DISCUSSIONWe generated recombinant

DISCUSSION
We generated recombinant NDV expressing either the wild-type or mutant HA gene of an H5N1 avian influenza virus using reverse genetics and evaluated its potential use as a bivalent vaccine against pathogenic influenza infection as well as against pathogenic NDV infection. After a single immunization dose, the recombinant viruses expressing wild-type or mutant HA induced a strong HI antibody response to NDV and H5 AIV in chickens and protected chickens from disease signs and deaths from highly pathogenic NDV. Most importantly, the vaccinated chickens were completely protected from homologous and heterologous H5N1 virus challenges and displayed no virus shedding, signs of disease, or deaths. We also determined that the recombinant virus expressing the wild-type HA could induce complete protection in mice against lethal doses of homologous and heterologous H5N1 virus challenges. Our results demonstrated that the recombinant viruses could work as live bivalent vaccines to provide protection against infection from highly pathogenic NDV and H5 influenza virus strains.
The vaccine efficacy of recombinant NDVs may be affected by several factors. The replication ability of the vector virus is an important determinant. Currently, two attenuated NDV strains, B1 and LaSota, have been used as vectors for recombinant vaccine construction. Swayne et al. (35) constructed a recombinant virus to express the HA gene of H7 avian influenza virus using the highly attenuated NDV B1 strain, and this recombinant virus only provided 40% protection against highly pathogenic H7 AIV or NDV challenge. The LaSota virus used in our experiments is less attenuated than the B1 strain, and our study as well as those of others indicate that the LaSota virus-based recombinant vaccine provides much better protection against both NDV and the targeted pathogen challenge than does the B1 strain (14, 38).
The insertion site of the foreign gene also affects the immunogenicity and vaccine efficacy of recombinant NDV. The genome of NDV contains six genes in the order of 3′-NP-P-M-F-HN-L-5′ (9). Expression levels of the proteins are attenuated in a sequential manner from the 3′ end to the 5′ end of the viral genome (17, 27). Huang et al. (14) inserted the VP2 gene of infectious bursal disease virus into the far 3′ end of the genome of NDV LaSota, and after a single dose the resultant virus only induced 90% protection against highly pathogenic Newcastle disease virus challenge, while the wild-type NDV virus induced 100% protection. We chose to insert the foreign HA gene within the NDV genome at a more 5′ position, where it would be assumed that expression of the foreign HA gene would be more attenuated than if the HA gene would have been inserted at the 3′ end of the genome, as chosen by Huang et al. These results may suggest that the overexpression of a foreign gene may impair the replication of the recombinant virus in vivo and diminish its efficacy as a vaccine.