Also,550 ng of [13C6]-IAA (Cambridg

Also,
550 ng of [13C6]-IAA (Cambridge Isotopes, Inc.) was
added as an internal standard for the GC-MS-SIM
quantification. After 60 h of constant shaking at 4 1C
in the dark, the methanolic extracts were filtered
through 0.45 and 0.22 mm cellulose acetate membranes
(Millipores) and then passed through a Sep-
Pak C-18 (Waterss) cartridge. After filtration,
eluates were reduced to dryness in a speed vacuum
concentrator (Speed Vac, Hetos, CT 100) and the
residues redissolved in 100 mL acid water (ultrapure
water+0.2% formic acid, pH 3.0). The hormones
were then separated over 80 min by high-performance
liquid chromatography (HPLC) using a
reverse phase, semi-preparative, C-18 column
(Waterss, Prep Nova-Pak, 6 mm, 7.8300 mm), at
a flow rate of 3 mL/min with a methanol: acid
water gradient. The gradient consisted of 5%
methanol: 95% acid water, v/v (0–15 min), 30%
methanol: 70% acid water, v/v (16–50 min), and 45%
methanol: 55% acid water, v/v (51–80 min). Fractions
were collected at 30-s intervals and reduced
to dryness in a speed vacuum concentrator. The
measurements of Z, [9R]Z, iP and [9R]iP were
carried out by the enzyme-linked immunosorbent
assay (ELISA) method with polyclonal rabbit anti-
[9R]Z (for Z and [9R]Z) and anti-[9R]iP (for iP and
[9R]iP) antibodies. The hormone level in each
sample was measured four times and the standard
error was calculated. Calculations were made by
reference to a calibration curve established on
each microtitration plate with a fourth-order
polynomial regression obtained from four experimental
standard curves.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยัง550 ng [13C 6] -IAA (เคมบริดจ์ไอโซโทป Inc.) ได้เพิ่มเป็นการภายในสำหรับ GC-MS-SIMนับ หลังจาก 60 h ของการสั่นคงที่ 4 1Cในมืด สารสกัดจาก methanolic ถูกกรองผ่านสารเซลลูโลส acetate 0.45 และ 0.22 มม.(Millipores) แล้ว ผ่าน Sep แบบตลับหมึกปาก C-18 (Waterss) หลังจากกรองeluates ถูกลดความแห้งกร้านในสุญญากาศความเร็วอาทิตย์หัว (Vac ความเร็ว Hetos, CT 100) และตก redissolved (ultrapure น้ำกรด 100 มลwater+0.2% กรด pH 3.0) ฮอร์โมนได้แยกออกแล้วกว่า 80 นาที โดยมีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ใช้เป็นกลับเฟส กึ่ง preparative คอลัมน์ C-18(Waterss เตรียมโนวาปาก 6 มม. 7.8 300 mm), ที่อัตราการไหลของ 3 mL/min ด้วยเมทานอล: กรดการไล่ระดับน้ำ ประกอบด้วยการไล่ระดับสี 5%เมทานอล: 95% กรดน้ำ v/v (0-15 นาที), 30%เมทานอล: น้ำกรด 70%, v/v (16 – 50 นาที), และ 45%เมทานอล: น้ำกรด 55%, v/v (51 – 80 นาที) เศษส่วนถูกรวบรวมไว้ในช่วงเวลา 30 s และลดลงเพื่อความแห้งกร้านในอาทิตย์หัวสิวที่เร็ว ที่ถูกประเมิน Z, Z [9R] iP และ iP [9R]ดำเนินการ โดย immunosorbent เอนไซม์ลิงค์assay (ELISA) วิธีกับกระต่าย polyclonal anti-[9R] Z (ตัว Z และ Z [9R]) และ anti- [9R] iP (สำหรับ iP และแอนตี้ [9R] iP) ระดับฮอร์โมนในแต่ละตัวอย่างที่วัดครั้งที่ 4 และมาตรฐานมีคำนวณข้อผิดพลาด ทำการคำนวณโดยอ้างอิงการเทียบเส้นโค้งก่อตั้งขึ้นบนจานแต่ละ microtitration มีใบสี่ถดถอยพหุนามที่ได้จากทดลองเส้นโค้งมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

