S C O P EThis method is applicable

S C O P E
This method is applicable for detection of pathogenic E. coli of serogroups O26, O45, O103, O111, O121 and
O145 in beef trim. The method can be used in conjunction with the BAX RT method for the detection of E.
coli O157:H7 in beef (AOAC 031002).
P R I N C I P L E S
The BAX System amplifies specific DNA fragments unique to pathogenic STEC serogroups using polymerase
chain reaction (PCR). Initially the organisms are allowed to grow in BAX system MP enrichment medium
followed by PCR analysis for the presence of the eae and stx genes. Samples positive for eae and stx genes
then undergo further PCR analysis for specific pathogenic STEC serogroups (specific wzx genes).
 Pre-enrichment
Samples (375 g) are diluted in pre-warmed (45-46C) BAX® System MP enrichment broth (1.5L) and
hand massaged or stomached for 2 minutes to mix. Samples are incubated at 39-42°C for 12-24 hours.
The temperature of both the broth and sample must be at 39-42°C for a minimum of 12 h. A positive
control must be run through all enrichment and testing procedures daily or when testing is carried out.
 BAX system for screening top 6 STEC
The BAX® System PCR Assay suite for STEC is an automated method that uses polymerase chain
reaction (PCR) technology for the detection of pathogenic STEC serogroups in beef trim. The BAX®
method uses lysis reagent which is prepared by adding 150 µL protease to 12 mL of lysis buffer. For
each sample, 20 µL of the enrichment broth is added to 200 µL of prepared lysis reagent in cluster
tubes. Tubes are heated for 20 minutes at 37°C and 10 minutes at 95°C and then cooled for at least 5
minutes in a cooling block. PCR tablets are hydrated with 30 µL of lysate and run in a BAX® System Q7
machine.
 PCR Confirmation
Screened samples, identified as positive, must be analysed for top 6 serogroups using BAX Panel 1
(O26, O111, O121) and Panel 2 (O45, O103, O145). The Panels will screen down to serogroup level.
PCR positive samples will be considered as potential positives.
 Confirmation
Samples that test BAX negative are reported as negative. Cultural analysis shall continue as per USDAFSIS
or equivalent methods for sample pre-enrichments that test BAX positive, indeterminate, or have
an invalid result. Or, the laboratory may review the cause of the indeterminate or invalid result and
based on the findings re-analyse the sample by:
 Repeating the BAX analysis from the rack loading step
 Preparing new BAX tubes and repeating the analysis or
 Screen testing with another department approved method
Confirmation must be carried out at a department approved laboratory using a department approved
method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

