Dried whole herb of H. cuspidatus (

Dried whole herb of H. cuspidatus (1.5 kg) was extracted with
EtOH of (6.0 l  4) under ultrasonication for each 30 min at 20–30 C. The combine ethanol extract was concentrated under reduced
pressure to give an oily material (81.6 g) which was applied
to a Diaion HP-20 resin column, and then eluted successively with
MeOH–H2O (4:6, Fr. A), (7:3, Fr. B), MeOH (Fr. C) and acetone (Fr.
D). Each fraction was concentrated in vacuo to give Fr.A (22.5 g),
Fr.B (5.4 g), Fr.C (28.9 g), and Fr.D (18.9 g). Only Fr.B and Fr.C
showed inhibitory activity on secretion of LTC4 at a concentration
of 100 lg/ml, in the bio-assay guided fractionation Fr. C was triturated
with MeOH and the insoluble material was collected and
recrystallized from EtOAc to give 19 (6100 mg). The mother liquor
was concentrated to leave an oily material which was subjected to
silica gel CC, this being eluted successively with hexane–EtOAc
(5:1, 3.6 l, Fr. C-1–C-3), (3:1, 2.0 l, Fr.C-4), (2:1, 1.0 l, Fr.C-5), (1:1,
2.4 l, Fr.C-6), EtOAc (2.0 l, Fr.C-7) and MeOH (2.0 l, Fr.C-8) to give
eight fractions. Fr. C-3 was fractionated by reversed phase HPLC
{Kaseisorb LC PH SUPER, 20  250 mm (column A), MeOH–H2O
(75:25), flow rate 8 ml min1} to afford four fractions (Fr.C-3–1-
C-3–4). Fr.C-3–3 was purified by reversed phase HPLC {Kaseisorb
LC ODS PH SUPER, 10  250 mm (column B), MeOH–H2O (9:1),
flow rate 3 ml min1} to yield 16 (38 mg). Fr.C-4 was fractionated
by reversed phase HPLC {column A, MeOH-H2O (8:2), flow rate
8 ml min1} to afford four fractions (Fr. C-4–1–C-4–4). Fr.C-4–1
was further separated by reversed phase HPLC {column B,
MeOH–H2O (85:15), flow rate 3 ml min1} to give 1 (12 mg) and
10 (12 mg). Purification of Fr.C-4–2 using reversed phase HPLC
{column B, MeOH–H2O (85:15), flow rate 3 ml min1} to give 9
(75 mg). Separation of Fr. C-5 by reversed phase HPLC {column A,
MeOH–H2O (8:2), flow rate 8 ml min1} gave fourteen fractions
(Fr.C-5–1–C-5–14). Purification of Fr. C-5–3 by reversed phase
HPLC {column B, MeOH–H2O (75:25), flow rate 3 ml min1}
yielded 2 (15 mg). Fr. C-5–4 was purified by reversed phase HPLC
{column B, MeOH–H2O (75:25), flow rate 3 ml min1} to give 18
(4 mg). Compound 17 (7 mg) was obtained from Fr.C-5–6 by purification
using reversed phase HPLC {column B (MeOH–H2O (8:2),
flow rate 3 ml min1}. Fr.C-5–10 was purified by reversed phase
HPLC {Senshu Pak PEGASIL ODS, 10u  250 mm (column C),
MeOH–H2O (9:1), flow rate 3 ml min1} to give 22 (16 mg). Compounds
20 (47 mg) and 21 (29 mg) were obtained from Fr. C-5–
12 and Fr. C-5–11, respectively, by purification using reversed
phase HPLC {column C, MeOH-H2O (9:1), flow rate 3 ml min1}.
Fr. B (5.4 g) was subjected to silica gel CC, this being eluted, successively
with CHCl3–MeOH–H2O {100:1:0 (300 ml, Fr. B-1), 10:1:0.05
(1650 ml, Fr. B-2), 8:2:0.2 (2500 ml, Fr. B-3), 7:3:0.3 (1000 ml, Fr.
