In vitro batch fermentation
Rumen fluid was collected in equal proportion from three fistulated sheep (Texel, adult castrated males, 61.2 ± 9 kg on
average). One month before the beginning of the trial, the animals were fed daily 1200 g of a diet composed of, per kg (as
fed), cocksfoot hay (800 g), barley (60 g), beet pulp (50 g), corn (34 g), soya bean meal (28 g), wheat bran (12 g), molasses and
minerals (16 g). The daily diet was divided into two equal meals given at 08:00 h and 16:00 h. Animals had free access to
water and salt block (Sel’pur, Salins, Paris, France). For each day of incubation, a sample of rumen content was withdrawn
from the rumen canula prior to the first meal in the morning. The rumen contents from the three sheep were pooled in
equal proportions into a closed container, transferred to the laboratory and squeezed through a polyester monofilament
fabric (mesh opening 800 m) in order to obtain the rumen fluid used as inoculum for the in vitro incubations. The time
between rumen content withdrawal and inoculation of the fermenters did not exceed 25 min. Fermentation was conducted
as described by Niderkorn et al. (2012). In brief, 600 ± 0.5 mg of freeze dried silage material was placed in 120 ml serum
bottles, pre-warmed at 39 ◦C and flushed with N2; 40 ml of buffered rumen fluid (strained rumen fluid diluted 1:2 (v/v) in an
anaerobic phosphate:carbonate buffer solution, initial pH 7.04 ± 0.01) was added, then the bottles were sealed hermetically
with butyl rubber stopper and aluminium crimp seals. Blanks without any plant substrate (only buffered rumen fluid) were
incubated during the different runs. Samples of buffered rumen fluid were also taken at time 0 to determine net production
of VFA and NH3-N. All the bottles were incubated in a shaking water bath at 39 ◦C. The gas production was recorded at
24 h using the pressure transducer technique, as described by Theodorou et al. (1994). Gas samples were taken from the
headspace of the serum bottles for determination of gas composition (CH4, CO2 and H2). After 24 h, the fermentation was
stopped and the content of each bottle was treated and centrifuged as described by Niderkorn et al. (2012) to determine
pH, VFA and NH3-N in the medium. The apparent degradation of DM was determined by difference between DM of plant
material before the fermentation and DM of residue after 24 h of fermentation.
หมักในชุดต่อน้ำมันถูกรวบรวมในสัดส่วนที่เท่ากันจากสาม fistulated แกะ (Texel ชายตอนผู้ใหญ่ ± 61.2 กก. 9 บนเฉลี่ย) หนึ่งเดือนก่อนที่จะเริ่มต้นทดลอง สัตว์ที่เลี้ยงทุกวัน 1200 กรัมของอาหารประกอบด้วย ต่อกิโลกรัมเป็นเลี้ยง), เฮย์ cocksfoot (800 กรัม), ข้าวบาร์เลย์ (60 กรัม), เยื่อผักชนิดหนึ่ง (50 กรัม), ข้าวโพด (34 กรัม), อาหารถั่วเหลือง (28 กรัม), รำข้าวสาลี (12 กรัม) กากน้ำตาล และแร่ธาตุ (16 กรัม) อาหารประจำวันถูกแบ่งออกเป็นสองมื้อเท่าณ h 08:00 และ 16:00 h. สัตว์ได้ฟรีถึงน้ำและเกลือบล็อก (Sel'pur, Salins ปารีส ฝรั่งเศส) ถูกถอนตัวอย่างเนื้อหาต่อในแต่ละวันของคณะทันตแพทยศาสตร์จาก canula ต่อก่อนมื้อแรกในตอนเช้า เนื้อหาต่อจากแกะสามถูกทางถูกพูลในสัดส่วนที่เท่ากันในภาชนะปิด โอนย้ายไปยังห้องปฏิบัติการ และคั้นผ่านสายรัดโพลีเอสเตอร์ผ้า (ตาข่ายเปิด 800 เมตร) เพื่อให้ได้น้ำมันต่อใช้เป็น inoculum incubations ใน เวลาระหว่างเนื้อหาถอนและ inoculation fermenters ที่ไม่เกิน 25 นาทีต่อ วิธีหมักตามที่อธิบายไว้โดย Niderkorn et al. (2012) สังเขป 600 ± 0.5 mg ของแช่แข็งแห้งไซเลจต่อวัสดุถูกวางในซีรั่ม 120 มล.ขวด warmed ก่อนที่ 39 ◦C และล้าง ด้วย N2 40 มล.ของเหลวต่อถูกบัฟเฟอร์ (เครียดต่อน้ำมันผสม 1:2 (v/v) ในการเพิ่มฟอสเฟต: คาร์บอเนตไม่ใช้บัฟเฟอร์โซลูชัน pH เริ่มต้น 7.04 ± 0.01) แล้วขวดปิดผนึกระบบจุกยางส้ม butyl และอลูมิเนียมตราประทับใจคับ มีช่องว่างโดยไม่มีพื้นผิวพืช (น้ำมันต่อถูกบัฟเฟอร์เท่านั้น)incubated ระหว่างทำงานที่แตกต่างกัน ตัวอย่างของเหลวต่อถูกบัฟเฟอร์ยังถ่ายเวลา 0 กำหนดผลิตสุทธิVFA และ NH3 N. ขวดทั้งหมดถูก incubated ในน้ำน้ำงก ๆ ที่ 39 ◦C การผลิตก๊าซเป็นบันทึกที่24 ชมโดยใช้เทคนิคพิกัดแรงดัน ตามที่อธิบายไว้โดย Theodorou et al. (1994) ตัวอย่างก๊าซที่ได้มาจากการheadspace ขวดเซรั่มสำหรับกำหนดองค์ประกอบของก๊าซ (CH4, CO2 และ H2) หลังจาก 24 ชม หมักก็หยุด และรักษา และ centrifuged ตามที่อธิบายไว้โดย Niderkorn et al. (2012) การกำหนดเนื้อหาของแต่ละขวดpH, VFA และ NH3-N ในการ การลดประสิทธิภาพที่ชัดเจนของ DM ถูกกำหนด โดยความแตกต่างระหว่าง DM ของโรงงานวัสดุก่อนหมักและ DM ของสารตกค้างหลังจาก 24 ชมของหมักดอง
การแปล กรุณารอสักครู่..
