We aimed to overexpress the ‘tesA g

We aimed to overexpress the ‘tesA gene (which codes for thioesterase I) in E. coli to (1) enhance the conversion of fatty acyl-CoA to free fatty acid, and (2) bypass the β-oxidation pathway for fatty acid metabolism. To facilitate this strategy, we have subcloned the ‘tesA coding sequence downstream of the PBAD promoter in the pSB1C3 vector. E. coli TOP10 cells (Invitrogen) was used as the host to overexpress ‘tesA. Expression of the ‘tesA gene was measured by quantitative RT-PCR and the effect of ‘TesA overexpression (leading to a possible increase in thioesterase I activity) was indirectly tested by determining the oleic acid concentrations in control and ‘tesA recombinant E. coli cells by GC-MS.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เรามีวัตถุประสงค์เพื่อ overexpress ' เทศายีน (ซึ่งรหัสสำหรับ thioesterase ฉัน) ใน E. coli (1) เพิ่มการแปลง acyl CoA ไขมันกรดไขมันอิสระ และ (2) ทางเดินสำหรับการเผาผลาญกรดไขมันβ-ออกซิเดชันหลีกเลี่ยง เพื่ออำนวยความสะดวกกลยุทธ์นี้ เรามี subcloned ' เทศารหัสลำดับน้ำของโปรโมเตอร์ PBAD ในเวกเตอร์ pSB1C3 E. coli TOP10 เซลล์ (Invitrogen) ใช้เป็นโฮสต์ overexpress ' เทศา นิพจน์ของการ ' เทศายีนถูกวัด โดยเชิงปริมาณ RT-PCR และผลของการ ' overexpression เทศา (นำไปสู่การเพิ่มขึ้นได้ใน thioesterase ฉันกิจกรรม) ทดสอบทางอ้อม โดยกำหนดความเข้มข้นกรด oleic ในการควบคุม และ ' เซลล์เทศา recombinant E. coli โดย GC MS

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เรามีวัตถุประสงค์เพื่อ overexpress ของยีน TESA (ซึ่งรหัสสำหรับฉัน thioesterase) ในอีโคไลที่จะ (1) เพิ่มประสิทธิภาพในการแปลงไขมัน acyl-CoA ที่จะเป็นอิสระกรดไขมันและ (2) หลีกเลี่ยงเส้นทางการเกิดออกซิเดชันβ-สำหรับการเผาผลาญกรดไขมัน . เพื่ออำนวยความสะดวกกลยุทธ์นี้เราได้ subcloned ของลำดับการเข้ารหัส TESA ปลายน้ำของโปรโมเตอร์ PBAD ในเวกเตอร์ pSB1C3 เชื้อ E. coli เซลล์ TOP10 (Invitrogen) ถูกใช้เป็นพื้นที่ในการ overexpress 'TESA การแสดงออกของยีน TESA โดยวัดจากปริมาณ RT-PCR และผลของ 'แสดงออก TESA (ที่นำไปสู่​​การเพิ่มขึ้นเป็นไปได้ในกิจกรรมที่ฉัน thioesterase) ได้รับการทดสอบทางอ้อมโดยการกำหนดความเข้มข้นของกรดโอเลอิกในการควบคุมและ' TESA recombinant เซล E.coli โดย GC-MS

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เรามุ่ง overexpress ' ยีนทีซ่า ( ซึ่งเป็นรหัส thioesterase ) ใน E . coli เพื่อ ( 1 ) เพิ่มประสิทธิภาพการแปลงของไขมัน , COA ให้กรดไขมันอิสระ และ ( 2 ) บีตา - ออกซิเดชันข้ามทางเดินสำหรับการเผาผลาญกรดไขมัน . เพื่อให้ยุทธศาสตร์นี้ เรามี ของ " ทีซ่านะครับ ลำดับต่อเนื่องของ pbad โปรโมเตอร์ใน psb1c3 เวกเตอร์ E .โคไล TOP10 เซลล์ ( Invitrogen ) ถูกใช้เป็นโฮสต์เพื่อ overexpress ' เทซ่า . การแสดงออกของยีนโดยวิธี RT-PCR ) ' เทซ่าวัดเชิงปริมาณและผลของ ' เทซ่า overexpression ( นำไปสู่การเพิ่มขึ้นที่เป็นไปได้ใน thioesterase ผมกิจกรรม ) คือการทดสอบทางอ้อม โดยกำหนดความเข้มข้นของกรดโอเลอิกในการควบคุม และเซลล์ E . coli เซลล์โดย gc-ms. เทซ่า