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อภิปรายเราสร้าง recombinant NDV แสดงแบบธรรมชาติหรือกลายพันธุ์ฮายีนของไวรัสไข้หวัดนก H5N1 การใช้พันธุกรรมย้อนกลับ และประเมินการใช้งานที่วัคซีน bivalent กับเชื้อไข้หวัดใหญ่ และโรค NDV ก่อโรค หลังจากยาฉีดวัคซีนเดี่ยว ไวรัส recombinant แสดงแบบธรรมชาติหรือกลายพันธุ์ HA เกิดแรง HI แอนติบอดีตอบสนอง NDV และ H5 AIV ในไก่ และป้องกันไก่อาการโรคและเสียชีวิตจาก NDV เกิด ที่สำคัญที่สุดคือ ไก่ vaccinated สมบูรณ์ได้รับการป้องกันจากเซทจะมี และ heterologous ท้าทายไวรัส H5N1 และแสดงไวรัสไม่ไหล อาการของโรค หรือเสียชีวิต นอกจากนี้เรายังกำหนดว่า ไวรัส recombinant แสดงความฮาแบบธรรมชาติอาจก่อให้เกิดการป้องกันที่สมบูรณ์ในหนูกับปริมาณยุทธภัณฑ์ heterologous และเซทจะมีปัญหาไวรัส H5N1 ผลของเราแสดงให้เห็นว่า ไวรัส recombinant สามารถทำงานเป็นวัคซีน bivalent สดเพื่อให้การป้องกันการติดเชื้อจากไข้หวัดใหญ่ NDV และ H5 เกิดไวรัสสายพันธุ์ประสิทธิภาพวัคซีนของ recombinant NDVs อาจได้รับผลกระทบจากปัจจัยหลาย ความสามารถในการจำลองแบบของไวรัสเวกเตอร์เป็นปัจจัยสำคัญ ขณะนี้ สอง attenuated NDV สายพันธุ์ B1 และ LaSota มีการใช้เป็นเวกเตอร์สำหรับการก่อสร้างวัคซีน recombinant Swayne et al. (35) สร้างไวรัสแสดงยีน HA ของไวรัสไข้หวัดนก H7 ใช้สายพันธุ์ NDV B1 สูง attenuated recombinant และไวรัส recombinant นี้มีสูงทำให้เกิดโรค H7 AIV หรือ NDV ท้าทายป้องกัน 40% เท่านั้น ไวรัส LaSota ที่ใช้ในการทดลองของเราคือ attenuated น้อยกว่าสาย พันธุ์ B1 และศึกษาของเรา เป็นของคนอื่นระบุว่า การ LaSota ไวรัส recombinant วัคซีนให้มากดีกว่าป้องกัน NDV และเชื้อโรคเป้าหมายท้าทายกว่าไม่เครียด B1 (14, 38)เว็บไซต์แทรกของยีนต่างประเทศยังมีผลต่อ immunogenicity และวัคซีนประสิทธิภาพของ recombinant NDV จีโน NDV ประกอบด้วยยีนหกลำดับ 3′-NP-P-M-F-HN-L-5′ (9) ระดับการแสดงออกของโปรตีนมี attenuated ในลักษณะต่อเนื่องจาก 3′ ที่ปลาย 5 ′ของจีโนไวรัส (17, 27) Huang et al. (14) แทรกยีน VP2 ของไวรัสอักเสบสิ้นไกล 3′ จีโน NDV LaSota และหลังครั้งเดียว ไวรัสผลลัพธ์เท่านั้นที่เกิด 90% ป้องกันสูงทำให้เกิดโรคนิวคาสเซิลโรคไวรัสท้าทาย ในขณะที่ไวรัส NDV ป่าชนิดเหนี่ยวนำให้เกิดการป้องกัน 100% เราเลือกที่จะใส่ยีน HA ต่างประเทศภายในกลุ่ม NDV ที่ตำแหน่ง 5 ′เพิ่มเติม ที่มันจะสันนิษฐานได้ว่า แสดงออกของยีน HA ต่างประเทศจะยิ่ง attenuated กว่าถ้ายีน HA จะแทรกแล้วจีโน ปลาย 3′ ที่เลือกโดย Huang et al ผลลัพธ์เหล่านี้อาจแนะนำที่ แสดงออกของยีนต่างประเทศอาจทำให้เสียการจำลองแบบของไวรัส recombinant ในร่างกาย และลดประสิทธิผลของวัคซีนเป็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การอภิปราย
ทางเราได้สร้าง recombinant NDV แสดงทั้งชนิดป่าหรือยีน HA กลายพันธุ์ของเชื้อไวรัสไข้หวัดนก H5N1 โดยใช้พันธุศาสตร์ย้อนกลับและประเมินผลการใช้งานที่มีศักยภาพในการเป็นวัคซีน bivalent ต่อการติดเชื้อที่ทำให้เกิดโรคไข้หวัดเช่นเดียวกับการติดเชื้อที่ทำให้เกิดโรค NDV หลังจากที่ปริมาณการฉีดวัคซีนเดียวไวรัส recombinant แสดงชนิดป่าหรือกลายพันธุ์ HA เหนี่ยวนำให้เกิดการตอบสนองของแอนติบอดีที่แข็งแกร่งสวัสดี NDV และ H5 AIV ในไก่ไก่และการป้องกันจากอาการของโรคและการเสียชีวิตจากโรคสูง NDV สิ่งสำคัญที่สุดคือการฉีดวัคซีนไก่ได้รับการคุ้มครองอย่างสมบูรณ์จากความท้าทายไวรัส H5N1 คล้ายคลึงกันและ heterologous และแสดงไม่มีการไหลไวรัสอาการของโรคหรือการเสียชีวิต นอกจากนี้เรายังระบุว่าไวรัส recombinant แสดงชนิดป่า HA สามารถเหนี่ยวนำให้เกิดการป้องกันที่สมบูรณ์ในหนูกับปริมาณตายของความท้าทายไวรัส H5N1 คล้ายคลึงกันและ heterologous ผลของเราแสดงให้เห็นว่าไวรัส recombinant วัคซีนสามารถทำงานเป็น bivalent สดเพื่อให้การป้องกันการติดเชื้อจากการเกิดโรคสูง NDV และสายพันธุ์ H5 เชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่.
ประสิทธิภาพของวัคซีน NDVs recombinant อาจได้รับผลกระทบจากปัจจัยหลายประการ ความสามารถในการจำลองแบบของไวรัสเวกเตอร์เป็นปัจจัยสำคัญ ปัจจุบันทั้งสองสายพันธุ์ NDV จาง B1 และ Lasota ได้ถูกใช้เป็นพาหะในการก่อสร้าง recombinant วัคซีน Swayne et al, (35) สร้างไวรัส recombinant จะแสดงยีน HA ของเชื้อไวรัสไข้หวัดนก H7 ใช้จางสูง NDV B1 ความเครียดและไวรัส recombinant นี้ให้เฉพาะการป้องกัน 40% เมื่อเทียบกับ AIV H7 ทำให้เกิดโรคสูงหรือ NDV ท้าทาย ไวรัส Lasota ใช้ในการทดลองของเราคือการยับยั้งน้อยกว่า B1 สายพันธุ์และการศึกษาของเราเช่นเดียวกับคนอื่น ๆ แสดงให้เห็นว่าวัคซีน recombinant Lasota ไวรัสตามให้การป้องกันที่ดีมากกับทั้ง NDV และความท้าทายเชื้อโรคที่กำหนดเป้าหมายกว่าไม่ B1 สายพันธุ์ (14, 38).
เว็บไซต์แทรกของยีนต่างประเทศยังมีผลต่อการกระตุ้นภูมิคุ้มกันและวัคซีนประสิทธิภาพของ recombinant NDV จีโนมของ NDV มีหกยีนในคำสั่งของ 3'-NP-PMF-HN-L-5 '(9) ระดับการแสดงออกของโปรตีนที่มีการยับยั้งในลักษณะที่ต่อเนื่องมาจากปลาย 3 'ไป 5' ในตอนท้ายของจีโนมของไวรัส (17, 27) Huang et al, (14) แทรกยีน VP2 ของไวรัสโรคติดเชื้อ Bursal เข้าไปไกล 3 จุดสิ้นสุดของจีโนมของ NDV Lasota และหลังจากครั้งเดียวไวรัสผลลัพธ์เหนี่ยวนำให้เกิดการคุ้มครองเพียง 90% เมื่อเทียบกับที่ทำให้เกิดโรคนิวคาสเซิสูงท้าทายไวรัสโรคขณะ wild- พิมพ์ NDV ไวรัสเหนี่ยวนำให้เกิดการคุ้มครอง 100% เราเลือกที่จะใส่ยีน HA ต่างประเทศในจีโนม NDV ที่ 5 'ตำแหน่งที่มันจะได้รับการสันนิษฐานว่าการแสดงออกของยีน HA ต่างประเทศจะจางกว่าถ้ายีน HA จะได้รับการแทรกที่ 3' มากขึ้นในตอนท้ายของ จีโนมตามที่เลือกโดย Huang et al, ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่าอาจแสดงออกของยีนที่ต่างประเทศอาจทำให้เสียการจำลองแบบของไวรัส recombinant ในร่างกายและลดความรู้ความสามารถของตนเป็นวัคซีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การอภิปรายเราสร้างรีคอมบิแนนท์ ndv การแสดงออกของยีนกลายพันธุ์ หรือทั้งฮาของเชื้อไวรัสไข้หวัดนก H5N1 โดยใช้กลับพันธุศาสตร์ และประเมินศักยภาพของวัคซีนที่ใช้ไบวาเลนท์กับโรคติดเชื้อไข้หวัดใหญ่ รวมทั้งต่อต้านการติดเชื้อ ndv เชื้อโรค . หลังจากการใช้ยาเดี่ยว หรือกลายพันธุ์ของไวรัสแสดงฮาและแข็งแรงไง