Tag purification strategyAC separat

Tag purification strategy
AC separates protein typically on the basis of interactions between ligands and local domains
of target proteins. The interactions are not interfered by other domains in most case. Therefore,
the tag purification strategy was invented to rapidly separate recombinant protein by fusion
expression and co-separation [25].
First the target protein is expressed with a tag protein in fusion form. Then the target protein
is purified using an affinity column that is specific to tag protein. After that if the tag needs to
be removed, a restrictive protease is used to hydrolyze the fusion protein and the freed tag is
finally be separated from target protein by running the same column once again.
The ideal tag protein should (1) have economical affinity chromatography media for conven‐
ient separation, (2) be very stable in bioactivity, and (3) have a good expressing property that
is helpful to increase the expression of target protein. Commonly used tags are GST tag, FLAG
tag, S tag, Strep tag, His tag, and so on.

Other fusion tags include HA, Myc, FLAG™ (Sigma-Aldrich Co.), MBP, SUMO, and Protein A. Unlike His and GST tags, most of these other tags are called epitope tags because they require specific antibodies (e.g., immobilized anti-HA antibody) for purification. Epitope tags are seldom used for large-scale purification because antibody-based affinity resins are relatively costly compared to simple ligand media such as nickel or glutathione agarose. Instead, epitope tags are more often used for small-scale immunoprecipitation (IP) or co-IP

Biokinetics of affinity chromatography

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กลยุทธ์การทำให้บริสุทธิ์ของแท็กAC แยกโปรตีนโดยทั่วไปบนพื้นฐานของปฏิสัมพันธ์ระหว่าง ligands และโดเมนท้องถิ่นของโปรตีนเป้าหมาย การโต้ตอบจะไม่แทรกแซง โดยโดเมนอื่นในกรณีส่วนใหญ่ ดังนั้นกลยุทธ์การทำให้บริสุทธิ์ของแท็กถูกคิดค้นเพื่อแยก recombinant โปรตีนอย่างรวดเร็ว โดยฟิวชั่นนิพจน์และการแยกร่วม [25]ครั้งแรก โปรตีนเป้าหมายจะแสดง ด้วยโปรตีนแท็กในรูปแบบฟิวชั่น แล้วโปรตีนเป้าหมายบริสุทธิ์ใช้คอลัมน์ที่มีความสัมพันธ์ที่มีเฉพาะแท็กโปรตีน หลังจาก แท็กที่ต้องการจะเอาออก ใช้โปรติเอสความเข้มงวดในการ hydrolyze โปรตีนฟิวชั่น และป้ายอิสระสุดท้าย แยกออกจากโปรตีนเป้าหมาย โดยใช้คอลัมน์เดียวกันอีกครั้งโปรตีนแท็กที่เหมาะที่ควร (1) มีความสัมพันธ์ทางเศรษฐกิจสื่อ chromatography สำหรับ conven‐แยก ient, (2) จะมีเสถียรภาพมากในทางชีวภาพ และ (3) มีคุณสมบัติ expressing ดีที่เป็นประโยชน์ในการเพิ่มการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมาย ใช้แท็กเป็นแท็ก GST ธงป้าย ป้าย S แท็ก Strep แท็กของเขา และแท็กฟิวชั่นอื่น ๆ ได้แก่ HA, Myc, FLAG™ (บริษัท Sigma Aldrich), MBP ซูโม่ และโปรตีน a ซึ่งแตกต่างจากเขาและ GST แท็ก ส่วนใหญ่ของแท็กเหล่านี้จะเรียกว่าแท็ก epitope เนื่องจากใช้แอนติบอดีที่เฉพาะ (เช่น ตรึงป้องกัน-ฮา แอนติบอดี) สำหรับฟอก ไม่ค่อยจะใช้แท็ก Epitope สำหรับฟอกขนาดใหญ่เนื่องจากเรซิ่นแอนติบอดีตามความสัมพันธ์ของค่าใช้จ่ายค่อนข้างสูงเมื่อเทียบกับลิแกนด์ที่เรียบง่ายสื่อเช่น agarose นิกเกิลหรือกลูตาไธโอน แทน แท็ก epitope บ่อยขึ้นใช้สำหรับขนาดเล็ก immunoprecipitation จึง (IP) หรือ co-IPBiokinetics ของความสัมพันธ์ chromatography

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กลยุทธ์การแท็กAC แยกโปรตีนโดยทั่วไปบนพื้นฐานของการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างลิแกนด์ท้องถิ่นและโดเมนของโปรตีนเป้าหมาย ปฏิสัมพันธ์ไม่แทรกแซงโดยโดเมนอื่น ๆในกรณีส่วนใหญ่ ดังนั้นแท็กการคิดค้นกลยุทธ์อย่างรวดเร็วโดยการแยกโปรตีนรีคอมบิแนนท์การแสดงออกและการแยก Co [ 25 ]โปรตีนเป้าหมายแรกจะแสดงด้วยแท็กโปรตีนในแบบฟอร์ม แล้วเป้าหมายของโปรตีนจะบริสุทธิ์โดยใช้ affinity คอลัมน์ที่เฉพาะเจาะจงกับแท็กโปรตีน หลังจากนั้นถ้าต้องการให้แท็กถูกเอาออก และเอนไซม์ ที่ใช้ย่อยสลายการจำกัดโปรตีน และปลดปล่อย แท็กในที่สุดก็แยกจากโปรตีนเป้าหมายโดยการใช้คอลัมน์เดียวกันอีกครั้งโปรตีนแท็กที่เหมาะควร ( 1 ) มีขี้รังแค สื่อ conven ‐ประหยัดient แยก ( 2 ) เป็นมีเสถียรภาพมากในทางชีวภาพ และ ( 3 ) มีการแสดงทรัพย์สินที่จะเป็นประโยชน์เพื่อเพิ่มการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมาย ปกติใช้แท็ก GST แท็กธงแท็ก , แท็ก , แท็กแท็ก Strep , ของเขา , และดังนั้นบนTags : ฟิวชั่นอื่นๆ รวมถึง ฮา มิค™ , ธง ( ซิกม่า Aldrich Co . ) , MBP , sumo , และโปรตีน . ซึ่งแตกต่างจากของเขา และภาษีป้าย มากที่สุดของแท็กอื่น ๆ เหล่านี้จะเรียกว่าไวรัสแท็กเพราะพวกเขาต้องใช้แอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง ( เช่น แอนติบอดีต่อต้าน ( ฮา ) บริสุทธิ์ ไวรัสแท็กจะไม่ค่อยใช้สำหรับฟอกขนาดใหญ่เพราะแอนติบอดีจากเรซิ่นจะค่อนข้างแพง เมื่อเทียบกับทางสื่อเกิดง่าย เช่น นิกเกิล หรือ กลูต้าไธโอน , . แต่ไวรัสแท็กจะใช้บ่อยสำหรับขนาดเล็ก immunoprecipitation ( IP ) หรือ บริษัท ไอพีbiokinetics ของ affinity chromatography