2.4. Analytical procedures of water

2.4. Analytical procedures of water samples
Samples were collected directly into individual sterile 500 mL
bottles and transported to the laboratory in a chilled cold box.
Samples were analyzed for endotoxins as described previously
by Spaan et al. (2008). Samples of 50 mL were centrifuged
at 1000 g and the supernatant was stored at 20 C. After
collection of all samples, samples were analyzed by the
quantitative kinetic chromogenic Limulus amebocyte lysate
(LAL) method (Cambrex, Verviers, Belgium; lot no. lysate
1L676S, lot no. standard 2L 20090 (RSE/CSE ratio 11.5 EU/ng)),
in which the assay solution was pyrogen-free water þ0.05%
Tween-20. Samples were assayed at an initial dilution of 1:500
and, when the measured concentration was above the
detection limit of the assay, retested at higher dilutions (up to
1:10,000). Additionally, water samples of 40 mL, 10 mL and
0.1 mL were analyzed within 24 h of sampling for fecal indicator
bacteria E. coli and intestinal enterococci. E. coli was
enumerated using the Rapid Test on Tryptone Soy Agar
(996292, Oxoid, Wesel, Germany) and Tryptone Bile Agar
(806567, Oxoid) according to ISO9308-1 (Anonymous, 2000a).
Colonies were confirmed with James Reagens (BioMerieux,
Marcy ll’Etiole, France) according to the manufacturer’s instructions.
Intestinal enterococci were enumerated according
to ISO7899-2 (Anonymous, 2000b) on Slanetz and Barley Agar
(1005125, Oxoid) and Bile Esculin Azide Agar (726007, Remel).
2.5. Analytical procedures of air samples
Air filters were stored at 20 C until all samples were
collected. For extraction of endotoxin, each filter was
immersed in 5mL of pyrogen-free water with 0.05% Tween-20
in a glass tube and rocked vigorously for 1 h at room temperature
on a horizontal shaker. After 15 min of centrifugation
at 1000 g, 1mL aqueous supernatant per sample was collected
and vortexed. The endotoxin concentration in the extract was
assayed with the kinetic chromogenic Limulus Amoebocyte
Lysate (LAL) method. Samples were assayed at an initial
dilution of 1:50, and if the concentration was below detection
limit, retested at lower dilutions (up to 1:25).
2.6. Computational and statistical methods
Data were analyzed with SPSS statistical software version 16.
The concentration of endotoxins in air (EU/m3) was calculated
by dividing the number of endotoxin units (EU) on the filter by
Q*t, inwhichQwastheflowrate of the filtered air(m3/min)andt
was the sampling duration in minutes. Descriptive statistics
for endotoxins, E. coli and intestinal enterococci were given as
arithmetic mean (AM), standard deviation of AM (SD), geometric
mean (GM), geometric standard deviation (GSD) and
minimum and maximum per type of fountain. Because all
measured concentrations were assumed to be log-normally
distributed (Spaan et al., 2007), all calculations were performed
with log-transformed concentrations to the base e.
Regression analysis was used to explore which factors were
associated with exposure, with exp(b) representing the factor
bywhichthe estimatedexposurewaschangedper unit change.
For dummy variables, exp(b) represented the difference in
estimated exposure when the characteristic was present
versus absent. In addition, a logistic regression analysis was
conducted, because a high number of observations were below
the detection limit. With a logistic regression analysis, an odds
ratio (OR)wasobtained that can be interpreted as the likelihood
of observations above the detection limit when a certain factor