นอกจากนี้
550 นาโนกรัมของ [13C6] -IAA (เคมบริดจ์ไอโซโทป, Inc)
ได้เพิ่มเป็นมาตรฐานภายในสำหรับGC-MS-SIM
ปริมาณ หลังจาก 60 ชั่วโมงคงสั่นที่ 4 1C
ในที่มืด,
สารสกัดเมทานอลได้รับการกรองผ่าน0.45 และ 0.22 มมเยื่อเซลลูโลสอะซิเตท
(Millipores) และผ่านไปแล้วผ่าน ก.ย.
ปาก C-18 (Waterss) ตลับหมึก หลังจากการกรอง
eluates
ถูกลดความแห้งกร้านในสุญญากาศความเร็วหัว(ความเร็ว Vac, Hetos, CT 100) และสารตกค้างในน้ำ redissolved กรด 100 มิลลิลิตร (บริสุทธิ์น้ำ+ 0.2% กรดค่า pH 3.0) ฮอร์โมนที่ถูกแยกออกแล้วกว่า 80 นาทีโดยมีประสิทธิภาพสูงของเหลวchromatography (HPLC) โดยใช้ขั้นตอนกลับกึ่งเตรียมคอลัมน์C-18 (Waterss, เตรียมโนวาปาก, 6 มม 7.8? 300 มิลลิเมตร) ที่ไหลอัตรา 3 มิลลิลิตร / นาทีด้วยเมทานอลกรดลาดน้ำ การไล่ระดับสีประกอบด้วย 5% เมทานอล: กรดน้ำ 95% ปริมาตร / ปริมาตร (0-15 นาที) 30% เมทานอล: กรดน้ำ 70% ปริมาตร / ปริมาตร (16-50 นาที) และ 45% เมทานอลกรด 55% น้ำปริมาตร / ปริมาตร (51-80 นาที) เศษส่วนที่ถูกเก็บรวบรวมในช่วงเวลา 30 วินาทีและลดความแห้งกร้านในหัวสูญญากาศความเร็ว วัด Z [9R] Z, IP และ [9R] iP ถูกดำเนินการโดยเอนไซม์ที่เชื่อมโยงอิมมูโนทดสอบ(ELISA) วิธีการที่มีกระต่ายโพลีต่อต้าน[9R] Z (Z และสำหรับ [9R] Z) และป้องกัน - [9R] IP (IP และสำหรับ[9R] IP) แอนติบอดี ระดับฮอร์โมนในแต่ละตัวอย่างวัดครั้งที่สี่และมาตรฐานข้อผิดพลาดที่คำนวณได้ การคำนวณที่ถูกสร้างขึ้นโดยการอ้างอิงถึงเส้นโค้งการสอบเทียบจัดตั้งขึ้นเมื่อแผ่นmicrotitration แต่ละคนมีสี่เพื่อการถดถอยพหุนามที่ได้รับจากการทดลองสี่เส้นโค้งมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นอกจากนี้
550 ng [ 13c6 ] - IAA ( เคมบริดจ์ไอโซโทป , Inc ) คือ
เพิ่มเป็นมาตรฐานภายในเพื่อ gc-ms-sim
ปริมาณ . หลังจาก 60 H คงสั่นที่ 4 c
ในความมืด สารสกัดเมทานอลเป็นกรอง
ผ่าน 0.45 และเซลลูโลสอะซิเตท 0.22 มม. +
( millipores ) และจากนั้นผ่านก.ย. -
- ( ปาก waterss ) ตลับหมึก
หลังจากการกรองeluates ถูกลดความแห้งกร้านในความเร็ว ( ความเร็ว VAC , สูญญากาศ
หัว hetos , CT ) และ
กาก redissolved 100 มิลลิลิตรกรดน้ำบริสุทธิ์มาก
น้ำ 0.2 % กรด pH 3.0 ) ฮอร์โมน
ถูกแยกออกจากกันแล้วกว่า 80 นาที โดยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) ใช้

กลับเฟส กึ่ง = -
( waterss , คอลัมน์ , เตรียมโนวาปาร์ค , 6 มม. , 7.8  300 มม. ) ,
อัตราการไหล 2 มล. / นาทีกับเมทานอลกรด
น้ำลาด . การไล่ระดับสี จำนวน 5 %
: กรดน้ำเมทานอล 95% , V / V ( 0 – 15 นาที ) 30 %
เมทานอล : 70% กรดน้ำ ปริมาตร ( 16 - 50 นาที ) และ 45 %
เมทานอล : 55% น้ํากรด , V / V ( 51 - 80 นาที ) . เก็บช่วงเวลาที่ 30-s เศษส่วน

แห้งและลดลงในความเร็วดูดหัว .
วัด Z , [ 9R ] Z , IP และ IP ถูก
[ 9R ]ที่ดำเนินการโดย
enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) ด้วยวิธีโพลีกระต่ายต่อต้าน -
[ 9R ] Z ( Z และ [ 9R ] Z ) และ anti - [ 9R ] IP ( IP และ
[ 9R ] IP ) แอนติบอดี ระดับฮอร์โมนในแต่ละ
ตัวอย่างวัดสี่ครั้งและข้อผิดพลาดมาตรฐาน
คือการคำนวณ การคํานวณ สร้างโดย
อ้างอิงเป็นรูปโค้งขึ้นในแต่ละจาน ด้วย fourth-order microtitration

การถดถอยพหุนามหาได้จากสี่ทดลอง
มาตรฐานเส้นโค้ง