induction of apoptosis in cultured cells leads to the release of caspase-
cleaved CK18 and relatively high M30:M65 ratios, whereas
induction of necrosis results almost exclusively in the release of
CK18 molecules that have not been cleaved by caspases, resulting
in a low M30:M65 ratio. The M30:M65 ratio, therefore, reflects the
type of cell death.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

5.7 การวิเคราะห์ cytokeratin proteolysis และปล่อย โดย ELISAในเซลล์ epithelial สด cytokeratins มีขึ้นเนื่องจากพวกเขาการเพิ่มค่า filaments กลางของการcytoskeleton [55] อย่างไรก็ตาม ในระหว่างที่เซลล์ตาย cytokeratin 18โปรตีน (CK18) ถูกนำออกใช้ และสามารถตรวจพบในการsupernatant กำหนดชนิดของเซลล์ตายนี้ออกมีเดียท cytokeratin (CK18) มีลักษณะเหมือน M30-Apoptosense assay (Peviva AB บร็อมมา สวีเดน) โดยเฉพาะรูปแบบมาตรการใน supernatant ที่เซลล์ตายนีโอ-epitopeโดย caspase-ปริของ CK18 ที่ D396 (M30 CK18D396 NE นีโอ-epitope),สะท้อน caspase เปิดและเซลล์ apoptotic ต่อมาความตาย มาตรการ ELISA M65 (Peviva AB บร็อมมา สวีเดน)ความยาวทั้งหมดละลาย CK18 ออกจากเซลล์ที่ตาย และสามารถใช้จะเสียชีวิตโดยรวมของ epithelial เซลล์เนื่องจากทั้งสอง apoptosis และการตายเฉพาะส่วน [56] หน่วย assays สองถูกปรับเทียบกับวัสดุเหมือนมาตรฐานเพื่อให้อัตราส่วนระหว่างแหวก caspaseและสามารถคำนวณได้ CK18 ออก (อัตรา M30:M65)เหนี่ยวนำ apoptosis ในเซลล์อ่างนำไปสู่การเปิดตัวของ caspase-แหวก CK18 และอัตราส่วน M30:M65 ค่อนข้างสูง ในขณะที่ผลการตายเฉพาะส่วนโดยเฉพาะในรุ่นของการเหนี่ยวนำCK18 โมเลกุลที่ไม่มีการแหวก โดย caspases เกิดในอัตราส่วนต่ำสุด M30:M65 อัตราส่วน M30:M65 ดังนั้น สะท้อนให้เห็นถึงการชนิดของเซลล์ตาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5.7 การวิเคราะห์ proteolysis cytokeratin และเป็นอิสระโดยวิธี ELISA
ในเซลล์เยื่อบุผิวสด cytokeratins เป็นเพราะพวกเขาไม่ละลายน้ำ
รูปแบบมวลรวม constituting ไส้กลางของ
โครงร่าง [55] อย่างไรก็ตามในระหว่างการตายของเซลล์ cytokeratin 18
(CK18) โปรตีนมีการเปิดตัวและสามารถตรวจพบใน
สารละลาย ประเภทของการตายของเซลล์กำหนดสิ่งที่ปล่อยออกมานี้
cytokeratin กลางใย (CK18) ดูเหมือนว่า M30-
Apoptosense? การทดสอบ (Peviva AB, Bromma, สวีเดน) โดยเฉพาะ
มาตรการในสารละลายของเซลล์ตาย epitope-ใหม่ที่เกิดขึ้น
โดย caspase-ความแตกแยกของ CK18 ที่ D396 (CK18D396 NE-M30 นีโอ epitope)
สะท้อนให้เห็นถึงการเปิดใช้งาน caspase และต่อมาเซลล์ apoptotic
ตาย M65? วิธี ELISA (Peviva AB, Bromma, สวีเดน) วัด
ความยาวเต็มรูปแบบที่ละลายน้ำได้ CK18 ปล่อยออกมาจากเซลล์ที่ตายและสามารถนำมาใช้
ในการประเมินการเสียชีวิตโดยรวมของเซลล์เยื่อบุผิวเนื่องจากทั้งการตายและ
เนื้อร้าย [56] หน่วยงานของสองการวิเคราะห์มีการปรับเทียบกับ
วัสดุมาตรฐานเดียวกันเพื่อให้อัตราส่วนระหว่าง caspase-แยก
และรวมการปล่อยตัว CK18 สามารถคำนวณ. (M30: M65 อัตราส่วน)
การชักนำให้เกิด apoptosis ในเซลล์เพาะเลี้ยงนำไปสู่การเปิดตัวของ caspase-
ตัด CK18 และ M30 ค่อนข้างสูงอัตราส่วน M65 ขณะที่
เหนี่ยวนำของผลเนื้อร้ายเกือบเฉพาะในการเปิดตัวของ
โมเลกุล CK18 ที่ไม่ได้ถูกตัดโดย caspases ผล
ใน M30 ต่ำอัตราส่วน M65 M30: อัตราส่วน M65 จึงสะท้อนให้เห็นถึง
ประเภทของการตายของเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5.7 การวิเคราะห์โปรติโอไลซีสไซโตเคราตินและปล่อยโดยวิธี ELISA
มีชีวิตในเซลล์เยื่อ cytokeratins จะไม่ละลายเพราะพวกเขา
แบบฟอร์มมวลรวมประกอบไส้กลางของ
ขาดตอน [ 55 ] อย่างไรก็ตาม ในการตายของเซลล์ไซโตเคราติน 18
( ck18 ) โปรตีนออกและสามารถตรวจพบใน
น่าน . ประเภทของการตายของเซลล์กําหนดอะไรนี้ออก
ไซโตเคราตินอินเทอร์มีเดียท ฟิลาเมนท์ ( ck18 ) ดูเหมือน M30 -
apoptosense  assay ( peviva AB , bromma , สวีเดน ) โดยเฉพาะ
มาตรการในน่านตายเซลล์ นีโอ โดยตัวของไวรัสรูปแบบ
แคสเปส ck18 ที่ d396 ( ck18d396-ne M30 นีโอไวรัส ) และกลุ่มที่มีการเปิดใช้งานแคสเปส
สะท้อนตามมาเซลล์
ตาย การ m65  ELISA ( peviva AB , bromma , สวีเดน ) มาตรการ
ละลายตาย ck18 ความยาวเต็มออกจากเซลล์ และสามารถใช้เพื่อประเมินภาพรวม
การตายของเซลล์เยื่อเนื่องจากการเกิดเนื้อตายและ
[ 56 ] หน่วยของทั้งสองวิธีจะเทียบกับ
วัสดุมาตรฐานเหมือนกัน ดังนั้นอัตราส่วนระหว่างแคสเปสเป็นและรวม ck18
ออกสามารถคำนวณ ( M30 : m65
อัตราส่วน )การชักนำให้เกิด apoptosis ในเซลล์เพาะเลี้ยง นำไปสู่การปล่อยแคสเปส -
เป็น ck18 ค่อนข้างสูง โดย : m65 อัตราส่วนและการขาดผล

เกือบเฉพาะในรุ่นของโมเลกุล ck18 ที่ไม่ได้ถูกตัดทอนโดย caspases เป็นผล
ใน M30 ต่ำ : m65 อัตราส่วน M30 : m65 อัตราส่วนจึงสะท้อน
ชนิดของเซลล์ตาย