was present compared to the likelihood of observations above
the detection limit when a certain factor was absent. The significance
of this association was shownby the p-value, where a
p-value lower than 0.05 was assumed to be significant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การขั้นตอนที่วิเคราะห์ตัวอย่างน้ำตัวอย่างที่ถูกเก็บรวบรวมโดยตรงในแต่ละกระบอก 500 mLขวด และส่งไปห้องปฏิบัติการในกล่องเย็นเย็นมีวิเคราะห์ตัวอย่างสำหรับ endotoxins ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Spaan et al. (2008) ตัวอย่าง 50 mL มี centrifuged1000 กรัมและ supernatant ถูกเก็บไว้ที่ 20 C. หลังคอลเลกชันของตัวอย่างทั้งหมด ตัวอย่างได้วิเคราะห์โดยการเชิงปริมาณเดิม ๆ chromogenic Limulus amebocyte lysateวิธีการ (LAL) (Cambrex, Verviers เบลเยียม ล็อตไม่ lysate1L676S ล็อตไม่ มาตรฐาน 2 L 20090 (อัตราส่วน RSE/CSE 11.5 EU/ng)),ซึ่งการแก้ปัญหาวิเคราะห์ถูกน้ำฟรี pyrogen þ0.05%Tween-20 ตัวอย่างที่ assayed ที่เจือจางการเริ่มต้นของ 1: 500และ เมื่อวัดความเข้มข้นสูงกว่าตรวจสอบจำนวนทดสอบ retested ที่ dilutions สูง (ถึง1:10, 000) . นอกจากนี้ น้ำตัวอย่าง 40 mL, 10 mL และ0.1 mL ได้วิเคราะห์ภายใน 24 ชมของการสุ่มตัวอย่างสำหรับตัวบ่งชี้ fecalแบคทีเรีย E. coli และ enterococci ลำไส้ E. coli ได้ระบุโดยใช้การทดสอบอย่างรวดเร็วบน Tryptone Agar ถั่วเหลือง(996292, Oxoid, Wesel เยอรมนี) และน้ำดี Tryptone Agar(806567, Oxoid) ตาม ISO9308-1 (ไม่ระบุชื่อ 2000a)อาณานิคมได้ยืนยันกับ James Reagens (BioMerieuxMarcy ll'Etiole ฝรั่งเศส) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตลำไส้ enterococci ที่ระบุตามISO7899-2 (ไม่ระบุชื่อ 2000b) Slanetz และข้าวบาร์เลย์ Agar(1005125, Oxoid) และน้ำดี Esculin Azide Agar (726007, Remel)2.5 การขั้นตอนที่วิเคราะห์ตัวอย่างอากาศไส้กรองอากาศถูกเก็บไว้ที่ 20 C จนได้ตัวอย่างทั้งหมดรวบรวม การสกัดของ endotoxin ตัวกรองแต่ละสัมผัส 5mL น้ำฟรี pyrogen 0.05% Tween-20ในหลอดแก้ว และ rocked โยคะสำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้องในเชคเกอร์เป็นแนวนอน หลังจาก 15 นาทีของ centrifugationที่ 1000 g, supernatant อควี 1 มิลลิลิตรต่อตัวอย่างรวบรวมและ vortexed มีความเข้มข้นของ endotoxin ในการดึงข้อมูลassayed มี Amoebocyte Limulus chromogenic เดิม ๆวิธีการ (LAL) lysate ตัวอย่างที่ assayed ที่เริ่มต้นการเจือจาง 1:50 และถ้าความเข้มข้นต่ำตรวจจำกัด retested ที่ dilutions ล่าง (ถึง 1:25)2.6 การคำนวณ และสถิติมีวิเคราะห์ข้อมูล ด้วยโปรแกรมทางสถิติซอฟต์แวร์รุ่น 16คำนวณความเข้มข้นของ endotoxins ในอากาศ (EU/m3)โดยการหารจำนวนหน่วย endotoxin (EU) ในตัวโดยQ * t, inwhichQwastheflowrate andt กรองอากาศ (m3/min)ระยะเวลาในการสุ่มตัวอย่างในนาทีนั้น สถิติพรรณนาสำหรับ endotoxins, E. coli และ enterococci ลำไส้ได้รับเป็นค่าเฉลี่ยเลขคณิต (AM), ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ AM (SD), เรขาคณิตค่าเฉลี่ย (กรัม), ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานเรขาคณิต (GSD) และต่ำสุด และสูงสุดสำหรับแต่ละชนิดของน้ำพุ เนื่องจากทั้งหมดวัดความเข้มข้นถูกสันนิษฐานจะล็อกตามปกติกระจาย (Spaan et al., 2007), ดำเนินการคำนวณทั้งหมดมีล็อกแปลงความเข้มข้นฐาน eวิเคราะห์การถดถอยถูกใช้ในการสำรวจซึ่งปัจจัยเกี่ยวกับ มีแสง exp(b) ตัวแทนbywhichthe estimatedexposurewaschangedper เปลี่ยนสำหรับตัวแปรการกระพริบ exp(b) แสดงความแตกต่างประเมินความเสี่ยงเมื่อมีลักษณะเทียบกับขาดงาน นอกจากนี้ การวิเคราะห์การถดถอยโลจิสติกถูกดำเนิน เนื่องจากมีตัวเลขสูงสังเกตด้านล่างขีดจำกัดการตรวจสอบ ด้วยการวิเคราะห์ถดถอยโลจิสติก ราคาการwasobtained อัตราส่วน (OR) ที่สามารถแปลเป็นโอกาสสังเกตขีดตรวจเมื่อปัจจัยบางมีเปรียบเทียบกับโอกาสสังเกตข้างต้นจำกัดตรวจสอบเมื่อมีปัจจัยบางอย่างมา ความสำคัญสมาคมนี้มี shownby p-ค่า ซึ่งเป็นค่า p ต่ำกว่า 0.05 ถือว่ามีความสำคัญเป็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . วิเคราะห์วิธีการเก็บตัวอย่างโดยตรงตัวอย่าง

