Cortex fragments of each ovary were

Cortex fragments of each ovary were cut into pieces 1 × 10
× 10 mm. Tissue slices from one ovary of each cow were
examined fresh, and from the other ovary of each cow were
examined after vitrification and warming. The precise 1 mm
tissue thickness was guaranteed with a tissue slicer designed
explicitly for this purpose (Figure 1). In brief, the tissue slicer
plate has a 1 × 10 × 10 mm cubic space. The tissue slicer was
put on the surface of ovary. Then another plate (holeless) was
placed over the tissue slicer, and the ovary was cut between
the slicer and the surface of ovary using a sharp edge. The
cortical ovarian tissue was thus cut into 1 × 10 × 10 mm pieces.
The ultra-thinness of the tissue was thought to be crucial,
not just for the cryopreservation, but also for the rapidity of
revascularization after grafting.
Following the procedure described by Kagawa et al. (2007),
with some modifications, the Cryotissue method was applied
to large pieces of ovarian tissue (1 × 10 × 10 mm) from cattle
and humans with a modified concentration of CPA during
vitrification and extension of the soaking time compared with
that used for small pieces ovarian tissue (0.2 mm3
) in mice.
Ovarian tissues were initially equilibrated in 7.5% ethylene
glycol (EG) and 7.5% dimethyl sulphoxide (DMSO) in
handling medium [HM; HEPES-buffered TCM-199 solution
supplemented with 20% (v/v) synthetic serum substitute (SSS;
Irvine Scientific, Santa Ana, CA, USA)] for 25 min followed
by a second equilibration in 20% EG and 20% DMSO with 0.5
mol/l sucrose for 15 min. Ovarian tissues were then placed in
a minimum volume of solution onto a thin metal strip (Figure
2) (Cryotissue; Kitazato BioPharma, Fujinomiya, Japan),
and submerged directly into sterile liquid nitrogen (Fuentes
and Dubettier, 2004), following which the strip was inserted
into a protective container and placed into a liquid nitrogen
storage tank. For warming, the protective cover was removed
and the Cryotissue metal strip was immersed directly into 40
ml of 37°C HM solution supplemented with 1.0 mol/l sucrose
for 1 min. Then, ovary tissues were transferred into 15 ml of
0.5 mol/l sucrose HM solution for 5 min at room temperature,
and washed twice in HM solution for 10 min before viability
analysis, or transplantation. No ice crystal formation was
observed during any of the procedures. During the cooling and
warming procedures, accurate measurements of cooling rate
and warming rate were obtained (Thermo Pro 3000; Keyence,
