(Novagen, Darmstadt, Germany). The

(Novagen, Darmstadt, Germany). The recombinant plasmids
were then transformed into Escherichia coli JM 109 and the
accuracy of the nucleotide sequence harbored in the bacterial
clones was verified by sequencing. The plasmid DNA presenting
the correct codons was used to transform in E. coli
Rosetta-gami 2(DE3) expression host (Novagen). Protein
expression was induced by 1 mM isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside.
Suspension of bacterial cell in a lysis buffer (50mM
Tris–HCl, pH 8.0, 5% glycerol, 50 mM NaCl, 0.5 mg/mL lysozyme)
was sonicated on ice, and the recombinant protein
fused with N utilization substance A (NusA)-tagged and 6-
Histidine (6-His)-tagged residues, and was purified using
Ni–NTA His Bind Resin (Novagen). The recombinant
MMP-like protein was separated from fusion-tagged proteins
by cleaving with recombinant enterokinase (rEK)
(Novagen) according to the manufacturer’s instructions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

(Novagen ดาร์มส เยอรมนี) Recombinant plasmidsแล้วถูกเปลี่ยนเป็น Escherichia coli JM 109 และความถูกต้องของลำดับนิวคลีโอไทด์ harbored ในแบคทีเรียโคลนถูกตรวจสอบ โดยลำดับ นำเสนอ plasmid DNAcodons ถูกใช้ในการแปลงใน E. coliเซต gami 2(DE3) นิพจน์ไม่ไกล (Novagen) โปรตีนนิพจน์ถูกเหนี่ยวนำ โดย 1 mM isopropyl-b-D-thiogalactopyranosideระบบกันสะเทือนของเซลล์แบคทีเรียในบัฟเฟอร์ lysis (50 มม.Tris–HCl ค่า pH 8.0, 5% กลีเซอร 50 มม. NaCl, lysozyme 0.5 mg/mL)มี sonicated บนน้ำแข็ง และโปรตีน recombinantfused กับ N ใช้ประโยชน์ (นู) -ติดแท็ก และ 6 -Histidine (6-พระ) -แท็กตก และไม่บริสุทธิ์ที่ใช้Ni – NTA ของเขาผูกยาง (Novagen) วททชMMP เหมือนโปรตีนแยกออกจากแท็กอาหารโปรตีนโดย cleaving กับ recombinant enterokinase (rEK)(Novagen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

(Novagen, Darmstadt, Germany) พลาสมิดสายผสม
ถูกเปลี่ยนแล้วลงใน Escherichia coli JM 109 และ
ความถูกต้องของลำดับเบสที่เก็บงำในแบคทีเรีย
สายพันธุ์ได้รับการตรวจสอบโดยลำดับ พลาสมิดดีเอ็นเอที่นำเสนอ
codons ถูกต้องใช้ในการแปลงใน E. coli
Rosetta-GAMI 2 (DE3) เป็นเจ้าภาพการแสดงออก (Novagen) โปรตีน
แสดงออกถูกชักนำโดย 1 มิลลิ isopropyl-BD-thiogalactopyranoside
Suspension ของเซลล์แบคทีเรียในบัฟเฟอร์สลาย (50mm
Tris-HCl, pH 8.0, 5% กลีเซอรอล 50 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์ 0.5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร lysozyme)
ถูก sonicated บนน้ำแข็งและ โปรตีน
ผสมกับสารที่ยังไม่มีการใช้ประโยชน์ (NUSA) -tagged และ 6
ฮีสทิดี (6-ของเขา) -tagged ตกค้างและบริสุทธิ์โดยใช้
Ni-NTA ของเขาผูกเรซิ่น (Novagen) recombinant
MMP เหมือนโปรตีนถูกแยกออกจากโปรตีนที่ติดแท็ก
โดยฝ่ากับ recombinant Enterokinase (REK)
(Novagen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

( novagen ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) การรีคอมบิแนนท์พลาสมิด
จึงกลายเป็นเชื้อ Escherichia coli JM 109 และ
ความถูกต้องของลำดับนิวคลีโอไทด์ harbored ในโคลนแบคทีเรีย
ถูกตรวจสอบความถูกต้องโดยลำดับ . พลาสมิดดีเอ็นเอที่เสนอถูกต้อง
ซิสใช้แปลงใน E . coli Rosetta ( DE3 ) 2
gami สีหน้าโฮสต์ ( novagen ) โปรตีน
แสดงนำโดย isopropyl-b-d-thiogalactopyranoside 1 mm .
ระงับแบคทีเรียเซลล์ในการสลายบัฟเฟอร์ ( 50mm
ทริส– HCl , pH 8.0 , 5% glycerol , เกลือ , 50 มม. 0.5 mg / ml ไลโซไซม์ )
คือ sonicated บนน้ำแข็งและ
โปรตีนรีคอมบิแนนท์ผสมกับ N การใช้สาร ( นู ) และติดแท็ก 6 -
ฮิสทิดีน ( 6-his ) - แท็กที่ตกค้าง และบริสุทธิ์ใช้
ฉัน– NTA ของเขาผูกเรซิน ( novagen )การรีคอมบิแนนท์โปรตีนอื่นเช่น
แยกจากฟิวชั่นแท็กโปรตีน
โดยสามารถใช้กับพนักงานบัญชี ( รัก )
( novagen ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต