Bioemulsifier chemical characteriza

Bioemulsifier chemical characterization
Extraction and purification

The bioemulsifier was extracted from cell-free supernatants
using the Folch extraction method that is commonly
used to extract lipids from biomolecules. The
Folch extraction procedure was performed as described
elsewhere [44]. Briefly, a chloroform/methanol mixture
(2:1) was added to the supernatant sample to a final
chloroform/methanol/water ratio of 8:4:3. The mixture
was centrifuged (9000 × g, 5 min), the organic layer was
collected and the samples were evaporated to dryness
under N2 at 37°C for 30 min. Prior to 1H NMR spectroscopy
analysis, the samples were re-dissolved in deuterated
chloroform (CDCl3).

Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) analysis
The bioemulsifier recovered from the cell free supernatant
was characterized by FT-IR. To perform the FT-IR assays,
pellets were prepared by mixing 2 mg of biosurfactant
with 100 mg of potassium bromide and pressing them at 9
metric tons for 3 min. The pellet of biosurfactant was
inserted in the FT-IR spectrometer and the respective
infrared spectrum obtained. FT-IR spectra were collected
on a Bruker Tensor 27 FT-IR spectrometer, using KBr
pellets. Data were recorded at room temperature, in the
range 4000 to 500 cm−1 by accumulating 64 scans with a
resolution of 4 cm−1.

Gel permeation chromatography (GPC) and sugars analysis
The GPC analysis of the bioemulsifier, dissolved in
ultra-pure water (HPLC for gradient analysis, ACROS
Organics Chem. Co.) containing 0.1 M NaNO3 and
0.02% NaN3 to a concentration of ca. 1.0%, was carried
out on a PL-GPC 110 system (Polymer Laboratories Ldt.,
UK) equipped with refraction index (RI) detector using
two Plaquagel-OH MIXED 8 μm columns (300 mm ×
7.5 mm) protected by Plaquagel 8 μm guard pre-column
(Polymer Laboratories Ltd., UK). The temperature of the
injector and the columns was kept constant at 36°C. The
eluent, ultra-pure water containing 0.1 M NaNO3 and
0.02% NaN3, was pumped at a flow rate of 0.9 ml/min.
The SEC columns were calibrated using pullulan standards
(Polymer Laboratories Ldt., UK). The preliminary
analysis on the sugar composition by acid methanolysis
was carried out according to a previously published procedure
[45].

Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy
13C solid-state Cross Polarization-Magic Angle Spinning
Nuclear Magnetic Resonance (13C CP-MAS NMR) spectra
were recorded on a BrukerAvance400 spectrometer
operating at 100.6 MHz (9.4 T). Samples were spun in a
zirconia’s Bruker rotor at 7 kHz. Acquisition parameters
were as follows: 90° proton pulse of 4 μs width, contact
time 2 ms, and pulse delay of 4 s. The 1H NMR spectra
of bioemulsifier soluble in CDCl3 were recorded at 25°C
on a BrukerAvance 300 spectrometer operating at
300.13 MHz. Radio frequency was 90° pulse, width of
10.2 μs, relaxation delay 12 s, and 200–400 scans. The
chemical shifts are reported relative to tetramethylsilane
(TMS) used as an internal standard (δ = 0.00).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จำแนกสารเคมี Bioemulsifierสกัดและทำให้บริสุทธิ์Bioemulsifier ถูกสกัดจากเซลล์ฟรี supernatantsใช้วิธีสกัด Folch ซึ่งโดยทั่วไปใช้ในการดึงโครงการจากชื่อโมเลกุลชีวภาพ ที่ขั้นตอนการสกัด Folch ทำตามที่อธิบายไว้อื่น ๆ [44] สั้น ๆ ผสมระหว่างคลอโรฟอร์ม/เมทานอลเพิ่มอย่าง supernatant ไปตัวสุดท้าย (2:1)คลอโรฟอร์มเมทานอล/น้ำอัตราส่วน 8:4:3 ส่วนผสมมี centrifuged (9000 × g, 5 นาที), ชั้นอินทรีย์ได้รวบรวม และตัวอย่างหายไปกับความแห้งกร้านภายใต้ N2 ที่ 37° C สำหรับ 30 นาทีก่อน 1 H NMR กการวิเคราะห์ ตัวอย่างการถูกละลายอีกครั้งใน deuteratedคลอโรฟอร์ม (CDCl3)การแปลงฟูรีเยกอินฟราเรด (FT IR) วิเคราะห์Bioemulsifier การกู้คืนจาก supernatant ฟรีเซลล์มีลักษณะใด FT การ assays FT-IRขี้ถูกเตรียม โดยผสม biosurfactant 2 มก.กับ 100 มิลลิกรัมของโพแทสเซียมโบรไมด์และกดไปที่ 9เมตริกตันใน 3 นาที เม็ดของ biosurfactant ถูกแทรกในสเปกโตรมิเตอร์ FT-IR และที่เกี่ยวข้องคลื่นอินฟราเรดได้ FT-IR แรมสเป็คตราถูกเก็บรวบรวมในการ Bruker Tensor 27 ฟุตอินฟราเรดสเปกโตรมิเตอร์ ใช้ KBrอัดเม็ด ข้อมูลถูกบันทึกไว้ที่อุณหภูมิห้อง ในการในช่วง 4000-500 cm−1 โดยสแกน accumulating 64 กับการความละเอียดของ 4 cm−1เจลซึม chromatography (GPC) และการวิเคราะห์น้ำตาลวิเคราะห์ GPC ของ bioemulsifier ละลายในน้ำบริสุทธิ์พิเศษ (HPLC สำหรับการวิเคราะห์ไล่โทนสี ACROSด้าน Chem. จำกัด) ประกอบด้วย 0.1 M NaNO3 และทำ 0.02% NaN3 เพื่อความเข้มข้นของ ca 1.0%บนระบบ PL GPC 110 (Ldt ห้องปฏิบัติการพอลิเมอร์.,สหราชอาณาจักร) พร้อมกับการหักเห (RI) ดัชนีจับใช้คอลัมน์ μm Plaquagel OH 8 ผสมสอง (× 300 มม.7.5 mm) ป้องกัน โดย Plaquagel 8 μm รักษาคอลัมน์ก่อน(พอลิเมอร์ จำกัด สหราชอาณาจักร) อุณหภูมิของการหัวฉีดและคอลัมน์ที่ถูกเก็บไว้คงที่ที่ 36 องศาเซลเซียส ที่eluent น้ำบริสุทธิ์พิเศษประกอบด้วย 0.1 M NaNO3 และ0.02% NaN3 ถูกสูบที่อัตราการไหลของ 0.9 ml/minคอลัมน์วินาทีที่ถูกปรับเทียบโดยใช้มาตรฐาน pullulan(พอลิเมอร์ปฏิบัติ Ldt. สหราชอาณาจักร) ในเบื้องต้นวิเคราะห์องค์ประกอบน้ำตาลโดยกรด methanolysisได้ดำเนินการตามขั้นตอนการเผยแพร่ก่อนหน้านี้[45]กการสั่นพ้องแม่เหล็กนิวเคลียร์ (NMR)13C โซลิดสเตตข้ามโพลาไรซ์มหัศจรรย์มุมหมุนการสั่นพ้องแม่เหล็กนิวเคลียร์ (13C CP มาส NMR) แรมสเป็คตราถูกบันทึกไว้ในสเปกโตรมิเตอร์ BrukerAvance400ปฏิบัติที่ 100.6 MHz (9.4 T) ตัวอย่างที่ปั่นในการใบพัด Bruker ของ zirconia ที่ 7 kHz พารามิเตอร์การซื้อมีดังนี้: ชีพจรโปรตอน 90 องศาความกว้าง 4 μs ติดต่อเวลา 2 ms และหมุนเลื่อน 4 s 1H NMR แรมสเป็คตราของ bioemulsifier ละลายใน CDCl3 บันทึกที่ 25° Cในสเปกโตรมิเตอร์ BrukerAvance 300 การดำเนินงานที่300.13 MHz. ความถี่วิทยุเป็นแบบหมุน 90 องศา ความกว้างของ10.2 μs ผ่อนล่าช้า 12 s กการสแกน 200 – 400 ที่รายงานกะเคมีสัมพันธ์ tetramethylsilane(TMS) ใช้เป็นการภายใน (δ = 0.00)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Bioemulsifier