S C O P Eวิธีนี้จะใช้ตรวจ pathogenic E. coli ของ serogroups O26, O45, O103, O111, O121 และO145 ในเนื้อตัดแต่ง วิธีการใช้ร่วมกับวิธี BAX RT ตรวจอีO157:H7 coli ในเนื้อ (AOAC 031002)P R ผม N C ฉัน P L E Sระบบ BAX กำลังโคจรอยู่ซึ่งเฉพาะดีเอ็นเอชิ้นส่วนเฉพาะ serogroups STEC pathogenic ที่ใช้พอลิเมอเรสปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) เริ่มต้นที่สิ่งมีชีวิตสามารถเติบโตใน BAX ระบบ MP โดดเด่นตาม ด้วย PCR วิเคราะห์สถานะของยีน eae และ stx ตัวอย่างค่าบวกสำหรับยีน eae และ stxรับวิเคราะห์ PCR ต่อไปสำหรับ STEC เฉพาะ pathogenic serogroups (wzx เฉพาะยีน)ในบ่อก่อนตัวอย่าง (375 g) ที่ผสมในซุปขอ BAX ®ระบบ MP ก่อน warmed (45-46C) (1.5 L) และมือนวด หรือ stomached 2 นาทีผสม ตัวอย่างที่ incubated ที่ 39-42° C 12-24 ชั่วโมงอุณหภูมิของทั้งซุปและตัวอย่างต้องอยู่ที่ 39-42° C อย่างน้อย 12 h เป็นบวกตัวควบคุมต้องเรียกใช้ผ่านบ่อทั้งหมด และทดสอบกระบวนการทดสอบทุกวัน หรือเมื่อมีดำเนิน BAX ระบบคัดกรอง STEC ชั้น 6STEC สวี BAX ®ระบบ PCR Assay เป็นวิธีที่ใช้โซ่พอลิเมอเรสเทคโนโลยีปฏิกิริยา (PCR) ตรวจ pathogenic serogroups STEC ในเนื้อตัดแต่ง BAX ®วิธีใช้รีเอเจนต์ lysis ซึ่งเตรียม โดยการเพิ่ม 150 µL รติเอส 12 mL lysis บัฟเฟอร์ สำหรับแต่ละอย่าง 20 µL ของซุปขอเพิ่ม 200 µL ของ lysis เตรียมรีเอเจนต์ในคลัสเตอร์หลอด หลอดความร้อน 20 นาที ที่ 37° C และ 10 นาทีที่ 95° C และระบายความร้อนด้วยสำหรับน้อย 5 แล้วนาทีในการระบายความร้อน เม็ด PCR มี hydrated กับ 30 µL lysate และเรียกใช้การ BAX ®ระบบ Q7เครื่อง PCR ยืนยันตัวอย่างสกรีน เป็นบวก ต้องเป็น analysed สำหรับใช้ 1 แผง BAX serogroups บน 6(O26, O111, O121) และแผง 2 (O45, O103, O145) การติดตั้งจะจอจนถึงระดับ serogroupตัวอย่างบวก PCR จะถือว่าเป็นการทำงานผิดพลาดที่อาจเกิดขึ้นยืนยันตัวอย่างที่ทดสอบลบ BAX จะรายงานเป็นค่าลบ วิเคราะห์วัฒนธรรมต่อต่อ USDAFSISหรือเทียบเท่าวิธี enrichments ล่วงหน้าตัวอย่างที่ทดสอบ BAX บวก ไม่ทราบแน่ ชัด หรือมีผลลัพธ์ไม่ถูกต้อง หรือ ห้องปฏิบัติการสามารถตรวจสอบสาเหตุของผลลัพธ์ไม่ถูกต้อง หรือไม่ทราบแน่ชัด และตามที่ค้นพบใหม่วิเคราะห์ตัวอย่างโดย:การวิเคราะห์ BAX จากชั้นโหลดขั้นตอนการทำซ้ำการเตรียมหลอด BAX ใหม่ และทำซ้ำการวิเคราะห์ หรือหน้าจอทดสอบกับแผนกอื่นอนุมัติวิธีการยืนยันต้องทำในห้องปฏิบัติการแผนกอนุมัติใช้แผนกอนุมัติวิธีการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขอบเขตวิธีการนี้มีผลบังคับใช้สำหรับการตรวจสอบของอีโคไลที่ทำให้เกิดโรคของ serogroups O26, Ø45, O103, O111, O121 และ O145 ในการตัดแต่งเนื้อ วิธีการที่สามารถนำมาใช้ร่วมกับวิธี RT แบ็กซ์สำหรับการตรวจสอบของอีคอไลO157:. H7 ในเนื้อวัว (AOAC 