B-4, B-5), 6:4:0.5 (1000 ml, Fr. B-6), 6:4:1 (2000 ml, Fr. B-7) and
acetone (Fr. B-8)} to give eight fractions. Fr.B-1 was further fractionated
by silica gel CC {toluene–acetone 20:1 (500 ml, Fr.B-1–
1), 10:1 (550 ml, Fr.B-1–2), 5:1 (1020 ml, Fr.B-1–3), 3:1 (600 ml,
Fr.B-1–4), 2:1 (600 ml), 1:1 (600 ml), acetone (800 ml) Fr.B-1–5,
MeOH (1000 ml, Fr.B-1–6)} to yield six fractions. Separation of
Fr.B-1–4 by reversed phase HPLC {column A, MeOH–H2O (4:6),
flow rate 3 ml min1} afforded twelve fractions (Fr.B-1–4-1-B-1–
4-12). Concentration of Fr.B-1–4-5 gave 3 (37 mg). Further separation
of Fr.B-1–4-6 by reversed phase HPLC {column B, CH3CN–H2O
(3:7), flow rate 3 ml min1} gave 13 (7 mg). Fr.B-1–4-7 was further
purified by reversed phase HPLC (column B, CH3CN–H2O (32:68),
flow rate 3 ml min1) to give 11 (5 mg). Compound 12 (17 mg)
was obtained from Fr. B-1–4-8 by purification using reversed phase
HPLC {column B, CH3CN–H2O (3:7), flow rate 3 ml min1}. Separation
of Fr.B-1–4-9 by reversed phase HPLC {column B, CH3CN–H2O
(25:75), flow rate 3 ml min1} yielded 14 (9 mg). Fr.B-1–4-11 was
further purified by reversed phase HPLC {column B, CH3CN–H2O
(3:7), flow rate 3 ml min1} to give 4 (6 mg). Fr.B-3 was fractionated
by reversed phase HPLC {CAPCELL PAK UG, 20u  250 mm
(column D), MeOH–H2O (45:55), flow rate 8 ml min1} to afford
four fractions (Fr.B-3–1–B-3–4). Separation of Fr.B-3–2 by reversed
phase HPLC {column A, CH3CN–H2O (15:85), flow rate 3 ml min1}
Table 5
Inhibitory Effects of Isolated Compounds on Release of LTC4.
Compounds IC50 (lM) Compounds IC50 (lM)
1 42.9 12 >100
2 >100 13 >100
3 >100 14 92.5
4 >100 15 13.6
5 >100 16 -a
6 >100 17 39.9
7 >100 18 76.0
8 >100 19 -b
9 39.9 20 -b
10 23.3 21 -b
11 >100 Ketotifen 46.8
a not done.
b Compounds (19, 20 and 21) exhibit cytotoxicity at the concentration of >10 lM.
2250 M. Furukawa et al. / Phytochemistry 72 (2011) 2244–2252
gave 7 (10 mg) and 8 (3 mg). Compounds 5 (50 mg) and 6 (30 mg)
were obtained by separation of Fr. B-3–3 using reversed phase
HPLC {column B, MeOH–H2O (1:1), flow rate 3 ml min1}. Fr.B-5
was further fractionated by reversed phase HPLC {column A,