ในการหมักชุดหลอดทดลอง
ของเหลวกระเพาะรูเมนเก็บในสัดส่วนที่เท่ากันจากสามแกะ fistulated (Texel เพศตอนผู้ใหญ่ 61.2 ± 9 กิโลกรัม
เฉลี่ย) หนึ่งเดือนก่อนที่จะเริ่มการพิจารณาคดีสัตว์ที่ได้รับการเลี้ยงดูในชีวิตประจำวัน 1,200 กรัมของอาหารที่ประกอบด้วยต่อกิโลกรัม (เป็น
ที่เลี้ยง) ฟาง cocksfoot (800 กรัม) ข้าวบาร์เลย์ (60 กรัม) เนื้อบีทรูท (50 กรัม) ข้าวโพด (34 กรัม), ถั่วเหลืองถั่วอาหาร (28 กรัม), รำข้าวสาลี (12 กรัม), กากน้ำตาลและ
เกลือแร่ (16 กรัม) อาหารประจำวันแบ่งออกเป็นสองเท่ากับอาหารให้ที่ 08:00 และ 16:00 เอชเอช สัตว์มีอิสระที่จะเข้าถึง
น้ำและป้องกันเกลือ (Sel'pur, Salins ปารีสฝรั่งเศส) สำหรับวันของการบ่มแต่ละตัวอย่างเนื้อหากระเพาะถูกถอนออก
จากกระเพาะรูเมน canula ก่อนอาหารมื้อแรกในตอนเช้า เนื้อหาในกระเพาะรูเมนจากสามแกะถูกรวบรวมใน
สัดส่วนที่เท่ากันลงในภาชนะที่ปิดโอนไปยังห้องปฏิบัติการและบีบผ่าน monofilament โพลีเอสเตอร์
ผ้า (ตาข่ายเปิด 800 เมตร) เพื่อที่จะได้รับของเหลวในกระเพาะรูเมนใช้เป็นหัวเชื้อสำหรับฟักตัวของเชื้อในหลอดทดลอง เวลา
ระหว่างการถอนเนื้อหากระเพาะรูเมนและการให้วัคซีนของหมักไม่เกิน 25 นาที การหมักได้ดำเนินการ
ตามที่อธิบาย Niderkorn et al, (2012) ในช่วงสั้น ๆ 600 ± 0.5 มกของวัสดุหมักแช่แข็งแห้งวางอยู่ใน 120 มล. เซรั่ม
ขวดก่อนอุ่นที่ 39 ◦Cและล้างด้วย N2; 40 มล. ของของเหลวในกระเพาะรูเมนบัฟเฟอร์ (ของเหลวในกระเพาะรูเมนเครียดเจือจาง 1: 2 (v / v) ใน
ฟอสเฟตแบบไม่ใช้ออกซิเจน: สารละลายบัฟเฟอร์คาร์บอเนต pH เริ่มต้น 7.04 ± 0.01) ถูกบันทึกแล้วขวดที่ถูกผนึก
ด้วยจุกยางบิวทิลและอลูมิเนียมจีบ แมวน้ำ ช่องว่างโดยไม่ต้องตั้งต้นพืชใด ๆ (ของเหลวในกระเพาะรูเมนบัฟเฟอร์เท่านั้น) ถูก
บ่มในระหว่างการทำงานที่แตกต่างกัน ตัวอย่างของของเหลวในกระเพาะรูเมนบัฟเฟอร์ถูกถ่ายในเวลา 0 เพื่อตรวจสอบการผลิตสุทธิ
ของ VFA และ NH3-N ขวดทั้งหมดถูกบ่มในอ่างน้ำสั่นที่ 39 ◦C การผลิตก๊าซได้รับการบันทึกไว้ใน
24 ชั่วโมงโดยใช้เทคนิคการแปลงสัญญาณความดันตามที่อธิบาย Theodorou et al, (1994) ตัวอย่างก๊าซถูกนำมาจาก
headspace ของขวดเซรั่มสำหรับการกำหนดองค์ประกอบของก๊าซ (CH4, CO2 และ H2) หลังจาก 24 ชั่วโมงหมักถูก
หยุดและเนื้อหาของแต่ละขวดได้รับการรักษาและปั่นตามที่อธิบาย Niderkorn et al, (2012) เพื่อตรวจสอบ
ค่า pH, VFA และ NH3-N ในระดับปานกลาง การย่อยสลายที่เห็นได้ชัดของ DM ถูกกำหนดโดยความแตกต่างระหว่าง DM ของพืช
วัสดุก่อนการหมักและการ DM ตกค้างหลังจาก 24 ชั่วโมงของการหมัก
การแปล กรุณารอสักครู่..