ขวด 500 มิลลิลิตร ในแต่ละงาน และส่งตัวไปปฏิบัติการในช่วงเย็นกล่อง
ตัวอย่างวิเคราะห์สารเอนโดทอกซินตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
โดยสปัน et al . ( 2008 ) ตัวอย่าง 50 มลไฟฟ้า
1000 กรัมและนำที่ถูกเก็บไว้ใน  20  C หลังจาก
คอลเลกชันของตัวอย่างทั้งหมด2.4 . วิเคราะห์วิธีการเก็บตัวอย่างโดยตรงตัวอย่าง

ขวด 500 มิลลิลิตร ในแต่ละงาน และส่งตัวไปปฏิบัติการในช่วงเย็นกล่อง
ตัวอย่างวิเคราะห์สารเอนโดทอกซินตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
โดยสปัน et al . ( 2008 ) ตัวอย่าง 50 มลไฟฟ้า
1000 กรัมและนำที่ถูกเก็บไว้ใน  20  C หลังจาก
คอลเลกชันของตัวอย่างทั้งหมดจำกัดการค้นหาของโดย retested ที่เจือจางสูง ( ขึ้น

1:10000 ) นอกจากนี้ ตัวอย่างน้ำ 40 มิลลิลิตร , 10 ml
0.1 มิลลิลิตร และวิเคราะห์ภายใน 24 ชั่วโมงของกลุ่มตัวอย่างเพื่อเติมแบคทีเรีย E . coli ตัวบ่งชี้
และลำไส้ทาง . E . coli คือ
ระบุการใช้การทดสอบอย่างรวดเร็วในทริพโทนเหลืองวุ้น
( 996292 oxoid เวเซิล , , , Germany ) และทริพโทนน้ำดี
( 806567 วุ้น ,วิเคราะห์เชิงปริมาณโดย
จลนศาสตร์การสนทนาผ่านข้อความโต้ตอบแบบทันที limulus การครอบครองแบบสิทธิสมบูรณ์
( ลัล ) ( Cambrex Verviers , เบลเยียม ; , มากไม่ lysate
1l676s มากไม่มาตรฐาน 20090 2L ( RSE / CSE อัตราส่วน 11.5 EU / NG ) ) ,
ซึ่งในการทดสอบสารละลายไพโรเจนฟรีน้ำþ 0.05 %
tween-20 . จำนวนปริมาณที่เจือจาง 1 : 500
เริ่มต้น และเมื่อวัดความเข้มข้นสูงกว่า
ตัวกรองอากาศที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียส จน   ตัวอย่าง
รวบรวม สำหรับการสกัดสารชีวพิษภายในตัว แต่ละตัวถูกแช่อยู่ในน้ำของสารก่อไข้
5 ฟรีกับ 0.05% tween-20
ในหลอดแก้วและเขย่าอย่างจริงจังเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง
บนเครื่องปั่นแนวนอน หลังจาก 15 นาทีของการปั่น
1000 กรัม 1ml น้ำน่านต่อการเก็บตัวอย่าง และ vortexed