MeOH–H2O (4:6), flow rate 8 ml min1} to afford five fractions
(Fr.B-5–1–B-5–5). Compound 15 (15 mg) was isolated from Fr.B-
5–1 by purification using reversed phase HPLC {column B,
CH3CN–H2O (1:9), flow rate 3 ml min1}.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สมุนไพรแห้งทั้งหมดของ H. cuspidatus (1.5 kg) ถูกสกัดด้วยEtOH (6.0 l 4) ภายใต้ ultrasonication สำหรับแต่ละ 30 นาทีในราว 20 – 30 สารสกัดเอทานอลรวมมีความเข้มข้นลดลงต่ำกว่าดันให้ตัวมันวัสดุ (81.6 g) ซึ่งใช้การ Diaion HP-20 resin คอลัมน์ และ eluted แล้ว ติด ๆ กันด้วยทานอเอชทูโอ (4:6 คุณพ่อ A), (7:3 คุณพ่อ B), (คุณพ่อ C) ทานอลและอะซีโตน (คุณพ่อD) . ทุกฝ่ายมีความเข้มข้นใน vacuo เพื่อให้ Fr.A (22.5 กรัม),Fr.B (5.4 กรัม), Fr.C (28.9 กรัม), และ Fr.D (18.9 กรัม) Fr.B และ Fr.C เท่านั้นเห็นลิปกลอสไขกิจกรรมในหลั่งของ LTC4 ที่เข้มข้นของ lg 100/ml ในแยกส่วนตัววิเคราะห์ทางชีวภาพ C คุณพ่อได้ trituratedทานอและวัสดุละลายได้ถูกรวบรวม และrecrystallized จาก EtOAc ให้ 19 (6100 มิลลิกรัม) เหล้าแม่เข้มข้นไปวัสดุมันที่ถูกต้องซิลิก้าเจล CC นี้ถูก eluted ติด ๆ กันกับโพลี-EtOAc(5:1, 3.6 l, C ของคุณพ่อ-1-C-3), (3:1, 2.0 l, Fr.C-4), (2:1, 1.0 l, Fr.C-5), (1:12.4 l, Fr.C-6), EtOAc (2.0 l, Fr.C-7) และทานอ (2.0 l, Fr.C-8) ให้เศษ 8 คุณพ่อ C-3 ถูกแบ่ง โดยระยะกลับ HPLC{ Kaseisorb LC PH ซูเปอร์ 20 250 มม. (คอลัมน์ A), ทานอเอชทูโอ(75:25) ไหลอัตรา 8 ml นาที 1 } ซื้อได้เศษ 4 (Fr.C-3-1 -C-3–4) Fr.C-3-3 ที่บริสุทธิ์ โดยระยะกลับ HPLC {KaseisorbLC ODS PH ซุปเปอร์ 10 250 มม. (คอลัมน์ B), ทานอเอชทูโอ (9:1),กระแสอัตรา 3 ml นาที 1 } 16 (38 มิลลิกรัม) ให้ Fr.C-4 ถูกแบ่งโดยขั้นตอนการ HPLC {คอลัมน์ A ทานอเอชทูโอ (8:2), อัตราการไหลย้อนกลับ8 ml นาที 1 } ซื้อได้เศษ 4 (คุณพ่อ C-4 – 1 – C-4-4) Fr.C-4-1เพิ่มเติมถูกคั่น ด้วยระยะกลับ HPLC {คอลัมน์ Bทานอเอชทูโอ (85:15), min 3 ml อัตราการไหล 1 } ให้ 1 (12 มิลลิกรัม) และ10 (12 มิลลิกรัม) ฟอก Fr.C-4-2 โดยใช้ HPLC กลับเฟส{คอลัมน์ B ทานอเอชทูโอ (85:15), min 3 ml อัตราการไหล 1 } ให้ 9(75 mg) แยก 5 C คุณพ่อ โดยระยะกลับ HPLC {คอลัมน์ Aทานอเอชทูโอ (8:2), ไหลอัตรา 8 ml นาที 1 } ให้เศษสิบสี่(Fr.C-5-1-C-5 – 14) ทำให้บริสุทธิ์ของคุณพ่อ C-5 – 3 ตามขั้นตอนย้อนกลับHPLC {คอลัมน์ B ทานอเอชทูโอ (75:25), min 3 ml อัตราการไหล 1 }หา 2 (15 mg) คุณพ่อ C-5-4 