DiscussionIn this study, we develop

Discussion
In this study, we developed a cellulolytic enzyme expression-
optimized diploid S. cerevisiae strain that was able
to produce ethanol directly from PASC and pretreated
rice straw with relatively high yields.
The expression-optimized MT8-1/cocδBEC3 strain
had a PASC degradation activity (75 mU/g wet cell) that
was approximately sixfold higher than that of the nonoptimized
MT8-1/IBEC3 strain (12 mU/g wet cell) [8],
corresponding to a twofold higher ethanol productivity
(Figure 1). These results clearly show that optimization
of cellulolytic enzyme expression is effective in enhancing
ethanol production from PASC and in improving
PASC degradation ability; however, the total ethanol
yield remained low. Therefore, to improve PASC degradation
activity and increase ethanol production, we constructed
a cellulolytic enzyme-expressing diploid strain
with optimized cellulase expression.
PASC degradation activity was improved by diploidization
(Table 2), which might have been due to the
increased copy number of cellulase genes integrated into
the genome [14]. Notably, in this cellulolytic enzyme
expression-optimized diploid strain, MNII/cocδBEC, the
transcription level of the EG gene was markedly higher
than that of the other two integrated cellulase genes,
BGL and CBH (Figure 2). This result correlates well
with the observation that during the optimization process,
the EG gene preferentially integrates into yeast
genomes with high copy number compared with the
BGL and CBH genes [8]. In addition, the transcription
levels of the three cellulolytic genes in the haploid host
strains MT8-1/cocδBEC3 and 1440/cocδBEC3 were
nearly identical to those of MNII/cocδBEC3 (Figure 2),
suggesting that total amount of gene expression could
be improved by diploidization if the the optimized gene
expression of the parental strains were retained. Hence,
performing diploidization after optimization of multigene
expression could be an effective strategy for
constructing cellulose degrading yeast.
To reduce yeast preparation costs for industrial
applications, we evaluated the cell growth of the haploid
and diploid strains using molasses medium (Table 2). One
advantage of the cocktail δ-integration method is that
cultivation of recombinant strains under non-selective
conditions is possible, because foreign genes integrated
into the genome are stably maintained [14].The cell
growth of both MT8-1/cocδBEC3 and MNII/cocδBEC3 in
molasses medium (containing CSL as the nutrient source)
was lower than in YPD medium. Although cell growth of
MT8-1/cocδBEC3 in molasses medium was improved
slightly by supplementation with essential amino acids, it
was still twofold lower than YPD medium (data not
shown). Thus, depression of cell growth was probably not
caused by amino acid scarcity but rather by the nutrient
richness of the YPD medium and susceptibility of the
strain to inhibitory factors in molasses and/or CSL
[23-26]. Surprisingly, however, the PASC degradation
activity of MNII/cocδBEC3 after precultivation in molasses
medium was significantly higher compared with that after
growth in YPD medium. One possible explanation is that
metal ions present in molasses and/or CSL improved the
stability of the cellulolytic enzymes [27-29].
As expected from the PASC hydrolysis reaction
results, high ethanol production and yield from PASC
was achieved using the diploid strain prepared in
molasses medium (Figure 3). When we compared our
results with those from different cellulase-expression
systems of S. cerevisiae published previously (Table 3),
our diploid strain clearly achieved the highest ethanol
production and yields. In addition to these promising
findings, the cellulolytic enzyme-expressing diploid yeast
strain was also able to produce ethanol from pretreated
rice straw (Figure 4). Although the ethanol production
rate from rice straw was nearly identical to that from
PASC, the ethanol yield from rice straw was relatively
low. This result suggests that highly crystalline regions
of cellulose in rice straw were not effectively degraded,
thus reducing these regions by improving the efficiency
of pretreatment or further optimizing cellulolytic