แอนติบอดี และการ ndv h5 aiv ในไก่และป้องกันไก่จากสัญญาณโรคและการตายจากโรคสูง ndv . ที่สำคัญที่สุดก็คือ วัคซีนไก่ถูกป้องกันจากไวรัสไข้หวัดนก H5N1 ชนิดและเปรียบเทียบความท้าทายและแสดงไม่มีไวรัส การไหล มีอาการของโรค หรือเสียชีวิต เราพบว่า ยีนของไวรัสแสดงฮาอาจทำให้เกิดการป้องกันที่สมบูรณ์ในหนูกับร้ายแรงขนาดคล้ายคลึงกันไวรัสไข้หวัดนก H5N1 ชนิดและความท้าทาย ผลของเราแสดงให้เห็นว่าโปรตีนที่ไวรัสสามารถทำงานเป็นไลฟ์ไบแวเลนท์วัคซีนป้องกันการติดเชื้อจากเชื้อโรค และ ndv สูง h5 ไวรัสไข้หวัดใหญ่สายพันธุ์ประสิทธิภาพของวัคซีน recombinant ndvs อาจได้รับผลกระทบจากหลายปัจจัย การปรับปรุงความสามารถของเวกเตอร์ไวรัส เป็นปัจจัยที่สำคัญ ขณะนี้สองเป็น ndv สายพันธุ์ B1 และ lasota ได้ถูกใช้เป็นพาหะสำหรับการสร้างรีคอมบิแนนท์วัคซีน . สเวน et al . ( 3 ) สร้างไวรัส recombinant แสดงฮายีนของไวรัสไข้หวัดใหญ่ H7 ใช้สูงเป็น ndv B1 ความเครียดและไวรัส recombinant นี้ให้เฉพาะป้องกัน 40% ต่อโรคสูง ) aiv หรือท้าทาย ndv . ที่ใช้ในการทดลอง lasota ไวรัสของเราจะน้อยลง บางกว่าสายพันธุ์ B1 และการศึกษาของเรา รวมทั้งของผู้อื่น พบว่า lasota ไวรัส recombinant วัคซีนพื้นฐานให้มากดีกว่า ป้องกันทั้ง ndv และเป้าหมายนี้ท้าทายมากกว่าสายพันธุ์ B1 ( 14 , 38 )ใส่เว็บไซต์ของยีนต่างชาติยังสามารถส่งผลกระทบต่อประสิทธิภาพของวัคซีน recombinant และ ndv . พันธุกรรมของยีนใน ndv มีหกลำดับ 3 ’ - ’ np-p-m-f-hn-l-5 ( 9 ) ระดับการแสดงออกของโปรตีนยับยั้งในลักษณะต่อเนื่องจาก 3 ปลาย 5 ’’สิ้นสุดของจีโนมของไวรัส ( 17 , 27 ) หวง et al . ( 14 ) แทรกยีน vp2 ติดเชื้อโรคไวรัสใน bursal ไกล 3 ดูแลสิ้นสุดของจีโนมของ ndv lasota และหลังจากไวรัสดังกล่าวเพียงครั้งเดียวและ 90% การป้องกันต่อต้านเชื้อโรคไวรัสโรคนิวคาสเซิล อย่างท้าทาย ในขณะที่ของ ndv การป้องกันไวรัส 100% เราเลือกที่จะใส่ฮาต่างประเทศจีนภายใน ndv จีโนมที่ได้รับอีก 5 ตำแหน่ง ซึ่งมันจะสันนิษฐานว่า การแสดงออกของยีน ฮา ต่างประเทศจะบางกว่าถ้า ฮา ยีนจะถูกแทรกที่ 3 ได้รับการสิ้นสุดของจีโนมที่เลือกโดย Huang et al . ผลลัพธ์เหล่านี้อาจแสดงให้เห็นว่า overexpression ของยีนต่างชาติอาจจะบั่นทอนประสิทธิภาพในการจำลองแบบของไวรัส ยีนในร่างกายและลดประสิทธิภาพของมันเป็นวัคซีน