A sample consisted of a 200 mg biop

A sample consisted of a 200 mg biopsy. Specimens were ground separately with mortar and pestle in liquid nitrogen. The frozen powder was transferred to a 2 mL eppendorf tube and 800 mL of extraction solution (50 mM Tris-HCL, pH8.0; 25 mM EDTA and 400 mM NaCl), 100 mL 10% SDS, and 20 mL Proteinase K (10 mg/mL) were added. The extract was homogenized and incubated at 65 °C for 3 h. After incubation, proteins and cellular debris were precipitated by adding a 300 mL 6 M NaCl, kept at 4 °C for 15 min. Centrifugation was done at 25,000 g for 20 min. 500 mL of the supernatant were transferred to a new eppendorf, with 500 mL 8 M guanidine hydrochloride (pH 8.0), and 0.49 M ammonium acetate solution, and kept in mild agitation for 90 min. Nucleic acids were precipitated by adding 800 mL of cold 100% isopropyl alcohol, followed by centrifugation at 8,000 g for 5 min. Pellets were washed with 400 mL of 70% isopropyl alcohol. After drying, pellets were resuspended in 150 mL TE buffer (10 mM Tris-HCl, pH 8.0; 1 mM EDTA and 50 mg/mL RNAse). DNA samples were stored at 4 °C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างประกอบด้วยการตรวจชิ้นเนื้อ 200 มิลลิกรัม Specimens มีพื้นดินที่แยกต่างหาก มีโกร่งในไนโตรเจนเหลว ผงแช่แข็งถูกถ่ายโอนไปหลอด eppendorf 2 mL และเพิ่ม 800 mL สกัดโซลูชัน (ทริสเรทติ้ง HCL 50 mM, pH8.0; 25 mM EDTA และ 400 มม. NaCl), 100 mL 10% SDS และ 20 mL Proteinase K (10 mg/mL) การดึงข้อมูล homogenized เป็นกลุ่ม และ incubated ที่ 65 ° C สำหรับ 3 h หลังจากบ่ม โปรตีน และเศษเซลล์ ตกตะกอน โดยการเพิ่ม 300 มล. NaCl M 6 เก็บที่ 4 ° C สำหรับ 15 นาที Centrifugation เสร็จที่ g 25000 สำหรับ 20 นาทีขนาด 500 มล.ของ supernatant ถูกโอนย้ายไป eppendorf ที่ใหม่ 500 mL 8 เมตร guanidine ไฮโดรคลอไรด์ (pH 8.0), และโซลูชั่น acetate 0.49 M แอมโมเนีย และยังคงอยู่ในอาการกังวลต่ออ่อนสำหรับ 90 นาทีกรดนิวคลีอิกมีตะกอนเพิ่ม 800 mL แอลกอฮอล์ isopropyl 100% เย็น ตาม centrifugation ที่ g 8000 สำหรับ 5 นาทีขี้ถูกล้าง ด้วย 400 mL แอลกอฮอล์ isopropyl 70% หลังจากแห้ง ขี้ถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ TE 150 mL (10 มม.ตรี-HCl, pH 8.0; 1 mM EDTA และ RNAse 50 mg/mL) ตัวอย่างดีเอ็นเอถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างที่ประกอบไปด้วยการตรวจชิ้นเนื้อ 200 มิลลิกรัม ตัวอย่างถูกพื้นดินแยกกับโกร่งบดยาในไนโตรเจนเหลว ผงแช่แข็งที่ถูกย้ายไป 2 มิลลิลิตรหลอด Eppendorf และ 800 มิลลิลิตรของสารละลายสกัด (50 มิลลิ Tris-HCL, pH8.0 25 มิลลิ EDTA และ 400 มิลลิโซเดียมคลอไรด์) 100 มล 10% SDS และ 20 มล Proteinase K (10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) มีการเพิ่ม สารสกัดทำให้เป็นเนื้อเดียวกันและบ่มที่ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชั่วโมง หลังจากการบ่มโปรตีนและเศษโทรศัพท์มือถือที่ถูกเร่งโดยการเพิ่ม 300 มิลลิลิตร 6 M NaCl เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที ได้กระทำการหมุนเหวี่ยงที่ 25,000 กรัมเป็นเวลา 20 นาที 500 มิลลิลิตรใสที่ถูกโอนไปยัง Eppendorf ใหม่ 500 มิลลิลิตร 8 เอ็มไฮโดรคลอไร guanidine (pH 8.0) และ 0.49 แก้ปัญหา M แอมโมเนียมอะซิเตทและเก็บไว้ในความปั่นป่วนรุนแรงเป็นเวลา 90 นาที กรดนิวคลีอิกถูกเร่งโดยการเพิ่ม 800 มิลลิลิตรของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl เย็น 100% ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 8,000 กรัมเป็นเวลา 5 นาที เม็ดถูกล้างด้วย 400 มิลลิลิตร 70% isopropyl แอลกอฮอล์ หลังจากการอบแห้งเม็ดถูก resuspended ใน 150 มิลลิลิตรบัฟเฟอร์ TE (10 มิลลิ Tris-HCl, pH 8.0 1 มิลลิ EDTA และ 50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร RNase) ตัวอย่างดีเอ็นเอที่ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัตถุประสงค์ของการวิจัยนี้เพื่อเปรียบเทียบเนื้อ 200 มิลลิกรัม ชิ้นงานพื้นดินแยกกับครกและสากในไนโตรเจนเหลว แช่แป้งถูกส่งไป 2 ml หลอด 800 มิลลิลิตรของสารละลายเพนดอร์ฟและสกัด ( 50 มม. โดย HCl , ph8.0 ; 25 mM EDTA และ 4 mM NaCl ) 100 ml 10% SDS และ K โปรตีน 20 มิลลิลิตร ( 10 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ) มีการเพิ่ม สารสกัดที่เป็นโฮโมบ่มที่ 65 องศา C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงหลังจากบ่ม โปรตีนและเซลล์เศษถูกตกตะกอนโดยการเพิ่ม 300 ml 6 M NaCl เก็บที่อุณหภูมิ 4 องศา C เป็นเวลา 15 นาที ปั่นไปที่ 25 , 000 G 20 นาที 500 มิลลิลิตร และน่านมีการโอนใหม่เพนดอร์ฟ , 8 M กัวนิดีนไฮโดรคลอไรด์ 500 ml ( pH 8.0 ) และ 0.49 เมตรแอมโมเนียมอะซิเตท โซลูชั่นและเก็บไว้ในอ่อนมากสำหรับ 90 นาทีกรดนิวคลีอิกและตกตะกอนโดยการเพิ่ม 800 มล. ของแอลกอฮอล์ isopropyl 100% เย็น ตามด้วยการปั่นเหวี่ยงที่ 8000 กรัม 5 นาทีอัตราการล้างด้วย 400 ml 70% ไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์ หลังจากการอบแห้งในอัตรา resuspended 150 มิลลิลิตร TE บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ HCl , pH 8.0 1 mM EDTA และ 50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรเลส ) ตัวอย่างดีเอ็นเอที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศา