MethodsOrganisms and chemicalsIn th

Methods
Organisms and chemicals

In this study, the antibacterial activity of TQ was tested on 11 Human pathogenic strains including Gram negative bacilli: Escherichi coli ATCC 35218, Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 14028, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Vibrio alginolyticus ATCC 33787, Vibrio paraheamolyticus ATCC 17802; Gram positive bacilli: Bacillus cereus ATCC 14579, Listeria monocytogene ATCC 19115 and Gram positive cocci: Enterococcus faecalis ATCC 29212, Micrococcus luteus NCIMB 8166, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis CIP 106510 (Table ​(Table11).

Table 1
Table 1
Antibacterial activity of thymoquinone against Human pathogenics strains
TQ, gentamycin and erythromycin was purchased from Sigma (Sigma-Aldrich, Switzerland).

Minimum inhibitory concentration determination

The broth microdilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of TQ (0 to 512 μg/ml), gentamycin (0 to 256 μg/ml) and erythromycin (0 to 256 μg/ml) as recommended by the National Committee for Clinical Laboratory Standards Institute [25].

An overnight culture (37°C) of the tested strains were diluted 10-fold in fresh tryptic soy broth (TSB) and incubated (37°C) until they reached exponential growth phase. Serial two-fold dilutions of TQ in Mueller Hinton (MH) Broth (Biorad, France) were prepared in a 96-wells plate (190 μL per well).

The inocula (10 μL) containing 5. 106 cfu/ml of each reference strain were added to each well and the tested compound. A number of wells were reserved in each plate to test the sterility control of the medium (no inoculum added) and inoculum viability (no compound added).

After incubation for 24 h at 37°C, bacterial growth was evaluated by the presence of turbidity and a pellet on the well bottom. The MIC was defined as the concentration that completely inhibited visible cell growth during a 24-h incubation period at 37°C

Minimum bactericidal concentration determination

To determine the minimum bactericidal concentration (MBC) values, 10 μL of each well medium with no visible growth was removed and inoculated in MH plates. After 24 h of incubation at 37°C, the number of surviving organisms was determined. MBC was defined as the lowest concentration at which 99% of the bacteria were killed. Each experiment was repeated at least twice [26].

Effect of Thymoquinone on biofilm formation

Crystal Violet assay

TQ was tested for its potential to prevent biofilm formation of four reference strains (Table ​(Table2).2). The TQ was added to the growth medium at the time of inoculation and the cells were allowed to form biofilms [6]. Prevention of biofilm formation by TQ was examined by microdilution, similar to the MIC assay for planktonic cells. A two-fold serial dilution was prepared in 96-well polystyrene tissue culture plates containing TSB broth with 2% glucose (w/v), with final concentrations of TQ ranging from 0 to 512 μg/ml.

Table 2
Table 2
Antibiofilm effect of thymoquinone against four positive biofilm strains
The medium without TQ was used as the non-treated well and the medium with TQ as the blank control. Aliquots of bacterial suspension (10 μl) were inoculated in tissue culture plate wells (5.104 cfu/ml, final concentration). Following incubation at 37°C for 24h, culture supernatants from each well were decanted and planktonic cells were removed by washing three times with phosphate-buffered saline (7 mM Na2HPO4, 3 mM NaH2PO4 and 130 mM NaCl at pH 7.4). Cells in biofilm were fixed with methanol during 15 min, air dried and stained with 1% crystal violet [27]. Biofilm formation was quantified by measuring the absorbance at 595 nm using a microplate reader (GIO. DE VITA E C, Italy).

In order to asses the ability of TQ to prevent biofilm formation, the percentage of biofilm inhibition was calculated using the equation [(OD growth control _ OD sample)/OD growth control] × 100 [6]. Each assay was repeated three times.

The minimum biofilm inhibition concentration (MBIC50) was defined as the lowest concentration of TQ that showed 50% inhibition on the biofilm formation.

Assessment of biofilm metabolic activity using XTT reduction assay

The metabolic activity of cells in biofilm was assessed using the XTT [2, 3-bis (2-methyloxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide] reduction assay according to methods described previously [6,28] which measures the reduction of a tetrazolium salt by metabolically active cells to a coloured water soluble formazan derivative that can be easily quantified colorimetrically.

A two-fold serial dilution of TQ (final concentrations from 0 to 512 μg/ml) was prepared in 96-well polystyrene tissue culture plates containing TSB broth with 2% glucose (w/v). Than the plates were inoculated in the same way as described for crystal violet assay.

XTT (Sigma-Aldrich, Switzerland) solution (1 mg/ml) was prepared in PBS, filter sterilized and stored at -80°C. Menadione (Sigma-Aldrich, Switzerland) solution (1 mM) was prepared in acetone and sterilized immediately before each assay.

Following incubation, the biofilms were first washed five times with PBS, and then 100 μl PBS and 12 μl XTT-menadione solution (12.5:1 v/v) were added to each of the prewashed wells and the control wells. The plate was then incubated for 3 h in the dark at 37°C. Following incubation, 100 μl of the solution was transferred to fresh wells, and the colour change in the solution was measured with a multiskan reader at 492 nm. The absorbance values for the controls were then subtracted from the values of the tested wells to eliminate spurious results due to background interference.

The percentage of biofilm inhibition was calculated using the equation [(OD growth control _ OD sample)/OD growth control] × 100. Each assay was repeated three times.

Microscopic techniques

Prevention of biofilm formation by TQ was confirmed by microscopic technique. Briefly, strains were allowed to grow on round covers glass slides (diameter 1 cm) placed in 24-well polystyrene plates (Greiner Bio-One, France) supplemented with TQ (0, MIC, 2 × MIC), incubated for 24 h at 37°C and stained with 1/20 Giemsa (Sigma, Switzerland) solution (v/v) for 20 min at room temperature. Stained glass pieces were placed on slides with the biofilm pointing up and were inspected by light microscopy at magnifications X100.

Statistical analysis

Statistical analysis was performed on SPSS v.17.0 statistics software. Statistical differences and significance were assessed by one-way ANOVA test and Wilcoxon signed ranks test, as appropriate, to evaluate the biofilm inhibition according the type of strains and the TQ supplementation. A P value < 0.05 was considered significant.

Go to:
Results
Effect of thymoquinone on viability of planktonic cells

TQ demonstrated selective antimicrobial properties. As presented in table ​table1,1, it exhibited bactericidal activity on 7 out of 11 tested strains with MIC and MBC values ranging from 8 to 32 μg/ml and 8 to 64 μg/ml, respectively. This activity is nearly similar to the tested antibiotics (gentamycin and erythromycin). However, Gram negative bacilli (Escherichia coli ATCC 35218, Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 14028, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853), seem to be resistant to TQ action (MIC and MBC > 512 μg/ml). We noted also that the MBC values of TQ were 2-4 times higher than the MICs values.
TQ exhibited a significant bactericidal activity against the majority of the tested bacteria (MICs values ranged from 8 to 32 μg/ml) especially Gram positive cocci (Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Staphylococcus epidermidis CIP 106510). Crystal violet assay demonstrated that the minimum biofilm inhibition concentration (BIC50) was reached with 22 and 60 μg/ml for Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Staphylococcus epidermidis CIP 106510 respectively. In addition our data revealed that cells oxidative activity was influenced by TQ supplementation. In the same way, TQ prevented cell adhesion to glass slides surface.