ลักษณะทางเคมีการสกัดและการทำให้บริสุทธิ์bioemulsifier ถูกสกัดจาก supernatants มือถือฟรีโดยใช้วิธีการสกัดFolch ที่เป็นที่นิยมใช้ในการสกัดไขมันจากสารชีวโมเลกุล ขั้นตอนการสกัด Folch ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น[44] สั้น ๆ , คลอโรฟอร์ม / สารผสมเมทานอล(2: 1) ถูกบันทึกอยู่ในตัวอย่างใสที่จะเป็นครั้งสุดท้ายคลอโรฟอร์ม/ เมทานอล / น้ำอัตราส่วน 8: 4: 3 ส่วนผสมที่ได้รับการหมุนเหวี่ยง (9000 ×กรัม 5 นาที) ชั้นอินทรีย์ถูกเก็บรวบรวมและตัวอย่างที่ถูกระเหยแห้งภายใต้ N2 ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ก่อนที่จะมีสเปคโทร 1H NMR วิเคราะห์ตัวอย่างเป็นอีกครั้งที่ละลายใน deuterated คลอโรฟอร์ม (CDCl3). แปลงฟูริเยอินฟราเรด (FT-IR) การวิเคราะห์bioemulsifier หายจากเซลล์ใสฟรีก็มีลักษณะFT-IR เพื่อดำเนินการตรวจ FT-IR, เม็ดได้จัดทำขึ้นโดยการผสม 2 mg ของแหล่งคาร์บอนที่มี100 มิลลิกรัมของโบรไมด์โพแทสเซียมและกดพวกเขาที่ 9 ตันเป็นเวลา 3 นาที เม็ดของแหล่งคาร์บอนที่ถูกแทรกอยู่ในสเปกโตรมิเตอร์ FT-IR และแต่ละคลื่นอินฟราเรดได้ สเปกตรัม FT-IR ถูกเก็บในBruker เทนเซอร์ 27 สเปกโตรมิเตอร์ FT-IR โดยใช้ KBr เม็ด ข้อมูลที่ถูกบันทึกไว้ที่อุณหภูมิห้องใน4000 ช่วง 500 ซม-1 โดยการสะสม 64 สแกนด้วยความละเอียด4 ซม-1. โคซึมผ่านเจล (GPC) และการวิเคราะห์น้ำตาลการวิเคราะห์GPC ของ bioemulsifier ที่ละลายในบริสุทธิ์น้ำ (HPLC เพื่อการวิเคราะห์การไล่ระดับสี ACROS Organics Chem. จำกัด ) ที่มี 0.1 M NaNO3 และ0.02% NaN3 กับความเข้มข้นของแคลิฟอร์เนีย 1.0% ได้ดำเนินการออกPL-GPC 110 ระบบ (พอลิเมอห้องปฏิบัติการ Ldt. สหราชอาณาจักร) พร้อมกับดัชนีหักเห (RI) เครื่องตรวจจับโดยใช้สองPlaquagel โอผสม 8 ไมโครเมตรคอลัมน์ (300 มิลลิเมตร× 7.5 มิลลิเมตร) การป้องกันโดย Plaquagel 8 ไมโครเมตร ป้องกันคอลัมน์ก่อน(พอลิเมอห้องปฏิบัติการ จำกัด สหราชอาณาจักร) อุณหภูมิของหัวฉีดและคอลัมน์คงที่ที่ 36 องศาเซลเซียส ชะน้ำบริสุทธิ์ที่มี 0.1 M NaNO3 และ0.02% NaN3 ถูกสูบในอัตราการไหล 0.9 มล. / นาที. คอลัมน์ ก.ล.ต. ได้รับการสอบเทียบโดยใช้มาตรฐาน pullulan (พอลิเมอห้องปฏิบัติการ Ldt. สหราชอาณาจักร) เบื้องต้นการวิเคราะห์เกี่ยวกับองค์ประกอบของน้ำตาลโดย methanolysis กรดได้ดำเนินการตามขั้นตอนการเผยแพร่ก่อนหน้านี้[45]. นิวเคลียร์ด้วยคลื่นสนามแม่เหล็ก (NMR) สเปคโทร13C solid-state ข้าม Polarization-Magic มุมปั่นด้วยคลื่นสนามแม่เหล็กนิวเคลียร์(13C CP-MAS NMR) สเปกตรัมที่ถูกบันทึกไว้ในสเปกโตรมิเตอร์BrukerAvance400 การดำเนินงานที่ 100.6 MHz (9.4 T) ตัวอย่างปั่นในโรเตอร์ Bruker เซอร์โคเนียที่ 7 เฮิร์ทซ์ พารามิเตอร์การเข้าซื้อกิจการดังต่อไปนี้: 90 °ชีพจรโปรตอน 4 ความกว้างไมโครวินาทีติดต่อเวลา2 มิลลิวินาทีและความล่าช้าชีพจรของ 4 s สเปกตรัม 1H NMR ของ bioemulsifier ละลายใน CDCl3 ถูกบันทึกไว้ที่ 25 ° C ใน BrukerAvance 300 สเปกโตรมิเตอร์ปฏิบัติงานที่300.13 MHz ความถี่วิทยุ 90 °ชีพจรกว้าง10.2 ไมโครวินาทีล่าช้าผ่อนคลาย 12 วินาที, และ 200-400 สแกน กะสารเคมีจะมีการรายงานเมื่อเทียบกับ tetramethylsilane (TMS) ที่ใช้เป็นมาตรฐานภายใน (δ = 0.00)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ bioemulsifier คุณสมบัติทางเคมี