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สนทนาในการศึกษานี้ เราพัฒนาเอนไซม์ cellulolytic นิพจน์แบบเพิ่มประสิทธิภาพ diploid S. cerevisiae ต้องใช้ที่สามารถการผลิตเอทานอลโดยตรงจาก PASC และ pretreatedข้าวฟาง มีอัตราผลตอบแทนค่อนข้างสูงสายพันธุ์ MT8-1/cocδBEC3 ปรับนิพจน์มีกิจกรรมการย่อยสลาย PASC (75 หมู่/g เปียกเซลล์) ที่มีประมาณ sixfold สูงกว่าของที่ nonoptimizedต้องใช้ MT8-1/IBEC3 (12 หมู่/g เปียกเซลล์) [8],จะเป็นสองเท่าสูงกว่าเอทานอลผลิต(รูป 1) ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงชัดเจนว่าปรับให้เหมาะสมมีประสิทธิภาพในการเพิ่มประสิทธิภาพของเอนไซม์ cellulolytic นิพจน์เอทานอลผลิต จาก PASC และปรับปรุงความสามารถในการย่อยสลาย PASC อย่างไรก็ตาม เอทานอลรวมผลผลิตยังคงต่ำ ดังนั้น การปรับปรุงย่อยสลาย PASCผลิตเอทานอลกิจกรรมและเพิ่ม ที่เราสร้างขึ้นcellulolytic แสดงเอนไซม์ diploid ต้องใช้มีปรับ cellulase นิพจน์กิจกรรมย่อยสลาย PASC ถูกปรับปรุง โดย diploidization(ตาราง 2), ซึ่งอาจได้รับเนื่องในสำเนาเพิ่มจำนวนยีน cellulase รวมอยู่ในจีโนม [14] ในเอนไซม์นี้ cellulolytic ยวดปรับนิพจน์ diploid ต้องใช้ MNII/cocδBEC การระดับ transcription ของยีน EG ได้สูงขึ้นอย่างเด่นชัดกว่าที่อื่น ๆ สอง cellulase รวมยีนBGL และ CBH (2 รูป) ผลลัพธ์นี้คู่กันมีการสังเกตซึ่งในระหว่างการเพิ่มประสิทธิภาพการประมวลผลโน้ตรวมยีน EG เป็นยีสต์genomes มีสำเนาสูงเมื่อเทียบกับการBGL และ CBH ยีน [8] นอกจากนี้ ในระดับของยีน cellulolytic สามในโฮสต์ haploidได้สายพันธุ์ MT8-1/cocδBEC3 และ 1440/cocδBEC3เกือบเหมือนกับ MNII/cocδBEC3 (2 รูป),แนะนำที่ยอดของยีนได้ปรับปรุง โดย diploidization ถ้ายีนให้เหมาะนิพจน์ของสายพันธุ์โดยผู้ปกครองถูกรักษาไว้ ดังนั้นทำ diploidization หลังจากการเพิ่มประสิทธิภาพของ multigeneนิพจน์อาจเป็นกลยุทธ์มีประสิทธิภาพสำหรับสร้างเซลลูโลสลดยีสต์เพื่อลดต้นทุนการเตรียมยีสต์สำหรับอุตสาหกรรมโปรแกรมประยุกต์ เราประเมินการเติบโตเซลล์ haploidและสายพันธุ์ diploid โดยใช้กากน้ำตาลปานกลาง (ตารางที่ 2) หนึ่งประโยชน์ของค็อกเทลδ-รวมวิธีการคือปลูกสายพันธุ์ recombinant ภายใต้ไม่เลือกเงื่อนไขเป็นไปได้ เนื่องจากยีนต่างประเทศรวมเป็นกลุ่มมี stably รักษา [14] เซลล์เจริญเติบโตของ MT8-1/cocδBEC3 และ MNII/cocδBEC3 ในกากน้ำตาลปานกลาง (ประกอบด้วย CSL เป็นแหล่งธาตุอาหาร)ไม่ต่ำกว่าใน YPD แม้ว่าการเจริญเติบโตของเซลล์MT8-1/cocδBEC3 ในกากน้ำตาลได้ดีขึ้นเล็กน้อย โดยแห้งเสริมด้วยกรดอะมิโนที่จำเป็น มันถูกยังสองเท่าต่ำกว่าปานกลาง YPD (ข้อมูลไม่แสดง) ดังนั้น ภาวะซึมเศร้าของการเติบโตของเซลล์ไม่คงเกิดขึ้น โดยขาดแคลนกรดอะมิโน แต่ โดยธาตุอาหารร่ำรวยปานกลาง YPD และความไวของการสายพันธุ์กับลิปกลอสไขปัจจัยในกากน้ำตาลหรือ CSL[23-26] การจู่ ๆ อย่างไรก็ ตาม การลดประสิทธิภาพของ PASCกิจกรรมของ MNII/cocδBEC3 