Random decamer primers were obtaine

Random decamer primers were obtained from Operon Technologies (Alameda, CA, USA). A number of primers were tested before selecting five primers (Table 2) that reproducibly generated a number of polymorphic DNA bands with the rice DNA samples. PCR amplification was performed as described previously (Williams et al., 1990) with slight modifications. Briefly, the reaction mixture (25 μl) contained 1x Taq DNA polymerase buffer (Life Technologies, Grand Island NY, USA), 0.25 mM dNTP mixture, 0.4 μM of a oligonucleotide primer, 1.5 mM MgCl2, 1.0 ng of template DNA and 1.0 unit of AmpliTaq DNA polymerase (Life Technologies). Amplification was carried out in a Multigene thermocycler (Labnet International, Woodbridge, NJ, USA). The thermocycler was programed as the following: 94°C for 5 minutes (one cycle); 94°C for 30 sec, 35°C for 60 sec and 72°C for 120 sec (40 cycles); 72°C for 5 min (one cycle) and 4°C hold. The amplification products along with appropriate DNA size markers were eletrophoretically resolved in 1.0% agarose gel at a constant voltage of 7.5 volts/cm of gel length for 45 minutes. The gel was stained with ethidium bromide and documented using a Panasonic Lumix DMC-FS20 digital camera (Panasonic Malayasia, Kuala Lumpur, Malaysia).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไพรเมอร์ decamer สุ่มได้รับจากเทคโนโลยี Operon (อเมริกัน CA, USA) จำนวนไพรเมอร์ได้ทดสอบก่อนที่จะเลือก 5 ไพรเมอร์ (ตารางที่ 2) ที่สร้างขึ้นจำนวนแถบดีเอ็นเอ polymorphic ด้วยตัวอย่างดีเอ็นเอข้าว reproducibly ทำ PCR ขยายตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (วิลเลียมส์และ al., 1990) มีปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ ประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยา (25 μl) x Taq 1 ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสบัฟเฟอร์ (เทคโนโลยีชีวิต แกรนด์เกาะ NY, USA) μM 0.4 เป็น oligonucleotide พื้น MgCl2, 1.0 1.5 mM, 0.25 mM dNTP ผสม ng ของดีเอ็นเอแม่แบบและ 1.0 หน่วย AmpliTaq ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (ชีวิตเทคโนโลยี) ขยายได้ดำเนินใน thermocycler Multigene (อินเตอร์เนชั่นแนล Labnet วู้ดบริดจ์ NJ สหรัฐอเมริกา) Thermocycler จะถูก programed เป็นต่อไปนี้: 94° C 5 นาที (หนึ่งรอบ); 94° C นาน 30 วินาที 35° C สำหรับ 60 วินาที และ 72° C สำหรับ 120 วินาที (40 รอบ); 72° C 5 นาที (หนึ่งรอบ) และค้าง 4° C ผลิตภัณฑ์ขยายพร้อมเครื่องหมายขนาดดีเอ็นเอที่เหมาะสมถูก eletrophoretically แก้ไขใน 1.0% agarose เจลที่แรงดันคงที่ของ 7.5 โวลต์/เซนติเมตรของเจลความยาว 45 นาที เจมีสีกับโบรไมด์ ethidium และเอกสารใช้พานาโซนิค Lumix DMC-FS20 กล้องดิจิทัล (Malayasia พานาโซนิค กัวลาลัมเปอร์ มาเลเซีย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไพรเมอร์ decamer สุ่มที่ได้รับจากเทคโนโลยี operon (ซานฟรานซิสโก, สหรัฐอเมริกา) จำนวนของไพรเมอร์ได้มีการทดสอบก่อนที่จะเลือกห้าไพรเมอร์ (ตารางที่ 2) ที่ reproducibly สร้างจำนวนของวงดีเอ็นเอ polymorphic ข้าวตัวอย่างดีเอ็นเอ ขยาย PCR ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (วิลเลียมส์และคณะ. 