Conclusion

The ability of TQ to prevent biofilm formation warrants further investigation to explore its use as bioactive substances with antibiofilm potential.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการสิ่งมีชีวิตและสารเคมีในการศึกษานี้ ทดสอบกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของ TQ ใน 11 มนุษย์อุบัติสายพันธุ์รวมถึงกรัมลบ bacilli: Escherichi coli ATCC 35218 ซัล enterica serovar Typhimurium ATCC 14028, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ผล alginolyticus ATCC 33787, paraheamolyticus ต่อ ATCC 17802 กรัมบวก bacilli: คัด cereus ATCC 14579 กรัมบวก cocci และออลิ monocytogene ATCC 19115: Enterococcus faecalis ATCC 29212 รำ luteus NCIMB 8166 หมอเทศข้างลาย Staphylococcus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis CIP 106510 (ตาราง (Table11)ตารางที่ 1ตารางที่ 1กิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของ thymoquinone กับสายพันธุ์มนุษย์ pathogenicsTQ, gentamycin และ erythromycin ถูกซื้อจากซิก (Aldrich ซิก สวิตเซอร์แลนด์)ลิปกลอสไขสมาธิขั้นต่ำกำหนดวิธีซุป microdilution ถูกใช้เพื่อกำหนดความเข้มข้นลิปกลอสไขต่ำสุด (MIC) และต่ำสุด bactericidal เข้มข้น (ช่อง MBC) TQ (0 ถึง 512 μg/ml), gentamycin (0-256 μg/ml) และ erythromycin (μg 0-256 มล.) แนะนำ โดยคณะกรรมการแห่งชาติสำหรับ สถาบันมาตรฐานห้องปฏิบัติการทางคลินิก [25]วัฒนธรรมการค้างคืน (37° C) ของสายพันธุ์ทดสอบได้แตกออก 10-fold ในซอย tryptic สดซุป (TSB) และ incubated (37° C) จนกว่าจะถึงระยะเติบโตเนน อนุกรมสองพับ dilutions ของ TQ ในซุป Mueller Hinton (MH) (Biorad ฝรั่งเศส) ได้เตรียมจาน 96 บ่อ (190 μL ต่อดี)การ inocula (10 μL) ประกอบด้วย 5 106 cfu/ml ของแต่ละต้องใช้อ้างอิงได้เพิ่มดีแต่ละและบริเวณทดสอบ จำนวนบ่อถูกสำรองในแต่ละแผ่นเพื่อทดสอบการควบคุม sterility ปานกลาง (inoculum ไม่เพิ่ม) และชีวิต inoculum (สารประกอบไม่เพิ่ม)หลังจากฟักตัวใน 24 ชมที่ 37° C เจริญเติบโตของแบคทีเรียถูกประเมิน โดยสถานะของความขุ่นของน้ำและเม็ดล่างดี MIC ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นที่สมบูรณ์ห้ามเห็นเซลล์เจริญเติบโตช่วง 24 h บ่มที่ 37° Cกำหนดสมาธิต่ำ bactericidalการกำหนดค่าความเข้มข้น bactericidal ต่ำสุด (ช่อง MBC) μL 10 ของแต่ละสื่อดีมีเจริญเติบโตไม่สามารถมองเห็นได้ถูกเอาออก และ inoculated ในแผ่น MH หลังจาก 24 ชมของการบ่มที่ 37° C มีกำหนดหมายเลขของสิ่งมีชีวิตที่รอดตาย ช่อง MBC ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่ 99% ของแบคทีเรียจะถูกฆ่าตาย ทดลองแต่ละไม่ซ้ำอย่างน้อยสองครั้ง [26]ผลของ Thymoquinone ก่อ biofilmคริสตัลไวโอเลตทดสอบTQ ได้ทดสอบศักยภาพเพื่อป้องกัน biofilm การก่อตัวของสายพันธุ์อ้างอิง 4 (ตาราง (Table2) 2) เข้ามา TQ ปานกลางเจริญเติบโตเวลา inoculation และเซลล์ได้รับอนุญาตให้ฟอร์ม biofilms [6] ป้องกันการก่อตัว biofilm โดย TQ ถูกตรวจสอบ โดย microdilution คล้ายกับทดสอบ MIC สำหรับเซลล์ planktonic เจือจางเป็นลำดับสองพับเตรียมไว้ใน TSB ซุป ด้วยน้ำตาลกลูโคส 2% (w/v), ประกอบด้วยแผ่นเยื่อ 96 ดีโฟม มีความเข้มข้นสุดท้ายของ TQ ตั้งแต่ 0 ถึง 512 μg/mlตารางที่ 2ตารางที่ 2ผล Antibiofilm ของ thymoquinone กับสายพันธุ์ biofilm บวกสี่ใช้สื่อ โดย TQ เป็นไม่ใช่ถือว่าดีและปานกลางกับ TQ เป็นตัวควบคุมว่างเปล่า Aliquots ระงับแบคทีเรีย (10 μl) ถูก inoculated ในบ่อแผ่นเนื้อเยื่อ (5.104 cfu/ml ความเข้มข้นสุดท้าย) ขั้นบ่มที่ 37° C ใน 24h, supernatants วัฒนธรรมจากแต่ละบ่อมี decanted และเซลล์ planktonic ถูกเอาออก โดยการซักผ้าครั้งที่สามกับ buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (7 mM Na2HPO4, 3 mM NaH2PO4 และ 130 มม. NaCl ที่ pH 7.4) เซลล์ใน biofilm ได้ถาวร ด้วยเมทานอลในนาทีที่ 15 อากาศแห้ง และสี มี 1% คริสตัลไวโอเลต [27] ผู้แต่ง Biofilm ได้ quantified โดยวัด absorbance ที่ 595 nm ใช้อ่าน microplate (จีโอ เดวีตา E C อิตาลี)ในการประเมิน ความสามารถของ TQ เพื่อป้องกัน biofilm ก่อ เปอร์เซ็นต์การยับยั้ง biofilm ถูกคำนวณโดยใช้ฟิลด์ [ควบคุมการเจริญเติบโต /OD (OD เจริญเติบโตควบคุม_ OD อย่าง)] ของสมการ 100 [6] วิเคราะห์แต่ละไม่ซ้ำกันสามครั้งความเข้มข้นยับยั้ง biofilm ต่ำสุด (MBIC50) ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของ TQ ที่แสดงให้เห็นว่า 50% ยับยั้งการจัดตั้ง biofilmประเมินกิจกรรมเผาผลาญ biofilm ที่ใช้ทดสอบลด XTTกิจกรรมการเผาผลาญของเซลล์ใน biofilm ได้ประเมินการใช้ XTT [2, 3-bis (2-methyloxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide] ลดวิเคราะห์ตามวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [6,28] ซึ่งมาตรการการลดเกลือ tetrazolium โดยอนุพันธ์ formazan น้ำละลายสีที่สามารถได้อย่างง่ายดาย quantified colorimetrically metabolically งานเซลล์เจือจางเป็นลำดับสองพับของ TQ (สุดท้ายความเข้มข้น 0 ถึง 512 μg/ml) ถูกเตรียมใน 96-ดีโฟมเยื่อแผ่นประกอบด้วย TSB ซุป ด้วยน้ำตาลกลูโคส 2% (w/v) กว่าแผ่นก็ inoculated เดียวตามที่อธิบายไว้สำหรับทดสอบคริสตัลไวโอเลตXTT (Aldrich ซิก สวิตเซอร์แลนด์) โซลูชั่น (1 mg/ml) ถูกเตรียมใน PBS กรอง sterilized และเก็บไว้ที่-80 องศาเซลเซียส Menadione (Aldrich ซิก สวิตเซอร์แลนด์) โซลูชั่น (1 มิลลิเมตร) ถูกเตรียมในอะซิโตน และ sterilized ทันทีก่อนการทดสอบแต่ละต่อคณะทันตแพทยศาสตร์ biofilms ถูกล้างห้าครั้งแรก ด้วย PBS และ PBS 100 μl และมีเพิ่ม μl 12 XTT menadione โซลูชัน (v 12.5:1 v) แต่ละบ่อ prewashed และบ่อควบคุม จานแล้วมี incubated สำหรับ 3 h ในมืดที่ 37 องศาเซลเซียส ต่อคณะทันตแพทยศาสตร์ μl 100 โซลูชันถูกโอนย้ายไปบ่อสด และการเปลี่ยนแปลงสีในโซลูชันถูกวัด ด้วยเครื่องอ่าน multiskan ที่ 492 nm ค่า absorbance ของตัวควบคุมได้แล้วหักออกจากค่าของบ่อทดสอบเพื่อกำจัดผลปลอมเนื่องจากสัญญาณรบกวนพื้นหลังมีคำนวณเปอร์เซ็นต์การยับยั้ง biofilm ใช้ในสมการ [ควบคุมการเจริญเติบโต /OD (OD เจริญเติบโตควบคุม_ OD อย่าง)] × 100 วิเคราะห์แต่ละไม่ซ้ำกันสามครั้งเทคนิคกล้องจุลทรรศน์ป้องกันการก่อตัว biofilm โดย TQ ถูกยืนยัน โดยเทคนิคการใช้กล้องจุลทรรศน์ สั้น ๆ สายพันธุ์ที่สามารถเติบโตบนกระจกสไลด์แบบครอบคลุมรอบ (เส้นผ่าศูนย์กลาง 1 ซ.