หลัง precultivation ในกากน้ำตาลสื่อได้อย่างมีนัยสำคัญสูงเมื่อเทียบกับที่หลังจากเจริญเติบโตใน YPD หนึ่งได้อธิบายว่าประจุของโลหะอยู่ในกากน้ำตาล และ/หรือปรับปรุง CSLเสถียรภาพของเอนไซม์ cellulolytic [27-29]ตามที่คาดไว้จากปฏิกิริยาไฮโตรไลซ์ PASCผล ผลิตเอทานอลสูง และผลผลิตจาก PASCสำเร็จโดยใช้พันธุ์ diploid เตรียมในกากน้ำตาลกลาง (รูปที่ 3) เมื่อเราเปรียบเทียบของเราผลลัพธ์จากนิพจน์ cellulase แตกต่างกับระบบของ cerevisiae S. เผยแพร่ก่อนหน้านี้พรม (ตาราง 3),เราต้องใช้ diploid เอทานอลสูงสุดประสบความสำเร็จอย่างชัดเจนการผลิตและผลผลิต นอกจากนี้สัญญาค้นพบ การ cellulolytic แสดงเอนไซม์ diploid ยีสต์นอกจากนี้ได้ต้องใช้ในการผลิตเอทานอลจาก pretreatedข้าวฟาง (4 รูป) แม้ว่าการผลิตเอทานอลอัตราจากฟางข้าวได้เกือบเหมือนกับที่จากPASC ผลผลิตเอทานอลจากฟางข้าวได้ค่อนข้างต่ำสุด ผลลัพธ์นี้แนะนำที่ภูมิภาคผลึกสูงของเซลลูโลสในฟางข้าวที่ไม่มีประสิทธิภาพลดลงดังนั้นจึง ลดพื้นที่เหล่านี้ โดยการปรับปรุงประสิทธิภาพpretreatment หรือ cellulolytic การเพิ่มประสิทธิภาพต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คำอธิบาย
ในการศึกษานี้เราพัฒนาเอนไซม์เซลลู expression-
ที่ดีที่สุดซ้ำเอส cerevisiae สายพันธุ์ที่สามารถ
ในการผลิตเอทานอลโดยตรงจาก PASC และปรับสภาพ
ฟางข้าวมีอัตราผลตอบแทนที่ค่อนข้างสูง.
การแสดงออกที่เหมาะสม MT8-1 / ความเครียดcocδBEC3
มีการย่อยสลาย PASC กิจกรรม (75 mU / g เซลล์เปียก) ที่
ประมาณหกสูงกว่า nonoptimized
ความเครียด MT8-1 / IBEC3 (12 mU / g เซลล์เปียก) [8],
ที่สอดคล้องกับการผลิตเอทานอลที่สูงขึ้นสองเท่า
(รูปที่ 1) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นชัดเจนว่าการเพิ่มประสิทธิภาพ
ของการแสดงออกของเอนไซม์เซลลูโลสที่มีประสิทธิภาพในการเสริมสร้าง
การผลิตเอทานอลจาก PASC และในการปรับปรุง
ความสามารถในการย่อยสลาย PASC; แต่เอทานอลรวม
ผลตอบแทนอยู่ในระดับต่ำ ดังนั้นเพื่อปรับปรุงการย่อยสลาย PASC
กิจกรรมและเพิ่มการผลิตเอทานอลที่เราสร้าง
เอนไซม์แสดงเซลลูโลสความเครียดซ้ำ
กับการแสดงออกของเซลลูเลสที่ดีที่สุด.
กิจกรรมการย่อยสลาย PASC รับการปรับปรุงโดย diploidization
(ตารางที่ 2) ซึ่งอาจจะเป็นเพราะ
จำนวนสำเนาที่เพิ่มขึ้นของเซลลูเลส ยีนที่รวมอยู่ใน
จีโนม [14] โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการทำงานของเอนไซม์เซลลู
ความเครียดการแสดงออกที่เหมาะสมซ้ำ MNII / cocδBEC,
ระดับการถอดความจาก EG เป็นยีนเด่นชัดที่สูงขึ้น
กว่าที่อื่น ๆ สองยีนเซลลูเลสแบบบูรณาการ
และ BGL CBH (รูปที่ 2) ผลที่ได้นี้มีความสัมพันธ์ที่ดี
กับการสังเกตว่าในระหว่างขั้นตอนการเพิ่มประสิทธิภาพ
ของยีน EG พิเศษรวมเป็นยีสต์
จีโนมที่มีจำนวนสำเนาที่สูงเมื่อเทียบกับ
BGL และยีน CBH [8] นอกจากนี้ถอดความ
ระดับของยีนสามเซลลูโลสในโฮสต์เดี่ยว
สายพันธุ์ MT8-1 / cocδBEC3และ 1440 / cocδBEC3เป็น