1990) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้นผสมปฏิกิริยา (25 ไมโครลิตร) ที่มีบัฟเฟอร์ 1x Taq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (เทคโนโลยี Life, เกาะแกรนด์นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) 0.25 มิลลิส่วนผสม dNTP 0.4 ไมครอนของไพรเมอร์ oligonucleotide 1.5 มิลลิ MgCl2 1.0 ng ดีเอ็นเอแม่แบบและ 1.0 หน่วย ของ AmpliTaq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (เทคโนโลยี Life) ขยายได้รับการดำเนินการใน thermocycler multigene (Labnet นานาชาติวูดบริดจ์, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา) thermocycler ถูกตั้งโปรแกรมดังต่อไปนี้: 94 ° C เป็นเวลา 5 นาที (หนึ่งรอบ); 94 ° C นาน 30 วินาที, 35 ° C เป็นเวลา 60 วินาทีและ 72 ° C เป็นเวลา 120 วินาที (40 รอบ); 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที (หนึ่งรอบ) และ 4 ° C ถือ ผลิตภัณฑ์เครื่องขยายเสียงพร้อมกับเครื่องหมายดีเอ็นเอขนาดที่เหมาะสมได้รับการแก้ไขใน eletrophoretically เจล agarose 1.0% ที่แรงดันคงที่ 7.5 โวลต์ / ซม. ความยาวของเจลเป็นเวลา 45 นาที เจลที่ได้รับการย้อมด้วยสี ethidium โบรไมด์และบันทึกการใช้กล้องดิจิตอล Panasonic Lumix DMC-FS20 (พานาโซนิค Malayasia กัวลาลัมเปอร์มาเลเซีย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สุ่ม decamer ไพรเมอร์ที่ได้จากเทคโนโลยี โอเปอรอน ( Alameda , CA , USA ) จำนวนของชิ้นดีเอ็นเอทดสอบก่อนที่จะเลือก 5 ชนิด ( ตารางที่ 2 ) ที่ reproducibly สร้างจำนวนแถบดีเอ็นเอที่มีข้าวกับดีเอ็นเอของตัวอย่าง สามารถขยายได้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( วิลเลียม et al . , 1990 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆปฏิกิริยาผสม ( 25 μ L ) มีอยู่ 1x แท็ค DNA polymerase บัฟเฟอร์ ( เทคโนโลยี , ชีวิตในเกาะแกรนด์ , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา ) ผสม dntp 0.25 มม. , 0.4 μ M ของ ซึ่งไพรเมอร์ , 1.5 mm ชุด 1.0 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ 1.0 หน่วยดีเอ็นเอพอลิเมอเรส amplitaq ( เทคโนโลยีกับชีวิต ) การเพิ่มข้อมูลใน multigene เทอร์มอไซเคล ์ ( labnet นานาชาติ , Woodbridge , NJ , USA )ส่วนเทอมอไซเคล ์เป็นโปรแกรมดังต่อไปนี้ : 94 ° C เป็นเวลา 5 นาที ( 1 รอบ ) ; 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที 35 ° C เป็นเวลา 60 วินาที และ 72 ° C เป็นเวลา 120 วินาที ( 40 รอบ ) ; 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที ( 1 รอบ ) และ 4 ° C ค้างไว้ การเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอขนาดเหมาะสมผลิตภัณฑ์พร้อมกับเครื่องหมายถูกลงใน eletrophoretically 1.0 % เจลที่แรงดันไฟฟ้าคงที่ 7.5 โวลต์ / ซม. ของความยาวเจลเป็นเวลา 45 นาทีเจลเปื้อนทิเดียมโบรไมด์ และเอกสารที่ใช้ dmc-fs20 Panasonic Lumix กล้องดิจิตอล ( Panasonic malayasia , กัวลาลัมเปอร์ , มาเลเซีย )