2.3. Ploidy determinationFor determ

2.3. Ploidy determination
For determining the ploidy of regenerates, 2 cm segments of fully developed leaves were collected and analysed using flow cytometry (the fluorescence intensity is proportional to the nuclear DNA content). All of the plants that successfully passed acclimatisation
to greenhouse conditions were analysed. Samples were prepared according to Petersen et al. (2002) and analysed using a Partec PA flow cytometer. Collected data were used to calculate the polyploidisation rates (the percentage of the detected polyploids in
the samples analysed).To investigate methods of determining ploidy aside from flow
cytometry, plants with known ploidy were examined in the second growing season for stomatal length and width, pollen grain diameter and spikelet length. Both untreated plants of known ploidy and the colchicine-generated polyploids (first colchicine generation – C0) were grown under greenhouse conditions and were in similar developmental stages. For determination of the length and width of the stoma, the leaf segments were hand-scraped with a razor blade, leaving only the abaxial region of the epidermis. After washing once, the epidermal segments were mounted on a microscope
slide with a drop of distilled water, covered with a cover slip and examined under a light microscope with the help of an ocularmicrometer. The size of 240 stomata (2 ploidy level×8 plants×3 leaves×5 stomata) was measured for each genotype. For determination
of pollen grain diameter, the anthers were mounted in a 2% acetocarmine solution and examined under a light microscope with the help of an ocular-micrometer. A total of 480 pollen grain diameters (2 ploidy levels×3 plants×1 inflorescence×8 anthers×10 pollen grains) were measured for each genotype. The spikelet lengths, defined as the length of the lower glume (without the distance of an awn), were estimated under a stereoscopic microscope using an ocular scale on spikelets dissected from the middle part of inflorescences collected in late autumn.Atotal of 480 spikelet lengths (2 ploidy levels×8 plants×3 inflorescences×10 spikelets) were measured for each genotype.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การพล็อยดีกำหนดสำหรับการกำหนดพล็อยดีของสร้างใหม่ กลุ่ม 2 ซม.