ม.) วางโฟมดี 24 แผ่น (Greiner ชีวภาพหนึ่ง ฝรั่งเศส) เสริม ด้วย TQ (0, MIC, 2 × MIC), incubated ใน 24 ชมที่ 37° C และสี มี 1/20 Giemsa (ซิก สวิตเซอร์แลนด์) โซลูชั่น (v/v) สำหรับ 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ชิ้นงานกระจกถูกวางบนภาพนิ่งกับ biofilm ชี้ขึ้น และถูกตรวจสอบ โดยแสง microscopy ที่ขนาด X 100วิเคราะห์ทางสถิติวิเคราะห์ทางสถิติทำโปรแกรม v.17.0 สถิติซอฟต์แวร์ ประเมินความสำคัญและความแตกต่างทางสถิติ โดยการทดสอบการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวและทดสอบ Wilcoxon ยศเซ็นชื่อ ตามความเหมาะสม การประเมินยับยั้ง biofilm ตามชนิดของสายพันธุ์และแห้งเสริม TQ P เป็นค่า < 0.05 ถือเป็นสำคัญลุยเลย:ผลลัพธ์ผลของ thymoquinone ชีวิตของเซลล์ planktonicTQ แสดงคุณสมบัติใช้ต้านจุลชีพ ตามที่แสดงในตาราง table1, 1 จะจัดแสดงกิจกรรม bactericidal ใน 7 จาก 11 ทดสอบสายพันธุ์ มีค่า MIC และช่อง MBC ตั้งแต่ 8 μg 32 ml และ 8 การ 64 μg/ml ตามลำดับ กิจกรรมนี้เป็นเกือบคล้ายกับยาปฏิชีวนะทดสอบ (gentamycin และ erythromycin) อย่างไรก็ตาม กรัมลบ bacilli (Escherichia coli ATCC 35218 ซัล enterica serovar Typhimurium ATCC 14028, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853), ดูเหมือนจะทนต่อการกระทำ TQ (MIC และช่อง MBC > 512 μg/ml) เราระบุยังว่า ค่าช่อง MBC TQ มี 2 - 4 ครั้งสูงกว่าค่า MICsTQ จัดแสดงกิจกรรมเป็น bactericidal สำคัญกับส่วนใหญ่ของแบคทีเรียทดสอบ (MICs ค่าอยู่ในช่วงจาก 8 ถึง 32 μg/ml) โดยเฉพาะอย่างยิ่งกรัมบวก cocci (หมอเทศข้างลาย Staphylococcus ATCC 25923 และ Staphylococcus epidermidis CIP 106510) คริสตัลไวโอเลตทดสอบแสดงว่า ความเข้มข้นยับยั้ง biofilm ต่ำสุด (BIC50) ถึงกับ 22 และ 60 μg/ml สำหรับหมอเทศข้างลาย Staphylococcus ATCC 25923 และ Staphylococcus epidermidis CIP 106510 ตามลำดับ นอกจากนี้ ข้อมูลของเราเปิดเผยว่า เซลล์ oxidative กิจกรรมได้รับอิทธิพลจากแห้งเสริม TQ เดียว TQ ป้องกันไม่ให้เซลล์ยึดเกาะพื้นผิวกระจกสไลด์บทสรุปความสามารถของ TQ เพื่อป้องกัน biofilm ก่อวอร์แรนต์เพิ่มเติมตรวจสอบการใช้เป็นสารกรรมการกกับ antibiofilm เป็นไปได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการ
มีชีวิตและสารเคมีในการศึกษานี้ฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของ TQ ถูกทดสอบเมื่อวันที่ 11 สายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคของมนุษย์รวมทั้งแกรมแบคทีเรียลบ: Escherichi coli ATCC 35218, Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 14028, เชื้อ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Vibrio alginolyticus ATCC 33787, Vibrio paraheamolyticus ATCC 17802; แกรมแบคทีเรียบวกเชื้อ Bacillus cereus ATCC 14579, Listeria monocytogene ATCC 19115 และแกรมบวก Cocci. Enterococcus faecalis ATCC 29212, Micrococcus luteus NCIMB 8166, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis CIP 106510 (ตาราง (Table11) ตารางที่ 1 ตารางที่ 1 ฤทธิ์ต้านแบคทีเรีย ของ thymoquinone กับ pathogenics มนุษย์สายพันธุ์TQ, Gentamycin และ erythromycin ซื้อมาจากซิกม่า (Sigma-Aldrich วิตเซอร์แลนด์). การกำหนดความเข้มข้นขั้นต่ำวิธี microdilution น้ำซุปถูกใช้ในการตรวจสอบความเข้มข้นต่ำสุด (MIC) และต่ำสุดเข้มข้นของเชื้อแบคทีเรีย (MBC) ของ TQ (0-512 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) Gentamycin (0-256 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) และ erythromycin (0-256 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ตามคำแนะนำของคณะกรรมการแห่งชาติเพื่อกำหนดมาตรฐานห้องปฏิบัติการทางคลินิกสถาบัน [25]. วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืน (37 องศา C) ของสายพันธุ์ถูกเจือจาง 10 เท่าในน้ำซุปสดถั่วเหลือง tryptic (TSB) และบ่ม (37 ° C) จนกว่าพวกเขาจะมาถึงขั้นตอนการเจริญเติบโต. อนุกรมเจือจางสองเท่าของ TQ ในมูลเลอร์ฮินตัน (MH) น้ำซุป (Biorad, ฝรั่งเศส) ได้จัดทำแผ่น 96 หลุม (190 ไมโครลิตรต่อกัน). inocula (10 ไมโครลิตร) ที่มี 5. 106 cfu / ml ความเครียดอ้างอิงแต่ละถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีและสารประกอบที่ผ่านการทดสอบ จำนวนของหลุมถูกสงวนไว้ในแต่ละจานที่จะทดสอบการควบคุมความแห้งแล้งของกลาง (ไม่มีเชื้อที่เพิ่มขึ้น) และมีศักยภาพในการเพาะเลี้ยงเชื้อ (สารประกอบไม่เพิ่ม). หลังจากการบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเจริญเติบโตของแบคทีเรียได้รับการประเมินโดยการปรากฏตัวของความขุ่น และเม็ดที่ด้านล่างได้ดี MIC ได้รับการกำหนดให้เป็นความเข้มข้นที่สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์อย่างสมบูรณ์มองเห็นได้ในช่วงระยะเวลาการบ่ม 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสต่ำสุดการกำหนดความเข้มข้นของแบคทีเรียการตรวจสอบความเข้มข้นของแบคทีเรียขั้นต่ำ (MBC) ค่า, 10 ไมโครลิตรของแต่ละสื่อดีที่ไม่มีการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้คือ เอาออกไปและเชื้อในแผ่น MH หลังจาก 24 ชั่วโมงของการบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C จำนวนที่รอดตายมีชีวิตที่ถูกกำหนด MBC ได้รับการกำหนดให้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่ 99% ของเชื้อแบคทีเรียที่ถูกฆ่าตาย แต่ละทดลองซ้ำอย่างน้อยสองครั้ง [26]. ผลของ thymoquinone ในไบโอฟิล์มก่อทดสอบคริสตัลสีม่วงTQ ได้รับการทดสอบที่มีศักยภาพในการป้องกันการก่อตัวของไบโอฟิล์มสี่สายพันธุ์อ้างอิง (ตาราง (Table2) 0.2) TQ ถูกบันทึกอยู่ในสื่อการเจริญเติบโตในช่วงเวลาของการฉีดวัคซีนและเซลล์ที่ได้รับอนุญาตในรูปแบบไบโอฟิล์มได้ [6] ป้องกันการก่อตัวของไบโอฟิล์มโดย TQ ได้รับการตรวจสอบโดย microdilution คล้ายกับการทดสอบ MIC สำหรับเซลล์ planktonic สองเท่าเจือจางอนุกรมถูกจัดทำขึ้นใน 96 หลุมจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อสไตรีนที่มีน้ำซุป TSB กับกลูโคส 2% (w / v) ที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของ TQ ตั้งแต่ 0-512 ไมโครกรัม / มล. ตารางที่ 2 ตารางที่ 2 Antibiofilm ผลกระทบของ thymoquinone กับสี่บวกไบโอฟิล์มสายพันธุ์ขนาดกลางโดยไม่ต้อง TQ ถูกใช้เป็นที่ไม่ได้รับการรักษาอย่างดีและขนาดกลางที่มี