เกือบจะเหมือนกับผู้ที่ MNII / cocδBEC3 (รูปที่ 2)
ชี้ให้เห็นว่าจำนวนของการแสดงออกของยีนที่อาจ
จะดีขึ้นโดย diploidization ถ้ายีนเพิ่มประสิทธิภาพ
การแสดงออกของสายพันธุ์ของผู้ปกครองที่ถูกเก็บไว้ ดังนั้น
การดำเนินการ diploidization หลังจากการเพิ่มประสิทธิภาพของ multigene
การแสดงออกอาจจะเป็นกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพสำหรับ
การสร้างเซลลูโลสย่อยสลายยีสต์.
เพื่อลดค่าใช้จ่ายในการเตรียมยีสต์สำหรับอุตสาหกรรม
การใช้งานเราประเมินการเจริญเติบโตของเซลล์เดี่ยว
สายพันธุ์และการใช้ซ้ำกากน้ำตาลปานกลาง (ตารางที่ 2) หนึ่งใน
ข้อได้เปรียบของวิธีการค๊อกเทลδ-บูรณาการคือ
การเพาะปลูกของสายพันธุ์ recombinant ภายใต้ไม่ได้รับเลือก
เงื่อนไขเป็นไปได้เพราะยีนที่ต่างประเทศแบบบูรณาการ
เข้าไปในจีโนมจะรักษาเสถียร [14] มือถือได้โดยเริ่มต้น
การเจริญเติบโตของทั้ง MT8-1 / cocδBEC3และ MNII / cocδBEC3ใน
กากน้ำตาลปานกลาง (CSL มีสารอาหารที่เป็นแหล่งที่มา)
ต่ำกว่าในระดับปานกลาง YPD แม้ว่าการเติบโตของเซลล์
MT8-1 / cocδBEC3ในกากน้ำตาลขนาดกลางได้รับการปรับปรุง
เล็กน้อยโดยเสริมด้วยกรดอะมิโนก็
ยังคงต่ำกว่าสองเท่าขนาดกลาง YPD (ข้อมูลไม่
แสดง) ดังนั้นภาวะซึมเศร้าของการเจริญเติบโตของเซลล์ได้รับอาจจะไม่ได้
เกิดจากการขาดแคลนกรดอะมิโน แต่โดยสารอาหารที่
มีชีวิตชีวาของกลาง YPD และความไวของ
ความเครียดปัจจัยยับยั้งในกากน้ำตาลและ / หรือ CSL
[23-26] ที่น่าแปลกใจ แต่การย่อยสลาย PASC
กิจกรรมของ MNII / cocδBEC3หลังจาก precultivation ในกากน้ำตาล
ขนาดกลางสูงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับว่าหลังจากที่
การเจริญเติบโตในระดับปานกลาง YPD หนึ่งคำอธิบายที่เป็นไปได้คือ
โลหะไอออนอยู่ในกากน้ำตาลและ / หรือ CSL ปรับปรุง
เสถียรภาพของเซลลูโลส [27-29].
เป็นที่คาดหวังจากปฏิกิริยาไฮโดรไลซิ PASC
ผลการผลิตเอทานอลสูงและอัตราผลตอบแทนจาก PASC
ก็ประสบความสำเร็จโดยใช้สายพันธุ์ที่เตรียมซ้ำ ใน
กลางกากน้ำตาล (รูปที่ 3) เมื่อเราเปรียบเทียบเรา
กับผลที่มาจากเซลลูแสดงออกที่แตกต่างกัน
ของระบบเอส cerevisiae เผยแพร่ก่อนหน้านี้ (ตารางที่ 3),
ความเครียดซ้ำของเราประสบความสำเร็จอย่างชัดเจนเอทานอลที่สูงที่สุด
การผลิตและอัตราผลตอบแทน นอกจากนี้แนวโน้ม
ผลการวิจัยแสดงเอนไซม์เซลลูซ้ำยีสต์
สายพันธุ์ก็ยังสามารถที่จะผลิตเอทานอลจากปรับสภาพ
ฟางข้าว (รูปที่ 4) แม้ว่าการผลิตเอทานอล
จากอัตราฟางข้าวเกือบจะเหมือนกับว่าจาก
PASC ผลผลิตเอทานอลจากฟางข้าวค่อนข้าง
ต่ำ ผลที่ได้นี้แสดงให้เห็นว่าภูมิภาคสูงผลึก
เซลลูโลสในฟางข้าวที่ไม่ได้ลดลงอย่างมีประสิทธิภาพ
ซึ่งช่วยลดภูมิภาคเหล่านี้โดยการปรับปรุงประสิทธิภาพ
ของการปรับสภาพหรือต่อการเพิ่มประสิทธิภาพเซลลูโลส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การอภิปราย
ในการศึกษานี้จึงพัฒนาทดลองเอนไซม์การแสดงออก -
( S . cerevisiae สายพันธุ์รังที่สามารถผลิตเอทานอลได้โดยตรงจาก pasc