ใบพัฒนาเต็มถูกเก็บรวบรวม และ analysed โดยใช้เซลล์กระแส (ความเข้ม fluorescence เป็นสัดส่วนกับเนื้อหา DNA นิวเคลียร์) พืชที่ผ่านการ acclimatisation ทั้งหมดมี analysed เงื่อนไขการเรือนกระจก ตัวอย่างเตรียมไว้ตาม Petersen et al. (2002) และ analysed ใช้ cytometer กระแสเป็น Partec PA รวบรวมข้อมูลที่ใช้ในการคำนวณราคา polyploidisation (เปอร์เซ็นต์ของ polyploids ที่พบในตัวอย่าง analysed)การตรวจสอบวิธีการกำหนดพล็อยดีนอกเหนือจากกระแสเซลล์ พืชกับพล็อยดีชื่อดังถูกตรวจสอบในสองฤดูกาลเติบโต stomatal ความยาว และความกว้าง ความยาวเส้นผ่าศูนย์กลางและ spikelet เมล็ดละอองเกสร พืชทั้งสองไม่ถูกรักษาพล็อยดีรู้จักและ polyploids สร้างโคลชิซีน (แรกโคลชิซีนสร้าง – C0) ถูกปลูกเรือนกระจกสภาวะ และอยู่ในขั้นตอนการพัฒนาคล้ายกัน ความยาวและความกว้างของปากใบการ ส่วนใบถูกมือขูดกับใบมีดโกน ออกเฉพาะภูมิภาค abaxial ของหนังกำพร้า หลังจากการซักผ้าหนึ่งครั้ง เซ็กเมนต์ epidermal ถูกติดตั้งบนกล้องจุลทรรศน์ภาพนิ่งกับหยดกลั่นน้ำ ครอบคลุมครอบคลุมการจัดส่ง และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงช่วย ocularmicrometer การ จำนวน 240 stomata (2 พล็อยดีระดับ× 8 พืชซื้อใบ 3 × 5 stomata) เป็นวัดในแต่ละลักษณะทางพันธุกรรม สำหรับการกำหนดของเส้นผ่าศูนย์กลางเมล็ดละอองเกสร เหมือนถูกติดตั้งในโซลูชัน acetocarmine 2% และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงช่วยเป็นแนวไมโครมิเตอร์ จำนวน 480 เมล็ดละอองเกสรสมมาตร (2 พล็อยดีระดับการพืช 3 × 1 inflorescence × 8 เหมือน× 10 pollen ธัญพืช) มีวัดสำหรับแต่ละลักษณะทางพันธุกรรม ความยาว spikelet กำหนดเป็นความยาวของ glume ล่าง (โดยไม่มีระยะห่างของการ awn), ถูกประเมินภายใต้กล้องจุลทรรศน์ stereoscopic ใช้มาตราส่วนเป็นแนวบน spikelets dissected จากส่วนกลางของช่อเขียวรวบรวมในช่วงปลายฤดูใบไม้ร่วงAtotal ความยาว spikelet 480 (2 พล็อยดีระดับการพืช 8 × 3 ช่อเขียว× 10 spikelets) มีวัดสำหรับแต่ละลักษณะทางพันธุกรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ความมุ่งมั่น ploidy
สำหรับการกำหนด ploidy ของ regenerates, กลุ่ม 2 เซนติเมตรใบการพัฒนาอย่างเต็มที่ถูกเก็บรวบรวมและวิเคราะห์โดยใช้ cytometry ไหล (ความเข้มแสงเป็นสัดส่วนกับปริมาณดีเอ็นเอนิวเคลียร์) ทั้งหมดของพืชที่ผ่านการเคยชินกับสภาพที่ประสบความสำเร็จ
กับสภาพเรือนกระจกที่ได้มาวิเคราะห์ ตัวอย่างถูกจัดทำขึ้นตามปีเตอร์เสนและคณะ (2002) และวิเคราะห์โดยใช้การไหล Partec PA cytometer ข้อมูลที่รวบรวมได้ถูกนำมาใช้ในการคำนวณอัตรา polyploidisation (ร้อยละของ polyploids ตรวจพบใน
ตัวอย่างวิเคราะห์) หากต้องการตรวจสอบวิธีการของการกำหนด ploidy นอกเหนือจากการไหล
cytometry, พืชที่มี ploidy ที่รู้จักได้รับการตรวจสอบในฤดูปลูกที่สองสำหรับความยาวปากใบและความกว้าง เส้นผ่าศูนย์กลางเกสรดอกไม้และระยะเวลาในดอก ทั้งพืชได้รับการรักษาของ ploidy ที่รู้จักและ polyploids colchicine สร้าง (colchicine รุ่นแรก - C0) ได้รับการปลูกภายใต้สภาพเรือนกระจกและอยู่ในขั้นตอนการพัฒนาที่คล้ายกัน สำหรับการกำหนดความยาวและความกว้างของปากส่วนใบถูกมือขูดกับใบมีดโกนเหลือเพียงภูมิภาค abaxial ของหนังกำพร้า หลังจากล้างครั้งเดียวส่วนผิวหนังที่ถูกติดตั้งอยู่บนกล้องจุลทรรศน์
