synthesis and mRNA expression quant

synthesis and mRNA expression quantification were performed
following the method of Jang et al. [16]. The sequences of primers
and probes are shown in Table 1. One-step quantitative real-time
PCR (qRT-PCR) was accomplished with the One Step Prime-
Script™ RT-PCR perfect real time kit (Takara Bio, Japan). The final
reaction volume was 20 mL, including 10 mL of 2  One-Step RT-PCR
Buffer III, 2 units of Takara Ex Hot Start Taq enzyme, 0.4 mL of
reverse transcript enzyme Mix II, and 0.4 mM each of forward
primer, reverse primer and TaqMan probe. The PCR was conducted
as follows: 42 C for 5 min, 95 C for 10 s, followed by 40 cycles of
95 C for 5 s and 60 C for 30 s. Fluorescent signal detection was
started from the first cycle of the annealing stage. All samples were
analyzed in triplicates and the relative expression was determined
by the comparative threshold cycle (CT) method (2
DDCT method)
[31] using b-actin as a reference. It involves the CT values of the
target gene and housekeeping gene, b-actin, and compares the
relative expression level among each sample by 2
DDCT method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสังเคราะห์และปริมาณ mRNA
แสดงออกได้ดำเนินการตามวิธีของจางและอัล [16] ลำดับของไพรเมอร์และยานสำรวจแสดงในตารางที่ 1 หนึ่งขั้นตอนแบบ real-time เชิงปริมาณ PCR (qRT-PCR) ก็ประสบความสำเร็จกับขั้นตอนที่หนึ่ง Prime- สคริปต์™ RT-PCR ที่สมบูรณ์แบบชุดเวลาจริง (Takara Bio ญี่ปุ่น) สุดท้ายปริมาณปฏิกิริยา 20 มลรวมทั้ง 10 มิลลิลิตร 2? ขั้นตอนที่หนึ่ง-RT-PCR บัฟเฟอร์ III, 2 หน่วย Takara อดีตฮอตเอนไซม์ Taq เริ่ม 0.4 มิลลิลิตรหลักฐานกลับเอนไซม์ผสมครั้งที่สองและ0.4 มิลลิแต่ละข้างหน้าไพรเมอร์ไพรเมอร์ย้อนกลับและการสอบสวนTaqMan PCR ได้ดำเนินการดังต่อไปนี้? 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 วินาทีตามด้วย 40 รอบของ95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 และ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที? การตรวจจับสัญญาณเรืองแสงได้เริ่มต้นจากรอบแรกของขั้นตอนการอบอ่อน ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการวิเคราะห์ใน triplicates และการแสดงออกของญาติถูกกำหนดโดยรอบเกณฑ์เปรียบเทียบ(CT) วิธีการ (2? วิธี DDCT) [31] โดยใช้ B-โปรตีนเป็นข้อมูลอ้างอิง มันเกี่ยวข้องกับค่า CT ของยีนเป้าหมายและยีนดูแลทำความสะอาดขโปรตีนและเปรียบเทียบระดับการแสดงออกในหมู่ญาติแต่ละตัวอย่างโดย2 วิธี DDCT

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสังเคราะห์และศึกษาการแสดงออกของปริมาณการ
ต่อไปนี้วิธีจาง et al . [ 16 ] ลำดับของดีเอ็นเอโพรบและ
จะแสดงในตารางที่ 1 หนึ่งขั้นตอนเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์พีซีอาร์ ( PCR
ข้าพเจ้า ) ประสบความสำเร็จเป็นหนึ่งในขั้นตอนที่สำคัญ -
บทนี้™สมบูรณ์แบบจริงเวลา Kit ( ทาคาระไบโอ , ญี่ปุ่น ) ปริมาณ 20 ml ปฏิกิริยาสุดท้าย
รวมทั้ง 10 ML 2  ก้าว RT-PCR
บัฟเฟอร์ 3 ,2 หน่วยของทาคาระ อดีตจาเริ่มแท็คเอนไซม์ , 0.4 มิลลิลิตรเอนไซม์ผสม 2 ใบ
ย้อนกลับและ 0.4 มม. แต่ละข้างหน้า
ไพรเมอร์และกลับ taqman สอบสวน ร่วมดำเนินการ
ดังนี้ : 42  C เป็นเวลา 5 นาที 95  นาน 10 วินาที ตามด้วย 40 รอบ
 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วินาทีและ 60  เป็นเวลา 30 วินาที หลอดสัญญาณตรวจจับคือ
เริ่มจากรอบแรกของการอบอ่อนที่เวที ตัวอย่าง
วิเคราะห์ 3 ซ้ำ และการแสดงออก ญาติจึงตัดสินใจ
โดยรอบเกณฑ์เปรียบเทียบ ( CT ) วิธีการ ( วิธีการ ddct 2
)
[ 31 ] การใช้ b-actin เป็นอ้างอิง มันเกี่ยวข้องกับ CT ค่า
เป้าหมายยีนและยีน , แม่บ้าน b-actin และเปรียบเทียบระดับการแสดงออกของแต่ละญาติ
2
ddct ตัวอย่างโดยวิธี