และฟางข้าวที่ผ่านมีค่อนข้างสูงผลผลิต .
การแสดงออกที่ดีที่สุด mt8-1 / COC δ bec3 เมื่อย
มี pasc กิจกรรมการย่อยสลาย ( 75 MU / g เซลล์เปียก )
อยู่ที่ประมาณค.ศ. 1940 หกสูงกว่าของ nonoptimized
mt8-1 / ibec3 สายพันธุ์ ( 12 MU / g เซลล์เปียก ) [ 8 ] ,
เกี่ยวข้องกับสองเท่าสูงกว่าเอทานอลเพิ่มผลผลิต
( รูปที่ 1 ) ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นชัดเจนว่า การเพิ่มประสิทธิภาพของเอนไซม์ที่ย่อยสลายเซลลูโลสสีหน้า

มีประสิทธิภาพในการเพิ่มการผลิตเอทานอลจาก pasc และปรับปรุงความสามารถในการย่อยสลาย pasc

; แต่ผลผลิตเอทานอลรวมยังคงต่ำ ดังนั้น การปรับปรุงการย่อยสลาย
pascกิจกรรมและเพิ่มการผลิตเอทานอล , เราสร้างการทดลองเอนไซม์แสดงซ้ำกับเซลปรับสีหน้าเครียด
.
กิจกรรมการย่อยสลาย pasc ปรับปรุง diploidization
( ตารางที่ 2 ) ซึ่งอาจได้รับเนื่องจากการเพิ่มจำนวนของยีนเซลลอก

โดยรวมใน [ 14 ] โดยเฉพาะอย่างยิ่งในนี้ทดลองปรับความเครียดซ้ำ
การแสดงออกของเอนไซม์ ,mnii / COC δโฆษณา
ถอดความระดับเช่นยีนอย่างสูง
กว่าของอีกสองเซลลูเลสและยีนรวม
BGL CBH ( รูปที่ 2 ) ผลที่ได้นี้มีความสัมพันธ์ดี
ด้วยการสังเกตว่า ในระหว่างกระบวนการปรับให้เหมาะสม เช่น ยีน preferentially

รวมจีโนมยีสต์กับคัดลอกตัวเลขสูงเมื่อเทียบกับ
BGL CBH และยีน [ 8 ] นอกจากนี้ ถอดความ
ระดับของยีนในโครโมโซมสามทดลองโฮส
สายพันธุ์ mt8-1 / COC และ bec3 δ 1440 / COC δ bec3 ถูก
เกือบเหมือนกันกับของ mnii / COC δ bec3 ( รูปที่ 2 ) ,
บอกว่าปริมาณการแสดงออกของยีนอาจ
ดีขึ้นโดย diploidization ถ้าเพิ่มประสิทธิภาพการแสดงออกของยีน
สายพันธุ์ พ่อแม่เก็บไว้ ดังนั้น หลังจากการเพิ่มประสิทธิภาพของการปฏิบัติ diploidization

multigeneการแสดงออกสามารถเป็นกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพสำหรับการสร้างเซลลูโลสสลาย

