Overview of droplet digital PCR. Th

Overview of droplet digital PCR. The RainDrop ddPCR workflow consisted of three steps: (1) PCR reaction mixtures for each sample were pipetted into one of eight wells on the Source microfluidic chip, which was next placed above empty PCR tubes in the RainDrop Source. Pressure-driven air flow forced the aqueous mixture into the chip along with a surfactant-containing fluorocarbon oil to generate five picoliter droplets, and then deposited automatically into the PCR tube strip. (2) The PCR tube strip was placed into a standard thermal cycler for endpoint PCR amplification, with single-target-molecule-containing droplets resulting in specific probe hydrolysis (PCR+) and bright fluorescence and the majority of droplets, containing no target molecule, resulting in only background probe fluorescence (PCR−). (3) Each droplet’s fluorescence was detected using a Sense microfluidic chip. The fluorescence was detected and processed into a two-dimensional scatter plot display, custom software was used to draw appropriate gates for each droplet endpoint cluster, and the number of droplets within each gate was counted.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ภาพรวมของหยด PCR ดิจิทัล ลำดับ RainDrop ddPCR ประกอบด้วยขั้นตอนที่สาม: ส่วนผสมของปฏิกิริยา PCR (1) สำหรับตัวอย่างแต่ละได้ pipetted เข้าบ่อแปดในแหล่ง microfluidic ชิพ ซึ่งถูกวางไว้ข้างหลอด PCR เปล่าในแหล่ง RainDrop ถัดไป ควบคุมความดันอากาศไหลบังคับผสมอควีเป็นชิปพร้อมน้ำมัน fluorocarbon ประกอบด้วย surfactant เพื่อสร้าง 5 picoliter หยด แล้ว ฝากโดยอัตโนมัติลงในแถบหลอด PCR (2 แถบหลอด PCR)ที่อยู่ใน cycler ร้อนเป็นมาตรฐานสำหรับปลายทาง PCR ขยาย กับหยดเดียว-เป้าหมายโมเลกุลประกอบด้วยผลใน fluorescence สว่างโพรบเฉพาะไฮโตรไลซ์ (PCR +) และส่วนใหญ่ของหยด ที่ประกอบด้วยโมเลกุลไม่มีเป้าหมาย ผลโพรบพื้น fluorescence (PCR−) เท่านั้น (3) แต่ละหยด fluorescence พบใช้ชิ microfluidic ความรู้สึก Fluorescence ที่ตรวจพบ และการกระจายสองพล็อตแสดง กำหนดเองใช้ซอฟต์แวร์ในการวาดประตูที่เหมาะสมสำหรับแต่ละคลัสเตอร์ปลายหยด และมีนับจำนวนหยดภายในประตูแต่ละรูป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ภาพรวมของวิธี PCR หยดดิจิตอล เวิร์กโฟลว์ RainDrop ddPCR ประกอบด้วยสามขั้นตอนคือ (1) วิธี PCR ผสมปฏิกิริยาสำหรับแต่ละตัวอย่างถูกปิเปตเป็นหนึ่งในแปดหลุมในแหล่งที่มาของไมโครชิปซึ่งถูกนำมาวางต่อไปด้านบนหลอด PCR ว่างใน RainDrop มา การไหลของอากาศที่ขับเคลื่อนด้วยแรงดันบังคับให้ผสมน้ำเข้าไปในชิปพร้อมกับลดแรงตึงผิวที่มีส่วนผสมของฟลูออโรน้ำมันเพื่อสร้างห้าหยด picoliter และฝากแล้วโดยอัตโนมัติในแถบหลอด PCR (2) แถบหลอด PCR ถูกวางลงใน Cycler ความร้อนมาตรฐานสำหรับปลายทางขยาย PCR ที่มีหยดเดียวเป้าหมายโมเลกุลที่มีผลในการย่อยสลายสอบสวนเฉพาะเจาะจง (PCR +) และการเรืองแสงที่สว่างและส่วนใหญ่ของหยดน้ำที่มีโมเลกุลเป้าหมายไม่มี ผลในการเรืองแสงพื้นหลังสอบสวนเท่านั้น (PCR-) (3) การเรืองแสงหยดแต่ละคนได้รับการตรวจพบโดยใช้ความรู้สึกไมโครชิป การเรืองแสงได้รับการตรวจพบและแปรรูปเป็นสองมิติแสดงผลแปลงกระจายซอฟต์แวร์เองถูกใช้ในการวาดประตูที่เหมาะสมสำหรับคลัสเตอร์ปลายทางหยดในแต่ละครั้งและจำนวนหยดในแต่ละประตูนับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ภาพรวมของตัวแบบ PCR เวิร์กโฟลว์ที่หยาดฝน ddpcr ประกอบด้วย 3 ขั้นตอนคือ ( 1 ) เพื่อตรวจหาสารผสมแต่ละจำนวน pipetted เป็นหนึ่งในแปดหลุมบนแหล่งไมโครฟลูอิดิกชิปซึ่งอยู่ถัดไปอยู่ข้างบนว่าง PCR หลอดในเม็ดฝนที่มาแรงดันขับเคลื่อน การไหลของอากาศบังคับให้ผสมน้ำเข้าไปในชิป ควบคู่กับสารลดแรงตึงผิวที่มีฟลูโรคาร์บอนเพื่อสร้าง 5 พิโคลิตร น้ำมันหยด แล้วโอนโดยอัตโนมัติใน PCR หลอดแถบ ( 2 ) แถบ PCR หลอดถูกวางไว้เป็นวงจรความร้อนมาตรฐาน ( endpoint ) ,กับเป้าหมายเดียวที่มีผลในการย่อยโมเลกุลหยดสอบสวนเฉพาะ ( PCR ) และการเรืองแสงที่สดใส และส่วนใหญ่มีเป้าหมายที่ไม่มีโมเลกุล เป็นผลในการตรวจสอบพื้นหลังเท่านั้น ( PCR − ) ( 3 ) ลูกอมแต่ละเรือง ถูกตรวจพบใช้ความรู้สึกไมโครฟลูอิดิกชิปเรืองแสงที่ตรวจพบ และประมวลผลเป็นผู้กระจายแปลงแสดงซอฟต์แวร์เองก็เคยวาดประตูที่เหมาะสมสำหรับแต่ละหยด เกิดกลุ่มและจำนวนของหยดภายในแต่ละประตูก็นับ