ถูกบริสุทธิ์ โดยระยะกลับ HPLC{คอลัมน์ B ทานอเอชทูโอ (75:25), min 3 ml อัตราการไหล 1 } ให้ 18(4 มิลลิกรัม) สารประกอบ 17 (7 มิลลิกรัม) ได้รับจาก Fr.C-5 – 6 โดยฟอกใช้กลับเฟส HPLC {คอลัมน์ B (ทานอเอชทูโอ (8:2),กระแสอัตรา 3 ml นาที 1 } Fr.C-5 – 10 ที่บริสุทธิ์ โดยขั้นตอนการย้อนกลับHPLC {Senshu ปาก PEGASIL ODS, 10u 250 มม. (คอลัมน์ C),ทานอเอชทูโอ (9:1), กระแสอัตรา 3 ml นาที 1 } ให้ 22 (16 มิลลิกรัม) สารประกอบ20 (47 มิลลิกรัม) และ 21 (29 มิลลิกรัม) ได้รับมาจากคุณพ่อ C-5 –12 และคุณพ่อ C-5-11 ตามลำดับ โดยฟอกกลับระยะ HPLC {คอลัมน์ C ทานอเอชทูโอ (9:1), min 3 ml อัตราการไหล 1 }คุณพ่อ B (5.4 กรัม) ถูกยัดเยียดให้ซิลิก้าเจล CC นี้ถูก eluted ติด ๆ กันกับ CHCl3 – ทานอเอชทูโอ {100:1:0 (300 มล คุณพ่อ B-1), 10:1:0.05(พัก 1650 มล คุณพ่อ B-2), 8:2:0.2 (2500 ml คุณพ่อ B-3), 7:3:0.3 (1000 มล คุณพ่อB-4, B 5), 6:4:0.5 (1000 มล คุณพ่อ B-6), 6:4:1 (2000 มล คุณพ่อ B-7) และอะซีโตน (คุณพ่อ B-8) } ให้เศษส่วน 8 Fr.B-1 ถูกแบ่งต่อไปโดยซิลิก้าเจล CC {โทลูอีนอะซีโตน 20:1 (500 ml, Fr.B - 1-1), 10:1 (550 ml, Fr.B-1-2), 5:1 (1020 มล Fr.B-1-3), 3:1 (600 มล.Fr.B-1–4), 2:1 (600 มล.), 1:1 (600 มล.), อะซิโตน (800 มล) Fr.B-1-5ทานอ (1000 มล Fr.B-1-6) } ให้เศษ 6 การแบ่งแยกFr.B-1 – 4 โดยระยะกลับ HPLC {คอลัมน์ A ทานอเอชทูโอ (4:6),กระแสอัตรา 3 ml นาที 1 } นี่สิบสองเศษส่วน (Fr.B-1-4-1-B - 1-4-12) . 3 (37 มิลลิกรัม) ให้ความเข้มข้นของ Fr.B-1-4-5 แยกเพิ่มเติมของ Fr.B-1-4-6 โดยระยะกลับ HPLC {คอลัมน์ B, CH3CN – H2O(3:7) ไหลอัตรา 3 ml นาที 1 } 13 (7 มิลลิกรัม) ให้ Fr.B-1-4-7 ถูกเพิ่มเติมบริสุทธิ์ โดยระยะกลับ HPLC (คอลัมน์ B, CH3CN-เอชทูโอ (32:68),กระแสอัตรา 3 ml นาที 1) ให้ 11 (5 มิลลิกรัม) ผสม 12 (17 มิลลิกรัม)รับจากคุณพ่อ B-1-4-8 โดยฟอกโดยใช้ขั้นตอนการย้อนกลับHPLC {คอลัมน์ B, CH3CN – (3:7), H2O นาที 3 ml อัตราการไหล 1 } แยกFr.B-1-4-9 โดยระยะกลับ HPLC {คอลัมน์ B, CH3CN – H2O(25:75) ไหลอัตรา 3 ml นาที 1 } ผล 14 (9 mg) Fr.B-1-4-11 เป็นบริสุทธิ์ โดย HPLC {คอลัมน์ B, CH3CN – H2O กลับเฟสเพิ่มเติม(3:7) ไหลอัตรา 3 ml นาที 1 } ให้ (6 mg) 4 Fr.B-3 ถูกแบ่งโดยกลับเฟส HPLC { CAPCELL ปากยูจี 20u 250 มม.