The ploidy stability of the regener

The ploidy stability of the regenerants, derived from in vitro leaf-disc cultures, was determined by flow cytometry. For flow cytometry, the nuclear suspension from fresh plant material was prepared by chopping the tissues with scalpel in cold woody
plant buffer (WPB; 0.2 M Tris–HCl, 4 mM MgCl2·6H2O, 2 mM EDTA Na2·2H2O, 86 mM NaCl, 10 mM sodium metabisulfite, 1% (v/v) Tri-ton X-100, pH 7.5 (Loureiro et al., 2007)). The suspension was then filtered through a 30 m nylon filter membrane (Millipore, USA) to remove fragments and large tissue debris. For staining nuclei, 50  gml−1 propidium iodide (PI; Fluka) was added to the filtered suspension. To prevent staining of double stranded RNA, 50 gml−1 of RNAase (Fluka) was also added. Samples were stirred for 20 min and analyzed thereafter. In vivo plants (from the open field) were used as the controls for ploidy comparison..

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พล็อยดีเสถียรภาพของ regenerants มาจากใบดิสก์ในวัฒนธรรม ถูกกำหนด โดยเซลล์ flow สำหรับเซลล์ flow ระงับนิวเคลียร์จากพืชสดวัสดุถูกเตรียม โดยสับเนื้อเยื่อ ด้วย scalpel ในวู้ดดี้โรงงานบัฟเฟอร์ (ขณะนี้ 0.2 M ตรี – HCl, MgCl2·6H2O, 4 mM 2 mM EDTA Na2·2H2O, 86 mM NaCl, 10 mM โซเดียม metabisulfite, 1% (v/v) ตรีตัน X 100 ค่า pH 7.5 (Loureiro et al., 2007)) การระงับแล้วมี filtered ผ่านการ 30 m ไนล่อน filter เมมเบรน (มาก สหรัฐอเมริกา) เพื่อเอาชิ้นส่วนและเศษเนื้อเยื่อขนาดใหญ่ การย้อมสีแอลฟา 50 gml−1 ไอโอไดด์ propidium (PI Fluka) ถูกเพิ่มเข้าไประงับ filtered เพื่อป้องกันการย้อมสีของอาร์เอ็นเอตกค้างคู่ 50 gml−1 ของ RNAase (Fluka) ถูกเพิ่ม ตัวอย่างมีกวนใน 20 นาที และวิเคราะห์หลังจากนั้น พืชในสัตว์ทดลอง (จาก field เปิด) ใช้เป็นตัวควบคุมสำหรับการเปรียบเทียบพล็อยดี...

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความมั่นคงของ ploidy เพาะมาจากในหลอดทดลองวัฒนธรรมใบดิสก์ถูกกำหนดโดยชั้นโอ๊ยภูมิคุ้มกัน สำหรับชั้นโอ๊ยภูมิคุ้มกัน, การระงับนิวเคลียร์จากวัสดุจากพืชสดถูกจัดทำขึ้นโดยการตัดเนื้อเยื่อด้วยมีดผ่าตัดในไม้เย็น
บัฟเฟอร์พืช (WPB; 0.2 M Tris-HCl 4 มิลลิ MgCl2 · 6H2O 2 มิลลิ EDTA Na2 · 2H2O 86 มิลลิโซเดียมคลอไรด์, 10 มิลลิโซเดียม metabisul ไฟเต้, 1% (v / v) ไตรตัน X-100, พีเอช 7.5 (Loureiro et al., 2007)) ระงับแล้ว Fi ltered ผ่าน 30 ม. เมมเบรนกรองสายไนลอน (ค, สหรัฐอเมริกา) เพื่อเอาชิ้นส่วนและเศษเนื้อเยื่อขนาดใหญ่ สำหรับการย้อมสีนิวเคลียส 50? GML-1 propidium ไอโอไดด์ (PI; Fluka) ถูกบันทึกอยู่ในสาย ltered ระงับ เพื่อป้องกันไม่ให้การย้อมสีของอาร์เอ็นเอควั่นคู่ 50 GML-1 ของ RNAase (Fluka) นอกจากนี้ยังได้รับการเพิ่ม ตัวอย่างกวนเป็นเวลา 20 นาทีและวิเคราะห์หลังจากนั้น พืชในร่างกาย (จากภาคสนามเปิด) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมสำหรับการเปรียบเทียบ ploidy ..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ส่วนการเสถียรภาพของ regenerants ที่ได้มาจากการเพาะใบดิสก์วัฒนธรรมถูกกำหนดโดยflโอ๊ย ( . สำหรับflโอ๊ย ( , ระงับนิวเคลียร์จากวัสดุพืชสดที่เตรียมไว้โดยการตัดเนื้อเยื่อด้วยมีดในเย็นวู้ดดี้
พืชบัฟเฟอร์ ( wpb ; 0.2 เมตรโดย– HCL 4 มม. ชุดด้วย 6h2o 2 mM EDTA ๆด้วย 2H2O-dx , เกลือ , โซเดียม metabisul 86 มม. 10 มม. จึงเต , 1% ( v / 5 ) ไทรตันเมื่อ pH 75 ( loureiro et al . , 2007 ) ถูกระงับแล้วจึง ltered ผ่าน 30  M ไนล่อนจึง lter เมมเบรน ( มิลลิ , USA ) เพื่อเอาชิ้นส่วนขนาดใหญ่ และเศษเนื้อเยื่อ สำหรับการย้อมสีนิวเคลียส , 50  GML − 1 propidium ไอโอไดด์ ( ปี่ ; fluka ) คือเพิ่มจึง ltered ระงับ เพื่อป้องกันไม่ให้คราบของคู่ตีเกลียว RNA , 50  GML − 1 rnaase ( fluka ) ยังเพิ่มจำนวนคนเป็นเวลา 20 นาที และวิเคราะห์ หลังจากนั้น ฤทธิ์ในพืช ( จากการเปิดจึงละมั่ง ) ใช้เป็นตัวควบคุมสำหรับการเปรียบเทียบ . . . . . . .