ในการหมักแบบอาหารเหลว
หลอดเก็บในสัดส่วนที่เท่ากันจากสามยมแกะเพศผู้ตอน 13 Texel , ผู้ใหญ่ , ± 9 กิโลกรัมใน
เฉลี่ย ) หนึ่งเดือนก่อนที่จะเริ่มต้นของการทดลอง สัตว์ถูกเลี้ยงทุกวัน 1 , 200 กรัมของอาหารที่ประกอบด้วยต่อกิโลกรัม (
เลี้ยง ) , cocksfoot เฮย์ ( 800 กรัม ) , ข้าวบาร์เลย์ ( 60 กรัม ) , บีทพัลพ์ ( 50 กรัม ) , ข้าวโพด ( 34 กรัม อาหารถั่วเหลือง ( 28 กรัม ) รำข้าวสาลี ( 12 กรัม )และกากน้ำตาล
MINERALS ( 16 กรัม ) อาหารทุกวัน แบ่งเป็น 2 เท่ากับอาหารให้ที่ 08 : 00 h และ 16 : 00 ชั่วโมง สัตว์ได้เข้าฟรี
น้ำและเกลือบล็อก ( sel'pur salins , ปารีส , ฝรั่งเศส ) สำหรับแต่ละวันของการบ่ม ตัวอย่างเนื้อหาทั้งหมดถูกถอน
จากกระเพาะรูเมน canula ก่อนมื้อแรกในตอนเช้า อาหารเนื้อหาจากแกะสามถูก pooled ใน
สัดส่วนที่เท่ากันในภาชนะปิดโอนไปยังห้องปฏิบัติการและบีบผ่านผ้าโพลีเอสเตอร์ monofilament
( เปิดตาข่าย 800 เมตร ) เพื่อที่จะได้รับอาหารเหลวสำหรับใช้เป็นเชื้อในหลอดทดลอง incubations . เวลาระหว่างกระบวนการและเนื้อหาถอน
( ของ fermenters ไม่เกิน 25 นาที หมักเป็น
ตามที่อธิบายไว้โดย niderkorn et al . ( 2012 )ในช่วงสั้น ๆ , 600 ± 0.5 มิลลิกรัม ตรึงวัสดุหมักแห้งวางอยู่ใน 120 ml เซรั่ม
ขวดก่อนเปิดที่ 39 ◦ C และกลั้วกับ N2 ; 40 ml ของของเหลวในกระเพาะรูเมน ( ลงกระเพาะของเหลวเจือจาง 1 : 2 ( v / v ) ในสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ,
: คาร์บอเนต pH เริ่มต้น 7.04 ± 0.01 ) คือเพิ่ม แล้วขวดที่ถูกผนึกสนิท
กับกันชน ยางบิวทิลและอะลูมิเนียมจีบ ซีลว่างไม่มีพืชใด ๆ ( เฉพาะในกระเพาะรูเมน ( ของเหลว )
) ในระหว่างทำงานที่แตกต่างกัน ตัวอย่างของของเหลวในกระเพาะรูเมน ยังถ่ายในเวลา 0 หา
การผลิตสุทธิและลดลง nh3-n. ขวดทั้งหมดถูกบ่มในน้ำอาบน้ำสั่นที่ 39 ◦ C ผลิตก๊าซธรรมชาติที่ถูกบันทึกไว้
24 ชั่วโมงโดยใช้แรงดันทรานสดิวเซอร์เทคนิคตามที่อธิบายไว้โดย Theodorou et al . ( 1994 )ตัวอย่างแก๊สที่นำมาจาก
เฮดสเปซของเซรั่มขวดเพื่อกำหนดองค์ประกอบของก๊าซ ( ร่าง CO2 และ H2 ) หลังจาก 24 ชั่วโมงการหมักคือ
หยุดและเนื้อหาของแต่ละขวดรับไฟฟ้าตามที่อธิบายไว้โดย niderkorn et al . ( 2012 ) เพื่อตรวจสอบ
และ pH ลดลง 4 cluster ในระดับปานกลาง การปรากฏของ DM โดยการวัดความแตกต่างระหว่าง DM ของพืช
วัสดุก่อนการหมักและ DM ของกากหลังชั่วโมงที่ 24 ของการหมัก
การแปล กรุณารอสักครู่..