2.2. ELISA for analysis of cytokine

2.2. ELISA for analysis of cytokines released into cell supernatants
Confluent HBE cells, Calu-3, were treated as previously described
[22]. Unless specified otherwise, the experiments were
carried out using MAPK inhibitor at a concentration of 10 lM
and NF-jB inhibitor Bay 11-7082 at a concentration of 5 lM.
CXCL8/IL-8 and IL-6 were quantified by ELISA following the manufacturer’s
protocol (R&D Systems, Minneapolis, MN). Each data
point represents the mean from a minimum of three independent
assays performed in triplicate. Data are expressed as pg/ml.
2.3. Quantitative RT-PCR (qRT-PCR) analysis
Real-time quantitative RT-PCR was employed to measure the
transcript levels of IL-8 and IL-6 as previously described [21]. The
IL-8 and IL-6 mRNA levels were normalized to the expression of
the housekeeping gene CAP-1. Messenger RNA levels were expressed
as relative copy number (RCN), which was calculated using
with the following equation: RCN = 2DCt 100 where DCt = Ct(target)
Ct(housekeeping gene).
2.4. Measurement of cell viability
Cell viability was measured by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-
2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay as previously described
[21]. Cells were treated with cadmium and/or curcumin
for 24 h. At the end of the treatment, the number of viable cells
was determined by measuring their capacity to convert a tetrazolium
salt into a blue formazan product.
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 วิธี ELISA สำหรับการวิเคราะห์ cytokines ที่ปล่อยออกสู่เซลล์ supernatants
ไหลมารวมกันเซลล์ HBE, Calu-3, ได้รับการรักษาตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[22] ยกเว้นกรณีที่ระบุเป็นอย่างอื่นทดลอง
ดำเนินการโดยใช้ยับยั้ง MAPK ที่ความเข้มข้น 10 LM
และ NF-jB ยับยั้งอ่าว 11-7082 ที่ความเข้มข้น 5 LM.
CXCL8 / IL-8 และ IL-6 ถูกวัดโดยวิธี ELISA ต่อไปของผู้ผลิต
โปรโตคอล (R & D Systems, Minneapolis, MN) ข้อมูลแต่ละ
จุดแสดงให้เห็นถึงค่าเฉลี่ยจากต่ำสามอิสระ
ตรวจดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า ข้อมูลจะแสดงเป็น pg / มล.
2.3 ปริมาณ RT-PCR (qRT-PCR) การวิเคราะห์
เวลาจริงเชิงปริมาณ RT-PCR เป็นลูกจ้างในการวัด
ระดับการบันทึกของ IL-8 และ IL-6 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [21]
IL-8 และ IL-6 ระดับ mRNA ถูกปกติในการแสดงออกของ
ยีนดูแลทำความสะอาด CAP-1 ระดับของ Messenger RNA ถูกแสดง
เป็นจำนวนสำเนาญาติ (RCN) ซึ่งได้รับการคำนวณโดยใช้
กับสมการต่อไปนี้: RCN = 2DCt 100 ที่ DCT = กะรัต (เป้าหมาย)
กะรัต (ดูแลทำความสะอาดยีน).
2.4 การวัดความมีชีวิตเซลล์
มีชีวิตเซลล์โดยวัดจาก 3 (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -
2,5-diphenyl tetrazolium โบรไมด์ (MTT) ทดสอบตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[21] เซลล์ได้รับการรักษาด้วยแคดเมียมและ / หรือขมิ้นชัน
เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ในตอนท้ายของการรักษาจำนวนของเซลล์ที่มีชีวิต
ถูกกำหนดโดยการวัดความสามารถในการแปลง tetrazolium
เกลือลงในผลิตภัณฑ์ formazan สีฟ้า.
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . วิธีวิเคราะห์สารแพร่เข้าไปในเซลล์ supernatants
กระจู๋กระจี๋ระหว่างเซลล์ calu-3 ถูกปฏิบัติตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[ 22 ] เว้นแต่ที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น จากการทดลองพบว่า การใช้ mapk
ซินที่ความเข้มข้น 10 และยับยั้ง NF เจบี LM
อ่าว 11-7082 ความเข้มข้น 5 กล. .
cxcl8 / 8 สร้างเป็นวัดและโดยวิธีต่อไปนี้ของผู้ผลิต
โพรโทคอล ( R & D ระบบ , Minneapolis , MN ) จุดข้อมูลแต่ละ
หมายถึงหมายถึงจากอย่างน้อยสามอิสระ
วิธีปฏิบัติทั้งสามใบ ข้อมูลที่แสดงเป็น pg / ml
2.3 วิธีเชิงปริมาณ ( ข้าพเจ้า PCR ) การวิเคราะห์เชิงปริมาณใช้
เวลาจริง RT-PCR วัดระดับผลการเรียนของ IL-6 และ
8 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 21 ]
8 สร้าง mRNA และระดับปกติ เพื่อการแสดงออกของยีน cap-1
แม่บ้าน . ระดับอาร์เอ็นเอสื่อสารแสดงออก
หมายเลขคัดลอกญาติ ( RCN ) ซึ่งคำนวณได้โดยใช้สมการต่อไปนี้ :
กับ RCN = 2dct 100 ที่ DCT = CT ( เป้าหมาย )
CT ( ( แม่บ้าน ) .
2.4 . การวัดเซลล์เซลล์
วัดด้วย 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) -
25-diphenyl tetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ว่า
[ 21 ] เซลล์จะถูกกับแคดเมียม และ / หรือ กด
เป็นเวลา 24 ชั่วโมง เมื่อสิ้นสุดการรักษา จำนวนการวางเซลล์
ถูกกําหนดโดยวัดความสามารถของพวกเขาที่จะแปลงเป็นเกลือเป็นผลิตภัณฑ์ tetrazolium

2 ปฏิบัติการสีฟ้า