สไลด์ที่มีหยดน้ำกลั่นปกคลุมด้วยฝาครอบใบและตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงด้วยความช่วยเหลือของ ocularmicrometer ขนาดของ 240 ปากใบ (2 ploidy ระดับ× 8 × 3 พืชใบ× 5 ปากใบ) วัดสำหรับแต่ละสายพันธุ์ สำหรับการกำหนด
ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางเกสรเม็ดอับเรณูถูกติดตั้งในการแก้ปัญหา acetocarmine 2% และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงด้วยความช่วยเหลือของตา-ไมโครเมตร รวมของเส้นผ่าศูนย์กลาง 480 เม็ดเกสร (2 ระดับ ploidy × 3 ×พืช 1 ช่อดอก× 8 × 10 อับเรณูละอองเรณู) วัดสำหรับแต่ละสายพันธุ์ ความยาวดอกหมายถึงความยาวของเปลือกที่ต่ำกว่า (ไม่รวมระยะทางของหนาม) ถูกคาดว่าภายใต้กล้องจุลทรรศน์สามมิติโดยใช้ขนาดตาดอกที่ตัดมาจากชิ้นส่วนตรงกลางของช่อดอกที่เก็บรวบรวมได้ในช่วงปลาย autumn.Atotal จาก 480 ความยาวดอก (2 ระดับ ploidy × 8 ×พืช 3 ช่อดอก× 10 ดอก) ได้รับการวัดในแต่ละพันธุ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การกำหนด
กำหนดการของ regenerates , 2 ซม. ส่วนของการพัฒนาอย่างเต็มที่ ใบที่ถูกเก็บรวบรวมได้โดยใช้เครื่องนับเซลล์ ( เรืองแสงเข้มเป็นสัดส่วนกับนิวเคลียสเนื้อหา ) ทั้งหมดของพืชที่ส่งผ่าน Acclimatisation
สภาพโรงเรือนประมาณ ตัวอย่างที่เตรียมจาก Petersen et al .( 2002 ) และ วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ พาร์เท็คโดยการใช้โมโน . รวบรวมข้อมูลที่ใช้ในการคำนวณ polyploidisation อัตราเปอร์เซ็นต์ของที่ตรวจพบในตัวอย่าง polyploids
2 ) เพื่อศึกษาวิธีการกำหนดการนอกเหนือจากการไหล
( พืชที่ทราบการศึกษาใน 2 ฤดูปลูก สำหรับความยาวของปากใบ และความกว้างขนาดละอองเรณูและความยาว spikelet . ทั้งสองของการรักษาพืชที่รู้จักกันและผลที่เกิด polyploids ( ใช้รุ่นแรก ( C0 ) ที่ปลูกภายใต้สภาพโรงเรือน และอยู่ในขั้นตอนการพัฒนาที่คล้ายกัน เพื่อกำหนดความยาวและความกว้างของปากใบ , ใบส่วนที่เป็นมือขูดกับใบมีดโกน ,เหลือเพียงซื้อสิทธิ์ขายเสียงบริเวณผิวหนังชั้นนอก หลังจากล้างครั้งเดียว ส่วนตรงติดบนสไลด์กล้องจุลทรรศน์
กับหยาดน้ำปกคลุมด้วยฝาครอบ การจัดส่งและตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงด้วยความช่วยเหลือของ ocularmicrometer . ขนาด 240 ใบ ( ระดับ 2 การ× 8 × 3 × 5 ใบพืชใบ ) คือวัดแต่ละจีโนไทป์ . หา
ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของเกสรข้าว อับเรณูติดในสารละลายซีโทคาร์มีนเป็น 2% และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงด้วยความช่วยเหลือของไมโครเมตรตา . ทั้งหมด 480 เกสรเม็ดเส้นผ่าศูนย์กลาง ( 2 × 3 × 1 ระดับการพืชช่อ× 8 × 10 เม็ดเกสรเพศผู้ เกสร ) วัดแต่ละจีโนไทป์ . การ spikelet ความยาวกำหนดความยาวของ glume ล่าง ( ไม่มีระยะห่างของหนาม )ประมาณได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบสามมิติโดยใช้มาตราส่วนจักษุในที่ผ่าจากส่วนกลางของดอก เก็บในช่วงฤดูใบไม้ร่วง จำนวน 480 spikelet ความยาว ( 2 × 3 × 8 ระดับการปลูกดอก× 10 ที่ ) วัดแต่ละจีโนไทป์ .