(column D) ทานอเอชทูโอ (45:55), ไหลอัตรา 8 ml นาที 1 } ซื้อได้สี่เศษส่วน (Fr.B-3 – 1 – B-3-4) โดยกลับแยก Fr.B-3-2ระยะ HPLC {คอลัมน์ A, CH3CN – (15:85), H2O นาที 3 ml อัตราการไหล 1 }ตาราง 5ลิปกลอสไขผลของการแยกสารประกอบในรุ่น LTC4สารประกอบ IC50 (lM) สารประกอบ IC50 (lM)1 42.9 12 > 1002 > 100 13 > 1003 > 100 14 92.54 > 100 15 13.65 > 100 16-6 > 100 17 39.97 > 100 18 76.08 > 100 19 -b9 39.9 20 -บี10 23.3 21 -บี11 > คีโตติเฟน 100 46.8การไม่ทำสาร b (19, 20 และ 21) แสดง cytotoxicity ที่ความเข้มข้นของ > 10 lMAl. เอ็ดฟูรูกาวาม.พัก 2250 / พฤกษเคมี 72 (2011) 2244-2252ให้ 7 (10 มิลลิกรัม) และ 8 (3 มิลลิกรัม) สาร 5 (50 มิลลิกรัม) และ 6 (30 มิลลิกรัม)ได้รับ โดยแยกของคุณพ่อ B-3-3 โดยใช้ขั้นตอนการย้อนกลับHPLC {คอลัมน์ B ทานอเอชทูโอ (1:1), min 3 ml อัตราการไหล 1 } Fr.B-5ถูกแบ่งต่อไปตามขั้นตอนย้อนกลับ HPLC {คอลัมน์ Aทานอเอชทูโอ (4:6), นาที 8 ml อัตราการไหล 1 } ซื้อได้ 5 เศษส่วน(Fr.B-5-1-B-5-5) สารประกอบ 15 (15 มิลลิกรัม) ถูกแยกจาก Fr.B-5-1 โดยฟอกใช้กลับเฟส HPLC {คอลัมน์ BCH3CN – H2O (1:9), ไหลอัตรา 3 ml นาที 1 }

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สมุนไพรทั้งหมด . cuspidatus แห้ง ( 1.5 กก. ) ถูกสกัดด้วยแอลกอฮอล์ ( 6.0 ลิตร 
4 ) ภายใต้ ultrasonication สำหรับแต่ละ 30 นาทีที่ 20 – 30  C รวมสารสกัดเอทานอลจากภายใต้การลดความดัน เพื่อให้วัสดุผิวมัน
( 81.6 กรัม ) ซึ่งถูกใช้เพื่อ hp-20
diaion เรซิน คอลัมน์ แล้วตัวอย่างกระชั้นชิดกับ
ปริมาณ H2O ( 4 : 6 ) , ( 7 : 3 , Fr . ) Fr . B ) ปริมาณ ( Fr . C ) และอะซิโตน ( Fr .
d )แต่ละส่วนมีความเข้มข้นใน vacuo ให้เ ( 22.5 g )
fr.b ( 5.4 กรัม ) Fr . C ( 28.9 กรัม ) และเ D ( 18.9 กรัม ) เพียงเ บี และ fr.c
มีกิจกรรมการยับยั้งในการหลั่งของ ltc4 ความเข้มข้น
100 LG / ml ในไบโอ 3 แนวทาง ( Fr . C triturated
ด้วยเมทิลแอลกอฮอล์และวัสดุที่ไม่ละลายน้ำที่ถูกเก็บรวบรวมและ
recrystallized จาก etoac ให้ 19 ( 6100 มิลลิกรัม ) แม่เหล้า
กำลังเข้มข้น ที่จะทิ้งผิววัสดุที่ถูกยัดเยียดให้
ซิลิกาเจลซีซี นี่เป็นตัวอย่างกระชั้นชิดด้วยเฮกเซนและ etoac
( 5 : 1 3.6 ลิตร เ c-1 – c-3 ( 3 : 1 ) , 2.0 ลิตร fr.c-4 ) , ( 2 , 1.0 ลิตร fr.c-5 ) ( 1 : 1 1 :
2.4 ลิตร fr.c-6 ) etoac , ( 2.0 ลิตร fr.c-7 ) และปริมาณ ( 2.0 ลิตร ให้ fr.c-8 )
8 เศษส่วน เ c-3 ถูกพบโดยเฟส 2
{ kaseisorb LC M ซูเปอร์กลับ 20  250 มม. ( คอลัมน์ )เมทิลแอลกอฮอล์– H2O
( 5 ) , อัตราการไหล 6 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } จ่ายสี่เศษส่วน ( fr.c-3 – 1 -
c-3 – 4 ) - fr.c-3 3 บริสุทธิ์โดยเฟส HPLC { kaseisorb