ลดยีสต์ ยีสต์การเตรียมค่าใช้จ่ายสำหรับงานอุตสาหกรรม
เราประเมินการเจริญของโครโมโซม
และสายพันธุ์เกิดกากน้ำตาลปานกลาง ( ตารางที่ 2 ) หนึ่งประโยชน์ของค็อกเทลδ
- บูรณาการวิธีคือการเพาะสายพันธุ์ภายใต้

ไม่เลือกเงื่อนไขที่เป็นไปได้เพราะต่างประเทศยีนในจีโนมเป็นบูรณาการ
อย่างถาวรรักษา [ 14 ] . .
การเจริญเติบโตของทั้งสอง mt8-1 / COC และ bec3 δ mnii / COC ในδ bec3
กากน้ำตาลปานกลาง ( ที่มีประสบการณ์เป็นแหล่งสารอาหาร )
ต่ำกว่าใน ypd ปานกลาง แม้ว่าการเจริญของ
mt8-1 / COC δ bec3 ในกากน้ำตาลปานกลางดีขึ้น
เล็กน้อยโดยการเสริมด้วยกรดอะมิโน มัน
ยังทวีคูณกว่า ypd ขนาดกลาง ( ข้อมูลไม่
แสดง ) ดังนั้น การเจริญเติบโตของเซลล์อาจจะไม่ถูก
เกิดจากกรดอะมิโน ขาดแคลน แต่โดยส่วนธาตุอาหาร
ของ ypd ขนาดกลาง และความอ่อนแอของ
เมื่อยปัจจัยที่ยับยั้งในกากน้ำตาลและ / หรือ CSL
[ 26 ] จู่ ๆ อย่างไรก็ตาม pasc กิจกรรมการย่อยสลาย
mnii / COC δ bec3 หลังจาก precultivation ในกากน้ำตาล
ปานกลางสูงกว่าเมื่อเทียบกับหลัง
การเจริญเติบโตใน ypd ปานกลาง คำอธิบายหนึ่งที่เป็นไปได้ที่จะอยู่ในกากโลหะไอออน

และ / หรือประสบการณ์การปรับปรุงเสถียรภาพของเอ็นไซม์ที่ย่อยสลายเซลลูโลส [ ใหม่ ] .
คาดหวังจาก pasc hydrolysis ปฏิกิริยา
ผลสูง การผลิตเอทานอล และผลผลิตจาก pasc
สําเร็จการเกิดความเครียดที่เตรียมไว้ใน
กากน้ำตาลปานกลาง ( รูปที่ 3 )เมื่อเราเปรียบเทียบผลลัพธ์ของเรากับระบบการแสดงออก

จากเซลที่แตกต่างกันของ S . cerevisiae เผยแพร่ก่อนหน้านี้ ( ตารางที่ 3 ) ,
ความเครียดซ้ำของเราอย่างชัดเจนได้ผลผลิตเอทานอลสูงสุด
และผลิต นอกจากนี้ผลการศึกษาแนวโน้ม
เหล่านี้ ทดลองเอนไซม์แสดงซ้ำยีสต์
สายพันธุ์ยังสามารถผลิตเอทานอลจากฟางข้าวที่ผ่าน
( รูปที่ 4 )แม้ว่าอัตราการผลิตเอทานอลจากฟางข้าว

เกือบเหมือนกันกับที่ pasc , ผลผลิตเอทานอลจากฟางข้าวค่อนข้าง
น้อย ผลที่ได้นี้แสดงให้เห็นว่าภูมิภาคสูงผลึก
เซลลูโลสในฟางข้าวที่ไม่ได้มีประสิทธิภาพเสื่อมโทรม
จึงลดพื้นที่เหล่านี้ โดยการปรับปรุงประสิทธิภาพของการปรับหรือเพิ่มเติมทดลอง