Osaka, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชิ้นส่วนคอร์เทกซ์ของแต่ละรังไข่ถูกตัดเป็นชิ้น 1 × 10× มม. 10. เนื้อเยื่อชิ้นจากรังไข่หนึ่งของวัวแต่ละตรวจสอบ สด และ จากรังไข่อื่น ๆ ของวัวแต่ละตรวจสอบหลังจาก vitrification และร้อน มม. 1 แม่นยำความหนาของเนื้อเยื่อได้รับประกัน ด้วยเครื่องตัดเนื้อเยื่อที่ออกแบบมาชัดเจนสำหรับวัตถุประสงค์นี้ (รูปที่ 1) อย่างย่อ เครื่องตัดเนื้อเยื่อจานมีพื้นที่ลูกบาศก์มม.× 10 1 × 10 เครื่องตัดเนื้อเยื่อได้วางบนพื้นผิวของรังไข่ แล้ว มีอีกจาน (holeless)วางเครื่องตัดเนื้อเยื่อ และรังไข่ถูกตัดระหว่างเครื่องตัดแบบและพื้นผิวของรังไข่ที่ใช้ขอบคม ที่เนื้อเยื่อรังไข่เนื้อแน่นได้จึงตัดเป็น 1 × 10 × 10 มม.ชิ้นThinness ทางของเนื้อเยื่อถูกคิดว่า เป็นสิ่งสำคัญไม่เพียงแต่สำหรับ cryopreservation แต่ยังสำหรับ rapidity ของrevascularization หลัง graftingขั้นตอนที่อธิบายไว้โดย Kagawa et al. (2007),มีการปรับเปลี่ยนบาง ใช้วิธี Cryotissueเป็นชิ้นใหญ่ของเนื้อเยื่อรังไข่ (1 × 10 × 10 มม.) จากวัวและมนุษย์ มีความเข้มข้นปรับเปลี่ยนของ CPA ในระหว่างvitrification และขยายเวลาแบบเปรียบเทียบกับที่ใช้สำหรับเนื้อเยื่อรังไข่ขนาดเล็ก (0.2 mm3) ในหนูเนื้อเยื่อรังไข่ก็เริ่ม equilibrated ในเอทิลีน 7.5%glycol (EG) และ 7.5% dimethyl sulphoxide (DMSO) ในจัดการสื่อ [HM HEPES buffered TCM 199 โซลูชันเสริม ด้วย 20% (v/v) เซรั่มสังเคราะห์ทดแทน (SSSเออร์วินวิทยาศาสตร์ ไทเป CA, USA)] สำหรับ 25 นาทีตามโดย equilibration สองใน 20% EG และ 20% DMSO กับ 0.5โมล/l ซูโครสสำหรับ 15 นาทีเนื้อเยื่อรังไข่ถูกวางลงในปริมาณต่ำสุดของโซลูชันบนโลหะตอก (รูป2) (Cryotissue Kitazato BioPharma ฟูจิโนะมิยะ ญี่ปุ่น),และน้ำท่วมโดยตรงลงในไนโตรเจนเหลวใส่ (Fuentesและ Dubettier, 2004), ซึ่งถูกแทรกแถบดังต่อไปนี้ลงในภาชนะที่ป้องกัน และวางลงในไนโตรเจนเหลวถังเก็บ สำหรับภาวะโลกร้อน ฝาครอบป้องกันถูกเอาออกและแถบโลหะ Cryotissue ที่ไปลง 40ml ของโซลูชัน HM 37° C เสริม ด้วย 1.0 โมล/l ซูโครสใน 1 นาที แล้ว เนื้อเยื่อรังไข่ถูกโอนย้ายไปยัง 15 ml ของโซลูชั่นของซูโครส HM l 0.5 โมลใน 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องและหินสองใน HM โซลูชันสำหรับ 10 นาทีก่อนนี้วิเคราะห์ หรือปลูก ไม่ก่อตัวผลึกน้ำแข็งได้สังเกตในขั้นตอน ในระหว่างการทำความเย็น และขั้นตอน วัดความถูกต้องของอัตราการระบายความร้อนร้อนและร้อนอัตราได้รับ (เทอร์โม Pro 3000 บริษัทคีย์เอ็นซ์โอซาก้า ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เศษเยื่อหุ้มสมองของรังไข่แต่ละถูกตัดเป็นชิ้น 1 × 10
× 10 มม ชิ้นเนื้อเยื่อจากรังไข่ของวัวแต่ละ
ตรวจสอบสดและจากรังไข่อื่น ๆ ของวัวแต่ละ
การตรวจสอบหลังการแช่แข็งและภาวะโลกร้อน แม่นยำ 1 มิลลิเมตร
หนาเนื้อเยื่อถูกรับประกันกับเครื่องตัดเนื้อเยื่อที่ได้รับการออกแบบ
อย่างชัดเจนเพื่อการนี้ (รูปที่ 1) ในช่วงสั้น ๆ ตัดเนื้อเยื่อ
แผ่นมี 1 × 10 × 10 มมพื้นที่ลูกบาศก์ เครื่องตัดเนื้อเยื่อที่ถูก
วางอยู่บนพื้นผิวของรังไข่ จากนั้นอีกแผ่น (holeless) ถูก
วางอยู่เหนือตัดเนื้อเยื่อและรังไข่ถูกตัดระหว่าง
เครื่องตัดและพื้นผิวของรังไข่ใช้คม
เนื้อเยื่อรังไข่เยื่อหุ้มสมองถูกตัดจึงเป็น 1 × 10 × 10 มมชิ้น.
