MATERIALS AND METHODS Collection an

MATERIALS AND METHODS
Collection and Extraction of the leaves
The leaves were collected fresh from the chief researcher’s garden early in the morning from a small portion of land where it was planted in Moniya-Ibadan, Oyo State, Nigeria, (Figure1) and divided into portions, for crushing (raw liquid/juice extract), ethanol, acetone and methanol extraction following standard procedure. (Romanik et al., 2007, Ajaiyeoba et al., 2006).Briefly described, the fresh leaves for crushing was washed in ordinary tap water and crushed with an enamel mortal and pestle and the juice without adding any water, was collected by squeezing and then filtered with a fine cloth sieve and used same day. The portion for alcohol (ethanol, methanol and acetone) extraction was air-dried in a shady environment and latter blended to powder with electric blender. The powdered leaves of Andrographis paniculata were extracted separately by soaking about 20g in200mls of the different solvents (absolute ethanol, methanol and acetone) for maximum of 72 hours, this was to allow full extraction of the leaf constituents. The extracts were collected, and carefully filtered using Whatmanfilter No.1 and concentrated using a rotatory evaporator and poured into petri dish and dried on water bath at low temperature. The extract were weighed and then stored in a screw cap universal bottle and kept in the refrigerator until used. Isolation and Purification of bacteria colonies (Barrow & Feltham, 1995,
Cheesbrough 2006). A total of Forty-nine bacteria isolates (22 Staphylococcus aureus, 8 Escherichia coli, 6 Klebsiella pneumonia and 2 Klebsiellaoxytoca, 2 Proteus vulgaris, 2 Proteus mirabilis, 2 Salmonella typhi, 3 Pseudomonas aeruginosa, 1 each of Acinetobacter baumannii and Yersinia intermidis) were tested in the study. They were isolated from different human specimens sent to the laboratory of Department of Medical Microbiology, University College Hospital, Ibadan, for microscopy, culture and sensitivity. Samples of each bacterium were collected and stored on nutrient slopes and sub-cultured on Chocolate and MacConkey agar and subsequently on Nutrient agar (for biochemical tests) all the plates were incubated overnight and for a maximum of 24hrs at 37C. The characteristics morphology, colour and odour of the colony growths were verified. Gram staining was done in order to characterize each isolate into either Gram-negative or Gram-positive. Catalase and coagulase tests were conducted to identify S. aureus, oxidase test was conducted for Pseudomonas sp. and further identification was done using Microbact 24E (Oxoid), for Gram negative bacteria.
