2.4. Time-kill kinetic assayBacteri

2.4. Time-kill kinetic assay
Bactericidal activity was measured using a time-kill kinetic
method. Time-kill curves were assessed at the following DG-LRE
concentrations: 0.5  MIC, 1  MIC, 2  MIC, and 4  MIC. The
control curve was assessed in culture medium. The bacteria were
inoculated in BHI broth and incubated overnight in a 5% CO2
incubator. Liquid media containing DG-LRE at the above mentioned
concentrations was inoculated with 1 106 CFU/ml of an overnight
culture and incubated at 37 C in 5% CO2. At 0, 3, 6,12, and 24 h after
inoculating bacteria, each bacterial culture solution was diluted
100- through 10,000-fold and plated onto a BHI agar plate. The agar
plate was incubated at 37 C in atmosphere containing 5% CO2 for
48 h before the bacterial colonies were counted.
2.5. Determining cell toxicity
Normal human gingival fibroblast (NHGF) cells were a kind gift
from Professor Hyun-Sun Jang, Department of Oral Pathology,
School of Dentistry, Chosun University (Gwangju, Korea). NHGF
cells were grown in Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM,
Gibco BRL, Grand Island, NY) supplemented with 10% heatinactivated
fetal bovine serum (PAA Laboratories, Etobicoke,
Ontario, Canada), 100 U/ml penicillin, and 100 mg/ml streptomycin
(Gibco BRL) at 37 C in a humidified atmosphere 5% CO2.
An MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
bromide, a tetrazole) assay was performed to test the cytotoxicity
of DG-LRE on NHGF cells. An 80% confluent monolayer of NHGF
cells in a 24-well plate was incubated with 32, 16, 8, 4, 2, 1, and
0.5 mg/ml of DG-LRE and 1% DMSO as a control in growth medium
at 37 C in humidified air with 5% CO2 for 24 h. The medium in each
well was replaced with new culture medium containing 10% MTT
solution (Sigma) and cultured for 3 h under the same culture
conditions. Isopropanol (300 ml, Sigma) was added to each well to
dissolve the formazan crystals. The culture plate was well shaken.
Samples (200 ml) were transferred to a 96-well plate. The absorbance
was measured at 595 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การฆ่าเวลาวิเคราะห์เดิม ๆกิจกรรม bactericidal ถูกวัดโดยใช้การเวลาฆ่าเดิม ๆวิธีการ ฆ่าเวลาโค้งถูกประเมินที่ LRE กิจที่ต่อไปนี้ความเข้มข้น: 0.5 MIC, 1 MIC, 2 MIC และ 4 MIC ที่ควบคุมเส้นโค้งถูกประเมินในวัฒนธรรม แบคทีเรียมีinoculated ใน BHI ซุป และ incubated ค้างคืน 5% CO2บ่มเพาะวิสาหกิจ สื่อของเหลวที่ประกอบด้วยกิจ LRE ที่ข้างต้นกล่าวถึงความเข้มข้นถูก inoculated กับ 1 106 CFU/ml ของแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์วัฒนธรรม และ incubated ที่ 37 C 5% CO2 ที่ 0, 3, 6,12 และ 24 ชมหลังจากinoculating แบคทีเรีย แก้ปัญหาแต่ละวัฒนธรรมแบคทีเรียถูกยกเว้น100 - ผ่าน 10,000-fold และชุบ BHI agar ใส่จาน Agarจานถูก incubated ที่ 37 C ประกอบด้วย 5% CO2 ในบรรยากาศh 48 ก่อนอาณานิคมแบคทีเรียนับได้2.5 การกำหนดเซลล์ความเป็นพิษของขวัญประเภทมีเซลล์ fibroblast gingival ปกติมนุษย์ (NHGF)จากศาสตราจารย์ฮยอน-อาทิตย์แจง พยาธิวิทยาแผนกปากโรงเรียนทันตกรรม มหาวิทยาลัยโชซัน (กวางจู เกาหลี) NHGFเซลล์ที่โตในของดุลเบกโกแก้ไขอีเกิลของกลาง (DMEMเกาะแกรนด์ NY, Gibco BRL) เสริม ด้วย heatinactivated 10%เซรั่มวัวและทารกในครรภ์ (PAA ปฏิบัติ Etobicokeออนตาริโอ แคนาดา), 100 U/ml ยาเพนนิซิลลิน และ streptomycin 100 mg/ml(Gibco BRL) ที่ 37 C ในบรรยากาศ humidified 5% CO2(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium MTTโบรไมด์ เป็น tetrazole) ทำการวิเคราะห์เพื่อทดสอบการ cytotoxicityของกิจ-LRE ในเซลล์ NHGF เป็น monolayer confluent 80% ของ NHGFเซลล์ในจานดี 24 ถูก incubated 32, 16, 8, 4, 2, 1 และ0.5 mg/ml ของ LRE กิจและ 1% DMSO เป็นตัวควบคุมการเจริญเติบโตปานกลางที่ 37 C ในอากาศ humidified กับ 5% CO2 ใน 24 ชม สื่อในแต่ละดีถูกแทนที่ ด้วยสื่อวัฒนธรรมใหม่ที่ประกอบด้วย 10% MTTโซลูชัน (ซิกมา) และอ่างสำหรับ h 3 ภายใต้วัฒนธรรมเดียวกันเงื่อนไขการ Isopropanol (300 มล ซิก) เพิ่มไปด้วยเพื่อละลายผลึก formazan ดีถูกเขย่าแผ่นวัฒนธรรมตัวอย่าง (200 มล.) ได้โอนย้ายไปดี 96 แผ่น Absorbance ที่มีวัดที่ 595 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . เวลาฆ่าจลน์ (
แบคทีเรียกิจกรรมการวัดเวลาฆ่าวิธีการทาง