031002) หลักการระบบแบ็กซ์ขยายดีเอ็นเอเฉพาะที่ไม่ซ้ำกับ serogroups STEC ที่ทำให้เกิดโรคโดยใช้โพลีเมอปฏิกิริยาลูกโซ่(PCR) ในขั้นต้นมีชีวิตที่ได้รับอนุญาตที่จะเติบโตในระดับปานกลางระบบแบ็กซ์การตกแต่ง MP ตามด้วยการวิเคราะห์ PCR สำหรับการปรากฏตัวของ EAE และยีน stx ตัวอย่างที่ดีสำหรับ EAE และยีน stx แล้วได้รับการวิเคราะห์ PCR ต่อไปสำหรับเฉพาะ serogroups STEC ที่ทำให้เกิดโรค (ยีน wzx เฉพาะ). การเพิ่มปริมาณตัวอย่าง (375 กรัม) จะปรับลดในก่อนอุ่น (45-46C) BAX®ระบบการตกแต่ง MP น้ำซุป (1.5L) และมือนวดหรือstomached เป็นเวลา 2 นาทีในการผสม ตัวอย่างที่มีการบ่มที่ 39-42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 12-24 ชม. อุณหภูมิของทั้งน้ำซุปและกลุ่มตัวอย่างต้องมี 39-42 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอย่างน้อย 12 ชั่วโมง บวกการควบคุมจะต้องทำงานผ่านทุกขั้นตอนการตกแต่งและการทดสอบในชีวิตประจำวันหรือเมื่อการทดสอบจะดำเนินการ. ระบบแบ็กซ์สำหรับการคัดกรองด้านบน 6 STEC PCR ระบบBAX® Assay ชุดสำหรับ STEC เป็นวิธีอัตโนมัติที่ใช้ลูกโซ่โพลิเมอร์ปฏิกิริยา(PCR) เทคโนโลยี สำหรับการตรวจสอบของ STEC ที่ทำให้เกิดโรค serogroups ในการตัดแต่งเนื้อ BAX®วิธีการใช้น้ำยาสลายซึ่งจัดทำขึ้นโดยการเพิ่มโปรติเอส 150 ไมโครลิตรถึง 12 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์สลาย สำหรับแต่ละตัวอย่าง 20 ไมโครลิตรของน้ำซุปการตกแต่งจะถูกเพิ่ม 200 ไมโครลิตรของสารสลายเตรียมในกลุ่มหลอด ท่อความร้อนเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและ 10 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียสและเย็นแล้วอย่างน้อย 5 นาทีในบล็อกระบายความร้อน แท็บเล็ตพีซีอาจะชุ่มชื้นกับ 30 ไมโครลิตรของ lysate และทำงานในระบบ Q7 BAX®เครื่อง.  PCR ยืนยันตัวอย่างการตรวจคัดกรองระบุว่าเป็นบวกจะต้องมีการวิเคราะห์ด้านบน6 serogroups ใช้แผงแบ็กซ์ 1 (O26, O111, O121) และแผง 2 (Ø45, O103, O145) แผงหน้าจอจะลงไปถึงระดับ serogroup. PCR ตัวอย่างในเชิงบวกจะได้รับการพิจารณาเป็นบวกที่อาจเกิดขึ้น. การยืนยันตัวอย่างว่าการทดสอบ BAX เชิงลบจะมีการรายงานเป็นเชิงลบ การวิเคราะห์ทางวัฒนธรรมจะยังคงเป็นต่อ USDAFSIS หรือวิธีการที่เทียบเท่าสำหรับตัวอย่าง enrichments ก่อนที่ทดสอบ BAX บวกไม่แน่นอนหรือมีผลที่ไม่ถูกต้อง หรือห้องปฏิบัติการอาจตรวจสอบสาเหตุของการเกิดผลไม่แน่นอนหรือไม่ถูกต้องและอยู่บนพื้นฐานของการค้นพบอีกครั้งในการวิเคราะห์ตัวอย่างโดย: ซ้ำการวิเคราะห์ BAX จากขั้นตอนที่ชั้นโหลดเตรียมหลอดแบ็กซ์ใหม่และการทำซ้ำการวิเคราะห์หรือการทดสอบหน้าจอที่มีแผนกอื่นได้รับการอนุมัติวิธีการยืนยันจะต้องดำเนินการที่กรมได้รับการอนุมัติการใช้ห้องปฏิบัติการภาควิชาได้รับการอนุมัติวิธีการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