บางพิเศษของเนื้อเยื่อที่ถูกคิดว่าเป็นสิ่งสำคัญ
ไม่เพียง แต่สำหรับเก็บรักษา แต่ยังสำหรับความรวดเร็วของ
revascularization หลังจากการปลูกถ่ายอวัยวะ.
ต่อไปนี้ขั้นตอนที่อธิบายโดย คากาวะและอัล (2007)
ที่มีการปรับเปลี่ยนวิธีการ Cryotissue ถูกนำมาใช้
เป็นชิ้นขนาดใหญ่ของเนื้อเยื่อรังไข่ (1 × 10 × 10 มิลลิเมตร) จากวัว
และมนุษย์ที่มีความเข้มข้นของการปรับเปลี่ยน CPA ในระหว่าง
การแช่แข็งและการขยายเวลาการแช่เมื่อเทียบกับ
ที่ใช้สำหรับ ชิ้นเล็ก ๆ เนื้อเยื่อรังไข่ (0.2 mm3
.) ในหนู
เนื้อเยื่อรังไข่ถูก equilibrated ครั้งแรกใน 7.5% เอทิลีน
ไกลคอล (EG) และ 7.5% dimethyl sulphoxide (DMSO) ใน
การจัดการสื่อ [HM; HEPES บัฟเฟอร์แก้ปัญหา TCM-199
เสริมด้วย 20% (v / v) แทนซีรั่มสังเคราะห์ (SSS;
เออร์วิทยาศาสตร์ซานตาอานา, CA, USA)] 25 นาทีตาม
ด้วยการปรับสมดุลที่สองใน EG 20% และ 20% DMSO กับ 0.5
ซูโครสโมล / ลิตรเป็นเวลา 15 นาที เนื้อเยื่อรังไข่ถูกวางไว้แล้วใน
ปริมาณขั้นต่ำของการแก้ปัญหาบนแถบโลหะบาง (รูปที่
2) (Cryotissue; Kitazato BioPharma, Fujinomiya ญี่ปุ่น)
และจมอยู่ใต้น้ำโดยตรงลงในไนโตรเจนเหลวผ่านการฆ่าเชื้อ (ฟู
และ Dubettier, 2004) ตามที่แถบ ถูกแทรก
ลงในภาชนะที่ป้องกันและวางไว้ในไนโตรเจนเหลว
ถังเก็บ สำหรับภาวะโลกร้อน, ฝาครอบป้องกันจะถูกลบออก
และแถบโลหะ Cryotissue ถูกแช่โดยตรงใน 40
มิลลิลิตรอุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสวิธีการแก้ปัญหา HM เสริมด้วย 1.0 โมล / ลิตรน้ำตาลซูโครส
เป็นเวลา 1 นาที จากนั้นเนื้อเยื่อรังไข่ถูกย้ายเป็น 15 มิลลิลิตร
0.5 โมล / ลิตรน้ำตาลซูโครสแก้ปัญหา HM 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
และล้างครั้งที่สองในการแก้ปัญหา HM เป็นเวลา 10 นาทีก่อนที่จะมีชีวิต
การวิเคราะห์หรือการปลูกถ่าย ไม่มีการก่อตัวของผลึกน้ำแข็งที่ถูก
ตั้งข้อสังเกตในระหว่างการดำเนินการใด ๆ ในช่วงเย็นและความ
ร้อนขั้นตอนการวัดที่ถูกต้องของอัตราการเย็นตัว
และอัตราการได้รับความร้อน (เทอร์โม Pro 3000; Keyence,
โอซาก้าประเทศญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เปลือกของชิ้นส่วนแต่ละรังไข่ถูกตัดเป็นชิ้น 1 × 10
× 10 มิลลิเมตร เนื้อเยื่อชิ้นหนึ่งจากรังไข่ของวัวแต่ละถูก
ตรวจสอบสด และจากรังไข่ของวัวแต่ละอื่น ๆและหลังจากการตรวจสอบจำนวน
ร้อน แม่นยำ 1 มม. ความหนาของเนื้อเยื่อถูกการันตีด้วย

ตัดเนื้อเยื่อมาอย่างชัดเจนเพื่อจุดประสงค์นี้ ( รูปที่ 1 ) ในช่วงสั้น ๆ , เนื้อเยื่อที่ตัด
แผ่นมี 1 × 10 × 10 mm . พื้นที่ เครื่องตัดเนื้อเยื่อถูก
วางบนพื้นผิวของรังไข่ แล้วอีกจาน ( Ho ​​ leless ) คือ
วางไว้เหนือเครื่องตัดเนื้อเยื่อและรังไข่ถูกตัดระหว่าง
ตัดและผิวของรังไข่โดยใช้ขอบคม
- รังไข่เนื้อเยื่อจึงตัดเป็นชิ้น 1 × 10 × 10 mm .