TQ เป็นควบคุมว่างเปล่า ส่วนลงตัวของการระงับแบคทีเรีย (10 ไมโครลิตร) ถูกเชื้อในบ่อจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ (5,104 cfu / ml เข้มข้นสุดท้าย) ต่อไปบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, supernatants วัฒนธรรมจากแต่ละดีถูก decanted และเซลล์ planktonic ถูกถอดออกโดยการล้างสามครั้งด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (7 มิลลิเมตร Na2HPO4 3 มิลลิ NaH2PO4 และ 130 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ที่ pH 7.4) เซลล์ในไบโอฟิล์มได้รับการแก้ไขด้วยเมทานอลในช่วง 15 นาทีอากาศแห้งและย้อมด้วยสีม่วง 1% คริสตัล [27] การสร้างไบโอฟิล์มได้รับการวัดโดยการวัดการดูดกลืนแสงที่ 595 นาโนเมตรโดยใช้ผู้อ่าน microplate (GIO. ชีวประวัติ EC, อิตาลี). เพื่อที่จะประเมินความสามารถในการ TQ เพื่อป้องกันไม่ให้เกิดฟิล์มจุลินทรีย์ร้อยละของการยับยั้งไบโอฟิล์มที่คำนวณโดยใช้สมการ [( OD ควบคุมการเจริญเติบโตของ _ OD ตัวอย่าง) / OD ควบคุมการเจริญเติบโต] × 100 [6] การทดสอบแต่ละซ้ำสามครั้ง. ความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้งไบโอฟิล์ม (MBIC50) ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของ TQ ที่แสดงให้เห็นการยับยั้ง 50% สำหรับการสร้างไบโอฟิล์ม. ประเมินกิจกรรมการเผาผลาญไบโอฟิล์มโดยใช้การทดสอบการลด xtt กิจกรรมการเผาผลาญของเซลล์ในไบโอฟิล์มเป็น การประเมินโดยใช้ xtt [2, 3-Bis (2-methyloxy-4-Nitro-5-sulfophenyl) -2H-tetrazolium-5-carboxanilide] ทดสอบลดลงตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [6,28] ซึ่งมาตรการการลดลงของ เกลือ tetrazolium โดยเซลล์ที่ใช้งานในการเมตาบอลิน้ำสีอนุพันธ์ formazan ละลายน้ำที่สามารถวัดได้อย่างง่ายดาย colorimetrically. สองเท่าเจือจางอนุกรมของ TQ (ความเข้มข้นสุดท้าย 0-512 ไมโครกรัม / มล.) ได้จัดทำขึ้นใน 96 หลุมจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่มีสไตรีน น้ำซุป TSB กับกลูโคส 2% (w / v) กว่าเพลถูกเชื้อในลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้สำหรับการทดสอบสีม่วงคริสตัล. xtt (Sigma-Aldrich วิตเซอร์แลนด์) วิธีการ (1 mg / ml) ถูกจัดทำขึ้นในพีบีเอส, กรองผ่านการฆ่าเชื้อและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส Menadione (Sigma-Aldrich วิตเซอร์แลนด์) วิธีการ (1 มิลลิ) ถูกจัดทำขึ้นในอะซีโตนและฆ่าเชื้อทันทีก่อนที่แต่ละการทดสอบ. หลังจากบ่มไบโอฟิล์มได้รับการล้างครั้งแรกห้าครั้งกับพีบีเอสแล้ว 100 ไมโครลิตรพีบีเอสและ 12 ไมโครลิตรแก้ปัญหา xtt-menadione ( 12.5: 1 v / v) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละหลุม prewashed และควบคุมหลุม แผ่นถูกบ่มแล้วเวลา 3 ชั่วโมงในที่มืดที่อุณหภูมิ 37 ° C ต่อไปนี้การบ่ม 100 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหาที่ถูกย้ายไปหลุมสดและเปลี่ยนสีในการแก้ปัญหาได้รับการวัดที่มีผู้อ่าน multiskan ที่ 492 นาโนเมตร ค่าการดูดกลืนแสงสำหรับการควบคุมที่ถูกหักออกจากค่าของหลุมทดสอบเพื่อขจัดผลปลอมเนื่องจากการรบกวนพื้นหลัง. ร้อยละของการยับยั้งไบโอฟิล์มที่คำนวณโดยใช้สมการ [(OD ควบคุมการเจริญเติบโตของ _ OD ตัวอย่าง) / OD ควบคุมการเจริญเติบโต] × 100. แต่ละการทดสอบซ้ำสามครั้ง. เทคนิคกล้องจุลทรรศน์ป้องกันการก่อตัวของไบโอฟิล์มโดย TQ ได้รับการยืนยันโดยใช้เทคนิคกล้องจุลทรรศน์ สั้น ๆ สายพันธุ์ที่ได้รับอนุญาตที่จะเติบโตในรอบครอบคลุมสไลด์แก้ว (เส้นผ่าศูนย์กลาง 1 ซม.) วางไว้ใน 24 หลุมแผ่นสไตรีน (Greiner Bio-One, ฝรั่งเศส) เสริมด้วย TQ (0, MIC, 2 × MIC) บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและย้อมด้วยสี Giemsa 1/20 (Sigma, วิตเซอร์แลนด์) วิธีการ (v / v) เป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ชิ้นกระจกสีถูกวางไว้บนสไลด์ที่มีไบโอฟิล์มชี้ขึ้นและได้รับการตรวจสอบโดยกล้องจุลทรรศน์ที่กำลังขยาย X100. การวิเคราะห์ทางสถิติการวิเคราะห์สถิติที่ดำเนินการเกี่ยวกับซอฟแวร์โปรแกรม SPSS v.17.0 สถิติ ความแตกต่างทางสถิติอย่างมีนัยสำคัญและได้รับการประเมินโดยหนึ่งในวิธีการทดสอบและวิเคราะห์ความแปรปรวน Wilcoxon ลงนามในการจัดอันดับการทดสอบตามความเหมาะสมในการประเมินการยับยั้งไบโอฟิล์มตามประเภทของสายพันธุ์และอาหารเสริม TQ ค่า AP <0.05 ได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ. ไปที่: ผลการศึกษาผลของ thymoquinone ในการมีชีวิตของเซลล์ planktonic TQ แสดงให้เห็นถึงคุณสมบัติของยาต้านจุลชีพที่เลือก ตามที่แสดงในตาราง table1,1 มันแสดงฤทธิ์ฆ่าเชื้อแบคทีเรียที่ 7 จากทั้งหมด 11 สายพันธุ์โดยมีค่า MIC และ MBC ค่าตั้งแต่ 8-32 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและ 8-64 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรตามลำดับ กิจกรรมนี้เป็นเกือบคล้ายกับยาปฏิชีวนะการทดสอบ (Gentamycin และ erythromycin) อย่างไรก็ตามแกรมแบคทีเรียลบ (Escherichia coli ATCC 35218, Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 14028, เชื้อ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853) ดูเหมือนจะทนกับการกระทำ TQ (MIC และ MBC> 512 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) เรายังตั้งข้อสังเกตว่าค่า MBC ของ TQ เป็น 2-4 เท่าสูงกว่าค่า MICs. TQ แสดงกิจกรรมฆ่าเชื้อแบคทีเรียอย่างมีนัยสำคัญกับเสียงส่วนใหญ่ของเชื้อแบคทีเรีย (ค่า MICs อยู่ในช่วง 8-32 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) โดยเฉพาะอย่างยิ่งแบคทีเรียแกรมบวก ( Staphylococcus aureus ATCC 25923 และ Staphylococcus epidermidis CIP 106510) คริสตัลสีม่วงทดสอบแสดงให้เห็นว่ามีความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้งไบโอฟิล์ม (BIC50) ได้ถึงกับ 22 และ 60 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรสำหรับ Staphylococcus aureus ATCC 25923 และ Staphylococcus epidermidis CIP 106,510 ตามลำดับ นอกจากนี้ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่าเซลล์กิจกรรมออกซิเดชันได้รับอิทธิพลจากการเสริม TQ ในทางเดียวกัน, TQ ป้องกันเซลล์ที่ติดกับพื้นผิวกระจกสไลด์. สรุปความสามารถของ TQ เพื่อป้องกันการก่อตัวของใบสำคัญแสดงสิทธิที่ไบโอฟิล์มสอบสวนเพิ่มเติมในการสำรวจใช้เป็นสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่มีศักยภาพ antibiofilm

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธี


สิ่งมีชีวิตและสารเคมี ในการศึกษานี้ได้ทำการทดสอบฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของ TQ 11 มนุษย์เชื้อโรคสายพันธุ์รวมทั้งเชื้อกรัมลบ : escherichi coli ATCC 35218 Salmonella Typhimurium ATCC enterica ไน 14028 , Pseudomonas aeruginosa ATCC นำน้ำมันระเหย , Vibrio alginolyticus ~ i ATCC 17802 paraheamolyticus 33787 เชื้อแบคทีเรียกรัมบวก ; เชื้อ Bacillus cereus ATCC 14579 : ,monocytogene เชื้อ Listeria 19115 . ที่ไม่สามารถบวก เอ็นเทโรค็อกคัส faecalis และ 29212 , Micrococcus luteus ncimb 8166 Staphylococcus aureus ATCC 25923 , Staphylococcus อาหาร 106510 CIP ( ตาราง​ ( table11 ) . ตารางที่ 1 ตารางที่ 1



ต้านกิจกรรมของ thymoquinone กับมนุษย์ pathogenics สายพันธุ์
TQ , เจนตาไมซินและ erythromycin คือซื้อจาก ซิกม่า ( Sigma ดิชสวิตเซอร์แลนด์ ) .

การแสดงนิทรรศการมุ่งมั่น

ซุป microdilution เป็นวิธีตรวจสอบความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้ง ( MIC ) และความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถฆ่าเชื้อ ( MBC ) พิมพ์ดีด ( 0 512 μ g / ml ) เจนตาไมซิน ( 0 ถึง 256 μกรัม / มิลลิลิตร ) และอีริโทรมัยซิน ( 0 ถึง 256 μ g / ml ) แนะนำโดย แห่งชาติคณะกรรมการมาตรฐานห้องปฏิบัติการคลินิกสถาบัน [ 25 ] .

วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืน ( 37 ° C ) ของการทดสอบสายพันธุ์เจือจาง 10 เท่าในซุปถั่วเหลืองอาหารสด ( TSB ) และอุณหภูมิ ( 37 ° C ) จนกว่าจะถึงระยะการเจริญเติบโตที่ชี้แจง อนุกรมทวิวิธีการพิมพ์ดีดในมูลเลอร์ ฮินตัน ( MH ) ซุป ( biorad , ฝรั่งเศส ) เตรียมใน 96 หลุมจาน ( 190 μผมต่อด้วย )

inocula ( 10 μ L ) ประกอบด้วย 5106 cfu / ml ของแต่ละสายพันธุ์อ้างอิงเพิ่มกันและทดสอบสาร หมายเลขของเวลส์จะถูกสงวนไว้ในแต่ละแผ่น เพื่อทดสอบการเป็นหมัน คุมกลาง ( ไม่มีเชื้อเพิ่ม ) และเชื้อความมีชีวิต ( ไม่ผสมเพิ่ม ) .

หลังจากบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศา C , การเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่ประเมินโดยการแสดงตนของความขุ่นและเม็ดบนก็ล่างไมค์ก็หมายถึงความเข้มข้นที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ที่มองเห็นได้ในระหว่าง 24-h ระยะเวลาการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศา C

อย่างน้อยตามลำดับความเข้มข้นปริมาณ

หาน้อยตามลำดับความเข้มข้น ( MBC ) ค่า 10 ล. μกันกลางกับไม่มองเห็นการเจริญเติบโตถูกลบออกและหัวเชื้อในแผ่นค่ะ หลังจาก 24 ชั่วโมง บ่มที่ 37 ° Cจำนวนสิ่งมีชีวิตที่รอดตายจะถูกนำ ซึ่งถูกกำหนดไว้เป็นค่าความเข้มข้นที่ 99% ของแบคทีเรียถูกฆ่า แต่ละการทดลองซ้ำอย่างน้อยสองครั้ง [ 26 ] .

ผลของการ thymoquinone บนฟิล์ม

คริสตัลสีม่วง )

TQ การทดสอบศักยภาพของมัน เพื่อป้องกันไม่ให้ฟิล์มสร้างสี่สายพันธุ์อ้างอิง ( ตาราง​ ( table2 ) 2 )และพิมพ์ดีดได้เพิ่มสื่อการเจริญเติบโตในเวลาของการปลูกและเซลล์ได้รับอนุญาตให้สร้างไบโอฟิล์ม [ 6 ] การป้องกันการเกิดฟิล์มโดย TQ ถูกตรวจสอบโดย microdilution คล้ายกับไมค์สำหรับสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำในเซลล์ เป็นสองเท่าอุทิศถวายที่เตรียมไว้ในจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 96 ก็สไตรีนที่มีซุป TSB กลูโคส 2 % ( w / v )ส่วนสุดท้ายของพิมพ์ดีดตั้งแต่ 0 ถึง 512 μ g / ml โต๊ะโต๊ะ

2
2
antibiofilm ผลของไบโอฟิล์มบวกกับ 4 สายพันธุ์ thymoquinone
TQ ขนาดกลางไม่ต้องใช้ ไม่ถือว่าดีและปานกลางกับ TQ เช่นการควบคุมที่ว่างเปล่า เฉยๆของ bacterial suspension ( 10 μ L ) เป็นหัวเชื้อในการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อจานหลุม ( 5.104 cfu / ml ความเข้มข้นสุดท้าย )ต่อไปนี้บ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง วัฒนธรรม supernatants มี decanted จากแต่ละเซลล์และถูกกำจัดโดยสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำล้างครั้งที่สามกับเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( na2hpo4 7 มม. 3 มม. และ nah2po4 130 mM NaCl ที่ pH 7.4 ) เซลล์ในฟิล์มถูกกำหนดด้วยเมทานอลใน 15 นาที อากาศแห้ง และย้อมด้วย 1% คริสตัลสีม่วง [ 27 ]การสร้างไบโอฟิล์มเป็นวัด โดยวัดการดูดกลืนแสงที่ 595 nm ใช้อ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( จิโอ De Vita E C , อิตาลี )

เพื่อประเมินความสามารถของพิมพ์ดีดเพื่อป้องกันการสร้างไบโอฟิล์ม , ร้อยละของการยับยั้งไบโอฟิล์มคำนวณได้โดยใช้สมการ ( OD ควบคุมการเติบโต _ ( ตัวอย่าง ) / การควบคุม ] การเจริญเติบโต OD × 100 [ 6 ] แต่ละวิธีทำซ้ำสามครั้ง

ขั้นต่ำฟิล์มการยับยั้งสมาธิ ( mbic50 ) คือกำหนดความเข้มข้นต่ำสุดของพิมพ์ดีดพบว่า 50% ในการการยับยั้งไบโอฟิล์ม

การประเมินของไบโอฟิล์มการเผาผลาญกิจกรรมการใช้ xtt )

ลดการเผาผลาญกิจกรรมของเซลล์ในฟิล์มถูกประเมินโดยใช้ xtt [ 23-bis ( 2-methyloxy-4-nitro-5-sulfophenyl ) - 2h-tetrazolium-5-carboxanilide ] ลดการทดสอบตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 6,28 ] ซึ่งมาตรการการลดของ tetrazolium เกลือโดย metabolically เซลล์ที่ใช้งานอยู่ เพื่อละลายน้ำสีปฏิบัติการอนุพันธ์ที่สามารถวัดได้ colorimetrically .