bioemulsifier สกัดจากการสังเคราะห์ supernatants
ใช้ฟอล์ชด้วยวิธีการที่มักใช้สกัดจากสารชีวโมเลกุล ลิพิด
.
ฟอล์ชขั้นตอนการสกัดการอธิบาย
ที่อื่น [ 44 ] สั้น , ผสมเมทานอลคลอโรฟอร์ม /
( 2 : 1 ) คือการเพิ่มจำนวนสูงถึงสุดท้าย
อัตราส่วนเมทานอลคลอโรฟอร์ม / / น้ำ 8:4:3 . ส่วนผสม
คือระดับ ( 9000 × G , 5 นาที ) ชั้นสารอินทรีย์
รวบรวมและทำการระเหยแห้ง
ภายใต้ก๊าซไนโตรเจนที่ 37 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีก่อน 1 การวิเคราะห์ NMR สเปกโทรสโกปี
, จำนวนกำลังละลายในคลอโรฟอร์ม ( cdcl3 ) deuterated


ฟูเรียร์ทรานฟอร์มอินฟราเรดสเปกโทรสโกปี ( -
) การวิเคราะห์การ bioemulsifier หายจากมือถือฟรีน่าน
คือ characterized โดย FT-IR . การใช้เทคนิค FT-IR , เตรียมโดยการผสมเม็ด

2 มก. ) 100 มิลลิกรัมของโพแทสเซียมโบรไมด์และกดไว้ที่ 9
ตันเป็นเวลา 3 นาที เม็ด ) แทรกอยู่ใน FT-IR Spectrometer ได้

อินฟราเรดสเปกตรัมและเกี่ยวข้องรับ อินฟราเรดสเปกตรัมที่ได้รวบรวม
ในเมตริกซ์โดยใช้ FT-IR Spectrometer BRUKER 27 , KBS
เม็ด ข้อมูลที่ถูกบันทึกไว้ในอุณหภูมิห้อง ในช่วง 4 , 500
cm − 1 โดยการสแกนด้วย ความละเอียด 64
4 cm − 1 .

เจลผ่านโครมาโตกราฟี ( GPC ) และน้ำตาลการวิเคราะห์
GPC การวิเคราะห์ bioemulsifier ละลายในน้ำบริสุทธิ์สูง
( HPLC ในการวิเคราะห์การ acros
สารอินทรีย์เคมี บริษัท ) ที่มีความเข้มข้น 0.1 M NaNO3 และ
002 % nan3 เพื่อความเข้มข้นประมาณ 1.0% ได้ด
ใน pl-gpc 110 ระบบห้องปฏิบัติการพอลิเมอร์ ldt .
UK ) ซึ่งมีดัชนีการหักเหของแสง ( RI ) เครื่องตรวจจับการใช้
2 plaquagel โอผสม 8 μ M คอลัมน์ ( 300 มม. ×
7.5 มม. ) ป้องกันโดย plaquagel 8 μ M ยามก่อน คอลัมน์
( พอลิเมอร์ห้องปฏิบัติการ จำกัด , UK ) อุณหภูมิของ
ฉีดและคอลัมน์คงที่ที่ 36 ° C นี้
,น้ำบริสุทธิ์สูงที่มีความเข้มข้น 0.1 M NaNO3 และ
0.02 % nan3 คือสูบที่อัตราการ ไหลของ 0.9 มิลลิลิตร / นาที

เดี๋ยวคอลัมน์การปรับมาตรฐานของพูลลูแลน ( พอลิเมอร์ห้องปฏิบัติการ ldt . UK ) การวิเคราะห์เบื้องต้น
ในองค์ประกอบน้ำตาลกรดเมทาโนไลซิส
ได้ดำเนินการตามขั้นตอนที่ตีพิมพ์ก่อนหน้านี้
[ 45 ] .

แม่เหล็กนิวเคลียร์ ( NMR ) spectroscopy
ของแข็ง 13C โพลาไรเซชันไขว้มุมเวทมนตร์ปั่น
แม่เหล็กนิวเคลียร์ ( 13C NMR สเปกตรัม
cp-mas ) ถูกบันทึกไว้ใน brukeravance400 สเปก
ปฏิบัติการที่ 100.6 MHz ( 9.4 t ) จำนวนเสาเข็มใน
ของเซอร์โคเนีย BRUKER ใบพัดที่ 7 กิโลเฮิร์ทซ์ ซื้อค่า
ดังนี้ 90 องศา ชีพจรของโปรตอน 4 μ S กว้าง เวลาติดต่อ
2 ms และชีพจรล่าช้า 4 s 1H NMR spectra
ของ bioemulsifier ละลายใน cdcl3 บันทึกที่ 25 ° C
บน brukeravance 300 กล้องผ่าตัด
300.13 MHz ความถี่ของคลื่นวิทยุ 90 องศาชีพจรความกว้างของ
10.2 μ s , ผ่อนคลายล่าช้า 12 , 200 – 400 สแกน
เคมีกะรายงานเทียบกับเตตร้าเมทิลไซเลน
( TMS ) ใช้เป็นมาตรฐานภายใน ( δ
= 0.00 )