S C O P E
วิธีนี้ใช้ได้กับการตรวจหาเชื้อ E . coli ของไวรัสจุดขาวในกุ้ง o26 o45 o103 o111 , , , , และ o121
o145 ในการตัดแต่งเนื้อ วิธีสามารถใช้ร่วมกับวิธี RT bax เพื่อตรวจหาเชื้อ E .
เป็นสมาชิก : H7 ในเนื้อ ( ไม่ 031002 ) .
p r i n C ผม P L E S
ระบบแบ็กส์ขยายเฉพาะดีเอ็นเอเฉพาะโรคไวรัสจุดขาวในกุ้งโดยใช้ STEC โดย
ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) ตอนแรกสิ่งมีชีวิตได้รับอนุญาตที่จะเติบโตใน แบกซ์ระบบ MP เสริมกลาง
ตามด้วยการวิเคราะห์ PCR สำหรับการปรากฏตัวของและยังเกี่ยวกับยีน ตัวอย่างดีๆ และยังรวมยีน
แล้วทำการวิเคราะห์เพิ่มเติมสำหรับโรคไวรัสจุดขาวในกุ้งโดยเฉพาะ STEC ( ยีน wzx เฉพาะ ) เสริม

จ้าตัวอย่าง ( 375 กรัม ) เจือจางก่อนอุ่น ( 45-46  C ) น้ำซุปเพิ่ม MP BAX ®ระบบ ( 1.5l ) และ
มือนวดหรือ stomached 2 นาทีในการผสม ตัวอย่างมีอุณหภูมิ 39-42 ° C เป็นเวลา 12-24 ชั่วโมง
อุณหภูมิของทั้งน้ำซุปและตัวอย่างที่ต้อง 39-42 ° C เป็นเวลาอย่างน้อย 12 ชั่วโมง ควบคุมบวก
ต้องวิ่งผ่านทุกขั้นตอนการทดสอบและเสริมทุกวันหรือเมื่อการทดสอบจะทำ .
 bax ระบบคัดกรองด้านบน 6 STEC
ระบบ® PCR assay แบกซ์สวีทสำหรับ STEC เป็นเครื่องมืออัตโนมัติที่ใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส ( พีซีอาร์ )
เทคโนโลยีการตรวจหาเชื้อ STEC ไวรัสจุดขาวในกุ้งในการตัดแต่งเนื้อ ใน แบกซ์®
วิธีใช้ผลิตสารเคมีที่เตรียมโดยการเพิ่ม 150 µผมโปร 12 มิลลิลิตร การสลายบัฟเฟอร์ สำหรับ
แต่ละตัวอย่าง20 µลิตรน้ำเสริมเพิ่ม 200 µล. เตรียมผลิตสารเคมีในกลุ่ม
หลอด ท่อความร้อนสำหรับ 20 นาทีที่ 37 ° C และ 10 นาทีที่ 95 องศา C และจากนั้นแช่เย็นอย่างน้อย 5
นาทีในความร้อนบล็อก วิธีแก้ hydrated กับ 30 µ l lysate และวิ่งใน แบกซ์ระบบ® Q7

เครื่อง PCR ยืนยัน
ฉายตัวอย่าง ระบุว่าเป็นบวกต้องวิเคราะห์อันดับ 6 ไวรัสจุดขาวในกุ้งโดยใช้แผงแบ็กส์ 1
( o26 o111 o121 , , ) และแผงที่ 2 ( o45 o103 o145 , , ) แผงจะหน้าจอลงไปที่ระดับซีโรกรุ๊ป .
PCR บวกตัวอย่างจะถูกถือว่าเป็นบวกที่อาจเกิดขึ้น ยืนยัน

ตัวอย่างที่ทดสอบ bax ลบแจ้งลบ . การวิเคราะห์วัฒนธรรมจะยังคงตาม usdafsis
หรือเทียบเท่าวิธีการตัวอย่างที่ทดสอบก่อน enrichments แบกซ์บวก ไม่แน่นอนหรือมี
ผลที่ไม่ถูกต้องได้ หรือทางห้องปฏิบัติการ อาจทบทวนสาเหตุของผลไม่แน่นอน หรือ ไม่ถูกต้อง และ
ผลอีกครั้งวิเคราะห์ตัวอย่างโดย :
ทำซ้ำการวิเคราะห์ bax จากแรคโหลดขั้นตอน
เตรียมหลอดแบ็กส์ใหม่และทำซ้ำการวิเคราะห์หรือ
หน้าจอการทดสอบกับแผนกอื่นได้รับการอนุมัติการยืนยันวิธีการ
ต้องดำเนินการที่กรมอนุมัติปฏิบัติการโดยใช้แผนกอนุมัติ

วิธี