LC บอกอ ซุปเปอร์ กลับ 10  250 มม. ( คอลัมน์ B ) , H2O ( 9 : 1 ) ปริมาณและอัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที 
1 } เพื่อผลผลิต 16 ( 38 มิลลิกรัม ) fr.c-4 เป็นลำดับ
โดยกลับเฟส HPLC { คอลัมน์ , meoh-h2o ( 8 : 2 ) , อัตราการไหล 6 มิลลิลิตรต่อนาที 
1 } จ่ายสี่เศษส่วน ( Fr . ) 1 – 4 C4 ( C4 ) fr.c-4 – 1
เพิ่มเติมโดยแยกเฟส HPLC { คอลัมน์ B กลับ
H2O ( 85:15 ) ปริมาณและอัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } เพื่อให้ 1 ( 12 มิลลิกรัม ) และ
10 ( 12 มิลลิกรัม ) ผลิตและ fr.c-4 2 โดยใช้เฟส HPLC
{ คอลัมน์ B กลับเมทิลแอลกอฮอล์– H2O ( 85:15 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } เพื่อให้ 9
( 75 มก. ) การแยกจากได้ โดยกลับเฟส HPLC { คอลัมน์ ,
H2O ( 8 : 2 ) ปริมาณและอัตราการไหล 6 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } ให้สิบสี่เศษส่วน
( fr.c-5 – 1 – C-5 ( 14 )ฟอกเได้– 3 โดยเฟส
4 { คอลัมน์ B กลับเมทิลแอลกอฮอล์– H2O ( 5 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } )
2 ( 15 มก. ) คุณพ่อได้– 4 บริสุทธิ์โดยเฟส 2
{ คอลัมน์ B กลับเมทิลแอลกอฮอล์– H2O ( 5 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } เพื่อให้ 18
( 4 มิลลิกรัม ) สารประกอบ 17 ( 7 มก. ) ได้จาก fr.c-5 – 6 โดยการใช้ระยะที่ 2
{ คอลัมน์ B กลับ ( เมทิลแอลกอฮอล์ ) H2O ( 8 : 2 ) ,
3 มิลลิลิตรต่อนาทีอัตราการไหล  1 } เC - 5 – 10 บริสุทธิ์ โดยกลับเฟส
2 { ขายเช่นกัน ปาก pegasil ODS 10u  , 250 มิลลิเมตร ( คอลัมน์ C )
H2O ( 9 : 1 ) ปริมาณและอัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } ให้ 22 ( 16 มิลลิกรัม ) สารประกอบ
20 ( 47 มิลลิกรัม ) และ 21 ( 29 มก. ) ที่ได้รับจากคุณพ่อได้–
12 เ C - 5 – 11 ตามลำดับ โดยการใช้ขั้นตอนกลับ
2 { คอลัมน์ C meoh-h2o ( 9 : 1 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } .
เ b ( 5.4 กรัม ) ภายใต้ซิลิกาเจลซีซี ,นี้เป็น ตัวอย่างกระชั้นชิด
กับ chcl3 –ปริมาณ– H2O { 100:1:0 ( 300 มล. Fr . B1 ) , 10:1:0.05
( 1650 มิลลิลิตร จาก บี - 2 ) , 8:2:0.2 ( 2500 ml เ b-3 ) 7:3:0.3 ( 1000 ml เ
B-4 B-5 ) 6:4:0.5 ( 1000 ml เ 6:4:1 ( - 6 ) , 2000 ml เ b-7 ) และ
อะซิโตน ( Fr . b-8 ) } เพื่อให้แปดเศษส่วน fr.b-1 ยังพบ
โดยซิลิกาเจล CC { โทลูอีนและอะซิโตน ( 500 ml ) : fr.b-1
1 ) , 10 ( 550 มล. fr.b-1 ( 5 : 2 )1 ( 750 มล. fr.b-1 – 3 ) 3 : 1 ( 600 มล.
fr.b-1 ( 4 ) 2 : 1 ( 600 มล. ) , 1 : 1 ( 600 มล. ) อะซิโตน ( 800 มิลลิลิตร ) และปริมาณ fr.b-1 5
( 1000 ml fr.b-1 – 6 ) } ผลผลิต 6 เศษส่วน การแยก
fr.b-1 – 4 โดยกลับเฟส HPLC { คอลัมน์ , H2O ( 4 : 6 ) ปริมาณและอัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที 
1 } afforded สิบสองเศษส่วน ( fr.b-1 – 4-1-b-1 –
4-12 ) ความเข้มข้นของ fr.b-1 – 4-5 ให้ 3 ( 37 มิลลิกรัม )
แยกต่อไปของเB1 ( 4-6 โดยเฟส HPLC { คอลัมน์ B กลับ ch3cn – H2O
( 3 : 7 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } ให้ 13 ( 7 มก. ) fr.b-1 – 4-7 เพิ่มเติม
บริสุทธิ์ โดยเฟส HPLC กลับ ( คอลัมน์ B ch3cn – H2O ( 32:68 )
3 มิลลิลิตรต่อนาทีอัตราการไหล  1 ) ให้ 11 ( 5 มิลลิกรัม ) สารประกอบ 12 ( 17 มิลลิกรัม ) ได้จาก Fr . B1
( 4-8 โดยฟอกเฟส HPLC โดยใช้
{ คอลัมน์ B กลับ ch3cn – H2O ( 3 : 7 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } แยก
ของเB1 ( 4-9 โดยเฟส HPLC { คอลัมน์ B กลับ ch3cn – H2O
( 25:75 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } 9 และ 14 มิลลิกรัม ) fr.b-1 – 4-11 คือ
เพิ่มเติมบริสุทธิ์ โดยเฟส HPLC { คอลัมน์ B กลับ ch3cn – H2O
( 3 : 7 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } เพื่อให้ 4 ( 6 มก. ) fr.b-3 เป็นลำดับ
โดยกลับเฟส HPLC { capcell ปาก UG , 20u  250 mm
( คอลัมน์ D ) และปริมาณ H2O ( 45:55 ) , อัตราการไหล 6 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } เท่าใด
4 เศษส่วน ( เb-3 – 1 – b-3 – 4 ) การแยก fr.b-3 – 2
{ กลับเฟส HPLC คอลัมน์ , ch3cn – H2O ( 15:85 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } 5

ตารางผลการยับยั้งของสารประกอบที่แยกได้ในรุ่นของ ltc4 .
สารประกอบ ic50 ( LM ) สารประกอบ ic50 ( LM )
1
2 ผู้นำ 12 > 100 > 100 13 > 100
3
4 > > 100 14 แท้ 100 15 1
5 > 100 16 -
6 > 100 17 39.9
7 > 100 > 100 19 18 76.0
8 B -
9 39.9 20 - B
10 23.3 21 - B
11 > 100 ปุ๋ยขี้นก 46.8
เป็นไม่ได้ . .
b สาร ( 19 , 20 และ 21 ) มีความเป็นพิษต่อเซลล์ที่ระดับความเข้มข้น 10 กล. .
2 , 250 เมตร ฟุรุ et al . 72 / พฤกษเคมี ( 2011 ) เอเซีย ( 2252
ให้ 7 ( 10 มิลลิกรัม ) และ 8 ( 3 มก. ) สารประกอบ 5 ( 50 มิลลิกรัม ) และ 6 ( 30 มิลลิกรัม )
ได้โดยแยกจาก b-3 – 3 เฟส HPLC โดยใช้
{ คอลัมน์ B กลับเมทิลแอลกอฮอล์– H2O ( 1 : 1 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } fr.b-5
ต่อด้วยพบกลับเฟส HPLC { คอลัมน์ ,
H2O ( 4 : 6 ) ปริมาณและอัตราการไหล 6 มิลลิลิตรต่อนาที  1 } 5
( เศษส่วนเท่าใด fr.b-5 – 1 – B-5 ( 5 ) ผสม 15 ( 15 มก. ) ถูกแยกจาก fr.b -
5 – 1 โดยการใช้เฟส HPLC { คอลัมน์ B กลับ
ch3cn – H2O ( 1 : 9 ) , อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที  1 }