เวลาฆ่าเส้นโค้งมีการประเมินที่ dg-lre
ความเข้มข้นดังต่อไปนี้ : 0.5  ไมค์ 1 ไมค์ 2   , ไมค์ , และ 4  MIC
โค้งควบคุมและสื่อวัฒนธรรม แบคทีเรียที่เป็นเชื้อบ่มโดย BHI broth
ในชั่วข้ามคืนในตู้อบ CO2
5 %อาหารเลี้ยงเชื้อเหลวที่มี dg-lre ที่กล่าวถึงข้างต้น
ความเข้มข้นเป็นเชื้อ 1  106 cfu / ml ของวัฒนธรรมค้างคืน
บ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ใน  คาร์บอนไดออกไซด์ 5% ที่ 0 , 3 , 6,12 , และ 24 ชั่วโมงหลังจาก
ณแบคทีเรีย แบคทีเรียแต่ละวัฒนธรรมในสารละลายเจือจาง
100 - ผ่าน 10 , 000 พับชุบวุ้น BHI และลงบนจาน จานอาหารเลี้ยงเชื้อ
บ่มที่ 37  C ในบรรยากาศที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5 %
48 ชั่วโมงก่อนอาณานิคมแบคทีเรียถูกนับ .
2.5 กำหนดเซลล์ fibroblast มนุษย์พิษ
ปกติเหงือก ( nhgf ) เซลล์เป็นชนิดของขวัญ
จากอาจารย์ฮยอนซันจัง ภาควิชาทันตพยาธิวิทยา
คณะทันตแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยโชซอน ( กวางจู , เกาหลี ) nhgf
เซลล์เติบโตในดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem gibco BRL
, , เกาะแกรนด์ , นิวยอร์ก ) เสริมด้วย 10% heatinactivated
แม่วัว เซรั่ม ( ป้าห้องปฏิบัติการ , Etobicoke
, Ontario , แคนาดา ) , 100 U / ml เพนนิซิลลิน และ 100 มก. / มล. และ streptomycin
( gibco BRL ) ที่อุณหภูมิ 37  C ในบรรยากาศ humidified 5% CO2 .
ที่ MTT ( 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2,5-diphenyltetrazolium
โบรไมด์ , tetrazole ) การทดสอบการปฏิบัติเพื่อทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ของ dg-lre
nhgf . 80% ของ nhgf
อย่างที่ไหลไปด้วยกันเซลล์ใน 24 ดีจานแยก 32 , 16 , 8 , 4 , 2 , 1 และ
0.5 mg / ml และ DMSO 1% ของ dg-lre เป็นตัวควบคุมในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ 
37 องศาเซลเซียส ในอากาศด้วย CO2 humidified 5% เป็นเวลา 24 ชั่วโมง สื่อแต่ละ
ก็ถูกแทนที่ด้วยใหม่ วัฒนธรรมอาหารที่มีโซลูชั่นที่ MTT
10 % ( Sigma ) และอาหาร 3 วัฒนธรรม
H ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ไอโซโพรพานอล ( SIGMA 300 มล. ) เพิ่มกัน

ละลายเหลือเชื่อ . วัฒนธรรมจานก็หวั่นไหว
ตัวอย่าง ( 200 ml ) ถูกย้ายไปยัง 96 ครับจาน น
เป็นวัดที่ 595 นาโนเมตร