Evaluation of the Antimicrobial activity of extract of Andrographis paniculata leaves (Bauer and Kirby 1966, CLSI 2010)
The agar diffusion method was used to test the antibacterial properties of the extracts with standard antibiotic discs also included for comparison. The pure isolates of these bacteria were inoculated into sterile peptone water and incubated for 4-6hrs at 37C and diluted with normal saline to produce 0.5 McFarland’ s standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ เก็บรวบรวมและสกัดใบ ใบไม้ที่เก็บสดจากสวนของนักวิจัยหัวหน้าเช้าตรู่จากส่วนหนึ่งของที่ดินที่ถูกปลูกใน Moniya-Ibadan รัฐ Oyo ไนจีเรีย, (Figure1) และแบ่งส่วน สำหรับบด (น้ำดิบของเหลวสกัด), มาตรฐานวิธีสกัดเอทานอล อะซีโตน และเมทานอล (Romanik et al., Ajaiyeoba และ al., 2006, 2007) อธิบายสั้น ๆ ใบสดสำหรับบดถูกล้างในน้ำประปาธรรมดา และบด pestle เคลือบฟันมนุษย์ และน้ำที่ไม่เพิ่มน้ำใด ๆ ถูกรวบรวม โดย squeezing แล้วกรอง ด้วยตะแกรงผ้าดี และใช้วันเดียวกัน ส่วนการแยกแอลกอฮอล์ (เอทานอล เมทานอล และอะซีโตน) air-dried ในสภาพแวดล้อมร่มรื่น และหลังผสมผสานผงกับ blender ไฟฟ้า ใบไม้ผงทะลายได้แยกต่างหาก โดยแช่ประมาณ 20g in200mls แตกต่างกันหรือสารทำละลาย (แอบโซลูทเอทานอล เมทานอล และอะซีโตน) สูงสุด 72 ชั่วโมง นี้ถูกให้เต็มสกัด constituents ใบไม้ สารสกัดถูกเก็บรวบ รวม และรอบคอบกรองใช้นัมเบอร์ Whatmanfilter เข้มข้นใช้ rotatory evaporator และ poured ในจานเพาะเชื้อ และแห้งบนอ่างน้ำที่อุณหภูมิต่ำ สารสกัดได้ชั่งน้ำหนักแล้วเก็บไว้ในขวดฝาครอบสกรูสากล และเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ แยกและทำให้บริสุทธิ์ของแบคทีเรียอาณานิคม (บาร์โรและ Feltham, 1995 Cheesbrough 2006) จำนวนสี่สิบเก้าแบคทีเรียที่แยกได้ (หมอเทศข้างลาย Staphylococcus 22, 8 Escherichia coli, 6 โรค Klebsiella และ Klebsiellaoxytoca 2, 2 Proteus vulgaris, 2 Proteus mirabilis, typhi สาย 2, 3 Pseudomonas aeruginosa ละ 1 Acinetobacter baumannii และ Yersinia intermidis) ถูกทดสอบในการศึกษา พวกเขาถูกแยกจาก specimens มนุษย์อื่นที่ส่งไปยังห้องปฏิบัติการภาควิชาจุล ชีววิทยาทางการแพทย์ โรง พยาบาลวิทยาลัยมหาวิทยาลัย Ibadan, microscopy วัฒนธรรม และความไว ตัวอย่างของแบคทีเรียแต่ละถูกรวบรวมตามลาดธาตุอาหาร และย่อยอ่างช็อคโกแลตและ MacConkey agar และต่อธาตุอาหาร agar (สำหรับการทดสอบชีวเคมี) ทุกแผ่นถูก incubated ค้างคืน และสูงสุด 24 ชั่วโมงที่ 37 เซลเซียส มีการตรวจสอบสัณฐานวิทยาลักษณะ สี และกลิ่นของการเจริญเติบโตของโคโลนี การย้อมสีกรัมถูกทำเพื่อกำหนดลักษณะแต่ละแยกเป็นแบคทีเรียแกรมลบ หรือแบคทีเรียแกรมบวก ได้ดำเนินการทดสอบ catalase และ coagulase ระบุ S. หมอเทศข้างลาย วิธีการทดสอบ oxidase ใน Pseudomonas sp. และเพิ่มเติม ดำเนินการรหัสใช้ Microbact 24E (Oxoid), สำหรับแบคทีเรียลบกรัม การประเมินกิจกรรมการต้านจุลชีพของสารสกัดของทะลายทิ้ง (Bauer และเคอร์บี้ 1966, CLSI 2010) The agar diffusion method was used to test the antibacterial properties of the extracts with standard antibiotic discs also included for comparison. The pure isolates of these bacteria were inoculated into sterile peptone water and incubated for 4-6hrs at 37C and diluted with normal saline to produce 0.5 McFarland’ s standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการเก็บรวบรวมและการสกัดใบใบที่ถูกเก็บรวบรวมสดจากสวนนักวิจัยหัวหน้าในตอนเช้าจากส่วนเล็กๆ ของที่ดินที่ถูกปลูกใน Moniya-อีบาดันรัฐโอโยไนจีเรีย (รูปที่ 1) และแบ่งออกเป็นส่วน สำหรับบด (ของเหลวดิบ / สารสกัดน้ำผลไม้), เอทานอลอะซีโตนและการสกัดเมทานอลต่อไปนี้ขั้นตอนมาตรฐาน (Romanik et al., 2007 Ajaiyeoba et al., 2006) อธิบาย .Briefly ใบสดบดถูกล้างในน้ำประปาธรรมดาและบดกับมนุษย์เคลือบฟันและสากและน้ำผลไม้โดยไม่ต้องเพิ่มน้ำใด ๆ ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยบีบ แล้วกรองด้วยตะแกรงผ้าที่ดีและนำมาใช้ในวันเดียวกัน ส่วนสำหรับเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (เอทานอลเมทานอลและอะซีโตน) สกัดอากาศแห้งในสภาพแวดล้อมที่ร่มรื่นและหลังผสมผงด้วยเครื่องปั่นไฟฟ้า ใบผงฟ้าทะลายโจรถูกสกัดแยกโดยการแช่ประมาณ 20 กรัม in200mls ของตัวทำละลายที่แตกต่างกัน (เอทานอลแน่นอนเมทานอลและอะซีโตน) ได้ไม่เกิน 72 ชั่วโมงนี้คือการช่วยให้การสกัดเต็มรูปแบบขององค์ประกอบใบ สารสกัดที่ถูกเก็บรวบรวมและการกรองอย่างระมัดระวังโดยใช้ Whatmanfilter 1 และเข้มข้นโดยใช้เครื่องระเหยสับเปลี่ยนและเทลงในจานเพาะเชื้อและแห้งในอ่างน้ำที่อุณหภูมิต่ำ สารสกัดที่ได้รับการชั่งน้ำหนักและเก็บไว้ในฝาเกลียวขวดสากลและเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของแบคทีเรียโคโลนี (บาร์โรว์และ Feltham 1995 Cheesbrough 2006) รวมของแบคทีเรียสี่สิบเก้าไอโซเลท (22 เชื้อ Staphylococcus aureus, 8 เชื้อ Escherichia coli, 6 โรคปอดบวม Klebsiella 2 Klebsiellaoxytoca 2 Proteus vulgaris 2 Proteus mirabilis, typhi Salmonella 2, 3 เชื้อ Pseudomonas aeruginosa, 1 แต่ละ baumannii Acinetobacter และ intermidis Yersinia) เป็น การทดสอบในการศึกษา พวกเขาถูกแยกได้จากตัวอย่างของมนุษย์ที่แตกต่างกันส่งไปยังห้องปฏิบัติการของภาควิชาจุลชีววิทยาการแพทย์โรงพยาบาลมหาวิทยาลัยวิทยาลัยอีบาดันสำหรับกล้องจุลทรรศน์วัฒนธรรมและความไว ตัวอย่างของแบคทีเรียแต่ละถูกเก็บรวบรวมและจัดเก็บไว้บนเนินเขาและสารอาหารที่ย่อยเลี้ยงบนอาหารเลี้ยงเชื้อและช็อคโกแลต MacConkey และต่อมาในอาหารเลี้ยงเชื้อสารอาหาร (สำหรับการทดสอบทางชีวเคมี) แผ่นทั้งหมดถูกบ่มในชั่วข้ามคืนและไม่เกิน 24 ชั่วโมงที่ 37C สัณฐานลักษณะสีและกลิ่นของการเจริญเติบโตของอาณานิคมถูกตรวจสอบได้ การย้อมสีแกรมคือทำเพื่อที่จะอธิบายลักษณะแต่ละแยกออกเป็นทั้งแกรมลบหรือแกรมบวก การทดสอบ catalase และ coagulase ได้ดำเนินการในการระบุเชื้อ S. aureus ทดสอบ oxidase ได้ดำเนินการสำหรับ SP Pseudomonas และบัตรประจำตัวต่อไปที่ได้กระทำโดยใช้ Microbact 24E (Oxoid) สำหรับแบคทีเรียแกรมเชิงลบ. การประเมินผลกิจกรรมต้านจุลชีพของสารสกัดจากฟ้าทะลายโจรใบ (บาวเออร์และเคอร์บี้ 1966 CLSI 2010) วิธีการแพร่กระจายวุ้นถูกใช้ในการทดสอบคุณสมบัติต้านเชื้อแบคทีเรียของ สารสกัดที่มีแผ่นยาปฏิชีวนะมาตรฐานรวมสำหรับการเปรียบเทียบ เชื้อบริสุทธิ์ของเชื้อแบคทีเรียเชื้อเหล่านี้ลงไปในน้ำเปปโตนผ่านการฆ่าเชื้อและบ่มเป็นเวลา 4-6hrs ที่ 37C และเจือจางด้วยน้ำเกลือในการผลิต 0.5 McFarland ของมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการรวบรวมและการสกัดใบ

ใบเก็บสดจากหัวหน้านักวิจัย เป็นสวนในตอนเช้าจากส่วนเล็ก ๆของที่ดินที่ปลูกใน moniya Oyo State , Ibadan , ไนจีเรีย ( figure1 ) และแบ่งออกเป็นส่วน เพื่อบด ( ดิบของเหลว / น้ำผลไม้สกัด ) , เอทานอล อะซิโตนและการสกัดสารตามขั้นตอนมาตรฐาน( romanik et al . , 2007 , ajaiyeoba et al . , 2006 ) สั้น ๆอธิบาย ใบสดใช้น้ำธรรมดาล้างและบดกับมนุษย์ผิวเคลือบฟันและสากและน้ำโดยไม่ต้องเพิ่มใด ๆเพื่อบีบน้ำแล้วกรองด้วยกระชอนผ้าดีและใช้ในวันเดียวกัน ส่วนแอลกอฮอล์ ( เอทานอลอลและอะซิโตน ) สกัดอากาศแห้งในสภาพแวดล้อมที่ร่มรื่นและหลังผสมผงด้วยไฟฟ้า เครื่องปั่น ใบฟ้าทะลายโจรผงสกัดแยกโดยแช่ประมาณ 20 กรัม in200mls ของตัวทำละลายที่แตกต่างกัน ( แน่นอน เอทานอล เมทานอล และอะซิโตน ) ได้สูงสุด 72 ชั่วโมง นี้ เพื่อให้ใช้เต็มรูปแบบของใบ องค์ประกอบสารสกัดที่รวบรวมอย่างระมัดระวังและกรองใช้ whatmanfilter 1 และเข้มข้นโดยใช้เครื่องระเหยซึ่งทำให้หมุนรอบและเทลงในจานเลี้ยงเชื้อและแห้งในน้ำร้อนที่อุณหภูมิต่ำ สารสกัดหนักแล้วเก็บไว้ในขวดฝาเกลียวสากล และเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะนำมาใช้ การแยกบริสุทธิ์ของโคโลนีแบคทีเรีย ( รถเข็น& feltham 1995
cheesbrough 2006 ) ทั้งหมดสี่สิบเก้าแบคทีเรียไอโซเลท ( 22 Staphylococcus aureus , Escherichia coli และ Klebsiella ปอดบวม 6 2 klebsiellaoxytoca 2 แบบที่มี 2 มก. ที่มี 2 เชื้อไทฟอยด์ , 3 Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter baumannii 1 แต่ละ และ เยอซิเนีย intermidis ) ถูกทดสอบในการศึกษาพวกที่แยกได้จากตัวอย่างของมนุษย์ที่แตกต่างกันส่งถึงห้องปฏิบัติการของภาควิชาจุลชีววิทยา มหาวิทยาลัย วิทยาลัย โรงพยาบาล , Ibadan , ป , วัฒนธรรมและความไวตัวอย่างของแต่ละที่มีการเก็บรวบรวมและเก็บไว้บนเนินเขาธาตุอาหารและย่อยบนอาหารรสช็อกโกแลตและ Lynx และต่อมาใน NUMB3RS ( สำหรับการทดสอบทางชีวเคมี ) แผ่นทั้งหมดถูกบ่มค้างคืนและสูงสุดตลอด 24 ชั่วโมง ที่ 37c ลักษณะรูปร่าง สี และกลิ่นของอาณานิคมเจริญอยู่ได้กรัมย้อมเสร็จเพื่อที่จะศึกษาแต่ละแยกเป็นแกรมลบ หรือ แกรมบวก สามารถทดสอบและลูกเมีย มีวัตถุประสงค์เพื่อระบุ S . aureus , การทดสอบ oxidase มีวัตถุประสงค์สำหรับ Pseudomonas sp . และระบุเพิ่มเติม โดยใช้ microbact 24e ( oxoid ) , แบคทีเรียแกรมลบ
การประเมินฤทธิ์ต้านจุลชีพของสารสกัดจากใบฟ้าทะลายโจร ( บาวเออร์และ Kirby 1966 ต่าง 2010 )
วุ้นกระจายเป็นวิธีทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียคุณสมบัติของสารสกัดมาตรฐานยาปฏิชีวนะแผ่นดิสก์รวมอยู่ด้วยสำหรับการเปรียบเทียบบริสุทธิ์จำนวนแบคทีเรียเหล่านี้เป็นเชื้อบ่มน้ำหมัน ตามลำดับสำหรับ 4-6hrs และที่ 37c เจือจางด้วยน้ำเกลือเพื่อผลิต 0.5 แมคฟาร์แลนด์ ' s มาตรฐาน