อัลตร้าผอมจากเนื้อเยื่อที่ถูกคิดว่า เป็น สําคัญ
ไม่เพียง แต่สำหรับผู้ป่วย แต่ยังสำหรับความ

Spectrometry ต้น ตามขั้นตอนที่อธิบายไว้โดย คากาวะ และ อัล ( 2007 ) ,
กับการปรับเปลี่ยนบางอย่างที่ cryotissue วิธีการประยุกต์
ขนาดใหญ่ชิ้นเนื้อเยื่อรังไข่ ( 1 × 10 × 10 มม. ) จากโค
และมนุษย์กับการแก้ไขในช่วงความเข้มข้นของ CPA
8 และส่วนขยายของเวลาเมื่อเทียบกับ
แช่ที่ใช้สำหรับชิ้นเนื้อเยื่อรังไข่ขนาดเล็ก ( 0.2 มม.

) ในเนื้อเยื่อรังไข่หนู ในขั้นแรก equilibrated เอทิลีนไกลคอลใน 7.5 %
( EG ) และ 7.5 % ไดเมทิล sulphoxide ( DMSO )
การจัดการ HM ขนาดกลาง [ ;
2 tcm-199 ฮีเปสโซลูชั่นเสริมด้วย 20 % ( v / v ) ใช้แทนเซรั่มสังเคราะห์ ( สสส. ;
: วิทยาศาสตร์ , ซานตาอานา , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) ]
25 นาทีตามโดย equilibration ที่สองเช่น 20% และ 20% DMSO 0.5
mol / L sucrose เป็นเวลา 15 นาที รังไข่เนื้อเยื่อถูกวางไว้แล้วในปริมาณต่ำสุดของสารละลาย
บนแถบโลหะบาง ๆ ( รูป
2 ) ( cryotissue ; เครือฟูจิโนะมิยะคิตะซาโต้ , ญี่ปุ่น ) ,
และจมโดยตรงลงในไนโตรเจนเหลว ( เป็นหมัน ฟูเอนเต้ และ dubettier
, 2004 ) ซึ่งแถบแทรก
ต่อไปนี้ลงในภาชนะป้องกันและวางไว้ในถังเก็บไนโตรเจนเหลว
. สําหรับภาวะโลกร้อน , ฝาครอบป้องกันออก
และ cryotissue แถบโลหะถูกแช่โดยตรงใน 40 37 ° C
มิลลิลิตรหาโซลูชั่นระดับ 1.0 mol / L ซูโครส
1 นาทีแล้ว เนื้อเยื่อรังไข่ถูกย้ายเข้า 15 ml
0.5 โมลต่อลิตรน้ำตาลซูโครสหาโซลูชั่นสำหรับ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
และล้างสองครั้งใน HM โซลูชั่นสำหรับ 10 นาทีก่อนที่ชีวิต
การวิเคราะห์หรือการปลูก ไม่มีผลึกน้ำแข็งก่อตัวเป็น
สังเกตในระหว่างการใด ๆของขั้นตอน ในช่วงเย็นและร้อน
ขั้นตอน ถูกต้อง การวัดอัตราการเย็นและภาวะเท่ากันได้ (

ของเทอร์โม Pro 3000 ; , โอซาก้า , ญี่ปุ่น )