.oxoid ) ตาม iso9308-1 ( ไม่ระบุชื่อประกอบ ) .
อาณานิคมได้รับการยืนยันกับ เจมส์ reagens ( biomerieux
, มาร์ ll'etiole , ฝรั่งเศส ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ลำไส้ถูกระบุตามมาตรฐาน

เพื่อ iso7899-2 ( นิรนาม , 2000b ) slanetz และข้าวบาร์เลย์วุ้น
( 1005125 oxoid , ) และท่อน้ำ esculin ไซด์วุ้น ( 726007 remel , ) .
2.5 ขั้นตอนของการวิเคราะห์ตัวอย่างอากาศ
นโดท็อกซินที่ความเข้มข้นในการแยกคือเอนไซม์จลนศาสตร์การสนทนาผ่านข้อความโต้ตอบแบบทันทีด้วย

lysate limulus อะมีโบไซต์ ( ลัล ) วิธี จำนวนปริมาณที่เจือจางครั้งแรก
1 : 50 และถ้าความเข้มข้นต่ำกว่าขีดจำกัดของการวิเคราะห์
, retested ที่เจือจางกว่า ( ถึง 25 ) .
2.6 คอมพิวเตอร์และสถิติวิเคราะห์ข้อมูลด้วย SPSS สถิติ

ซอฟต์แวร์รุ่น 16ความเข้มข้นของสารเอนโดทอกซินในอากาศ ( EU / m3 ) คำนวณได้
หารด้วยจำนวนหน่วยนโดท็อกซิน ( EU ) ในกรองด้วย
Q * t , inwhichqwastheflowrate ของกรองอากาศ ( m3 / min ) ค่าที
เป็นคนระยะเวลาในนาที
สถิติเชิงพรรณนาเพื่อถือเซลล์ , E . coli และลำไส้ทางได้รับเป็น
ค่าเฉลี่ย ( ) ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD ) เป็นเรขาคณิต
หมายถึง ( กรัม )ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานทางเรขาคณิต ( GSD ) และ
ขั้นต่ำและสูงสุดต่อชนิดของน้ำพุ เพราะทุกคน
วัดความเข้มข้นสมมติให้เข้าสู่ระบบปกติ
กระจาย ( สปัน et al . , 2007 ) , การคำนวณทั้งหมดคือการเปลี่ยนความเข้มข้นเพื่อเข้าสู่ระบบ
กับฐาน e .
ถดถอยถูกใช้เพื่อสำรวจปัจจัยที่เกี่ยวข้องกับการเป็น
กับ EXP ( B ) ปัจจัย
แทนเปลี่ยนหน่วยที่ใช้ estimatedexposurewaschangedper .
สำหรับตัวแปรดัมมี่ , exp ( b ) แสดงความแตกต่างในการประมาณการเมื่อลักษณะ

เป็นปัจจุบันและขาด นอกจากนี้ การวิเคราะห์การถดถอยโลจิสติกคือ
) เพราะจำนวนที่สูงของสังเกตด้านล่าง
ขีดจำกัด . ด้วยการวิเคราะห์การถดถอยโลจิสติก , การเดิมพัน