เป็นสองเท่าอุทิศถวายของ TQ ( สุดท้ายความเข้มข้น 0 512 μ g / ml ) ที่เตรียมไว้ในจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 96 ก็สไตรีนที่มีซุป TSB กลูโคส 2 % ( w / v ) กว่าแผ่นปลูกเชื้อในทางเดียวกันตามที่อธิบายไว้ในคริสตัลสีม่วง ( . . .

xtt ( ซิกม่า Aldrich สวิตเซอร์แลนด์ ) สารละลาย ( 1 mg / ml ) ถูกเตรียมไว้ในช่องกรองและฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ - 80 องศาmenadione ( ซิกม่า Aldrich สวิตเซอร์แลนด์ ) สารละลาย ( 1 มิลลิเมตร ) ถูกเตรียมในอะซิโตนและฆ่าเชื้อทันทีก่อนที่แต่ละ ( . . .

ต่อไปนี้บ่ม , ไบโอฟิล์มก่อนซักห้าครั้งกับ PBS แล้ว 100 μ L PBS และ 12 μผม xtt menadione โซลูชั่น ( 12.5:1 v / v ) มีการเพิ่มของแต่ละ prewashed บ่อ และบ่อควบคุม จานแล้วบ่มเชื้อเป็นเวลา 3 ชั่วโมงในที่มืดที่อุณหภูมิ 37 องศาต่อไปนี้ระยะเวลา 100 μ L ของโซลูชั่นถูกย้ายไปยังบ่อใหม่ และเปลี่ยนสีในสารละลายวัดด้วยเครื่องอ่าน multiskan ที่ 492 นาโนเมตร นค่าการควบคุม แล้วหักออกจากค่าของการทดสอบบ่อน้ำเพื่อลดผลปลอมเนื่องจากสัญญาณรบกวนพื้นหลัง

ร้อยละของการยับยั้งไบโอฟิล์มคำนวณโดยใช้สมการ [ ( OD ควบคุมการเติบโต _ ( ตัวอย่าง ) / การควบคุม ] การเจริญเติบโต OD × 100 แต่ละวิธีทำซ้ำสามครั้ง .



ฟิล์มด้วยเทคนิคการป้องกันการก่อตัวโดยพิมพ์ดีดได้รับการยืนยันโดยกล้องจุลทรรศน์ เทคนิค สั้น ๆสายพันธุ์ที่ได้รับอนุญาตที่จะเติบโตในรอบคลุมกระจกสไลด์ ( เส้นผ่าศูนย์กลาง 1 ซม. ) วางไว้ในจาน ( ไกรเนอร์ไบโอโฟม 24 ดีหนึ่ง ฝรั่งเศส ) เสริมด้วย TQ ( 0 , ไมค์ , 2 × MIC ) บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และย้อมด้วย 1 / 20 จิมซา ( Sigma , สวิตเซอร์แลนด์ ) สารละลาย ( V / V ) สำหรับ 20 นาทีที่อุณหภูมิห้องกระจกสีชิ้นไว้ด้วยฟิล์มสไลด์ชี้ขึ้นและถูกตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์แสงที่ magnifications าย



ทางสถิติการวิเคราะห์ทางสถิติการวิเคราะห์ทางสถิติ SPSS v.17.0 ซอฟต์แวร์ ความแตกต่างทางสถิติและสถิติการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว และมีการประเมินโดยการทดสอบ Wilcoxon signed Ranks Test ตามความเหมาะสมประเมินตามชนิดของสายพันธุ์ การยับยั้งไบโอฟิล์มและ TQ ผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร เป็นค่า P < 0.05 ถือว่าสำคัญ

:

ไปจากผลของ thymoquinone 1 ในเซลล์สิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำ

TQ แสดงคุณสมบัติต้านจุลชีพที่เลือก ที่นำเสนอใน​ table1,1 โต๊ะ ,มีฤทธิ์ฆ่าเชื้อแบคทีเรียใน 7 จาก 11 ทดสอบสายพันธุ์กับไมค์และจะมีค่าตั้งแต่ 8 ถึง 32 μ g / ml และ 8 - 64 μกรัม / มิลลิลิตร ตามลำดับ กิจกรรมนี้เป็นกิจกรรมที่เกือบจะคล้ายกับการทดสอบยาปฏิชีวนะ ( เจนตาไมซินและ erythromycin ) อย่างไรก็ตาม เชื้อแกรมลบ ( Escherichia coli ATCC 35218 Salmonella Typhimurium ATCC enterica ไน 14028 , Pseudomonas aeruginosa ATCC นำน้ำมันระเหย )ดูเหมือนจะทนต่อการกระทำพิมพ์ดีด ( ไมค์และ MBC > 512 μ g / ml ) เราตั้งข้อสังเกตว่า MBC ค่า TQ เป็น 2-4 เท่า สูงกว่าค่า R .
TQ ) พบกิจกรรมต่อต้านแบคทีเรียส่วนใหญ่ของการทดสอบแบคทีเรีย ( ไมค์ค่าอยู่ระหว่าง 8 ถึง 32 μกรัม / มิลลิลิตร ) โดยเฉพาะเชื้อกรัมบวก ( Staphylococcus aureus ATCC 25923 และรูปแบบการผลิตอาหาร 106510 )คริสตัลสีม่วง assay พบว่าสารความเข้มข้นต่ำสุดฟิล์ม ( bic50 ) ได้ถึง 22 และ 60 μ g / ml สำหรับ Staphylococcus aureus ATCC 25923 และ Staphylococcus CIP 106510 อาหารตามลำดับ นอกจากนี้ข้อมูลของเราพบว่าเซลล์ออกซิเดชันกิจกรรมมาจากพิมพ์ดีดผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร ในทำนองเดียวกัน การยึดเกาะกระจกสไลด์ TQ ป้องกันเซลล์ผิว


สรุป
ความสามารถพิมพ์ดีดเพื่อป้องกันการเกิดฟิล์มสิทธิสอบสวนต่อไปเพื่อสำรวจการใช้เป็นสารชีวภาพที่มีศักยภาพ antibiofilm .