A novel heme peroxidase MGP from th

A novel heme peroxidase MGP from the latex of Ipomoea carnea subsp. fistulosa (morning glory)
belonging to the Convolvulaceae family was purified to homogeneity using ammonium sulfate
precipitation, anion exchange, hydrophobic interaction, and gel filtration chromatography. The enzyme
is glycosylated and has a molecular mass of 42.06 kDa (MALDI-TOF) and an isoelectric point of pH
4.3. The enzyme has high yield, broad substrate specificity, and a high stability toward pH, temperature,
chaotrophs, and organic solvents. The extinction coefficient (ε
280
1%) of the enzyme was estimated as
20.56 and it consists of 13 tryptophan, 9 tyrosine, and 8 cysteine residues forming 4 disulfide bridges.
There is significant effect of inhibitors targeting S-S bridges (mercaptoethanol, L-cysteine, glutathione),
as well as of inhibitors targeting heme (sodium azide and hydroxylamine) on peroxidase activity,
whereas inhibition was not observed with ethylmaleinimide due to the absence of reduced cysteine
in the enzyme. Polyclonal antibodies against the enzyme have been raised in rabbit, and
immunodiffusion suggests that the antigenic determinants of MGP are unique. The N-terminal
sequence of MGP (D-E-A-C-I-F-S-A-V-K-E-V-V-D-A) exhibited considerable similarity to the sequence
of other known plant peroxidases. Spectroscopic studies (absorbance, fluorescence, and circular
dichroism) reveal that MGP has secondary structural features with R/ type with approximately 20%
R-helicity

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มี peroxidase heme นวนิยาย MGP จากยางของผัก carnea ถั่ว fistulosa (มอร์นิ่งกลอรี)ครอบครัวของ Convolvulaceae ถูก purified การใช้แอมโมเนียมซัลเฟต homogeneityฝน anion exchange, hydrophobic โต้ตอบ และ chromatography filtration เจ เอนไซม์นี้glycosylated และมีมวลโมเลกุลของ 42.06 kDa (MALDI TOF) และเป็นจุด isoelectric ของ4.3.เอนไซม์มีผลตอบแทนสูง specificity พื้นผิวที่กว้าง และความมั่นคงสูงต่อค่า pH อุณหภูมิchaotrophs และอินทรีย์ ดับ coefficient (ε2801%) ของเอนไซม์ถูกประเมินเป็น20.56 และประกอบด้วย 13 ทริปโตเฟน 9 tyrosine และ 8 cysteine ตกขึ้นสะพาน disulfide 4มีผล significant ของ inhibitors S-S สะพาน (mercaptoethanol, L-cysteine กลูตาไธโอน), การกำหนดเป้าหมายเช่นเดียว กับ inhibitors heme (azide โซเดียมและ hydroxylamine) peroxidase กิจกรรม การกำหนดเป้าหมายในขณะที่การยับยั้งไม่ได้สังเกต ด้วย ethylmaleinimide เนื่องจากการขาดงานของ cysteine ลดลงในเอนไซม์นั้น แอนตี้ polyclonal กับเอนไซม์ได้รับการเลี้ยงในกระต่าย และimmunodiffusion แนะนำว่า ดีเทอร์มิแนนต์ antigenic ของ MGP ไม่ซ้ำกัน N-เทอร์มินัลลำดับของ MGP (D-E-A-C-I-F-S-A-V-K-E-V-V-D-A) จัดแสดงความคล้ายคลึงกันมากกับลำดับของ peroxidases รู้จักพืชอื่น ๆ การศึกษาด้าน (absorbance, fluorescence และวงค่อย ๆ dichroism) ว่า MGP มีคุณลักษณะโครงสร้างรองกับ R / พิมพ์ประมาณ 20%R helicity

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

heme นวนิยาย peroxidase MGP จากน้ำยางของ Ipomoea subsp carnea ไฟ stulosa (ผักบุ้ง)
เป็นของครอบครัว Convolvulaceae ถูกไฟ Puri เอ็ดจะเป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้แอมโมเนียมซัลเฟต
ตกตะกอนแลกเปลี่ยนไอออนปฏิสัมพันธ์ชอบน้ำและเจลไฟร ltration เอนไซม์
เป็น glycosylated และมีมวลโมเลกุล 42.06 กิโลดาลตัน (MALDI-TOF) และ isoelectric ชี้ค่า pH
4.3 เอนไซม์ที่มีผลตอบแทนสูง, พื้นผิวกว้าง speci เมือง fi, และมีความมั่นคงสูงที่มีต่อค่า pH, อุณหภูมิ
chaotrophs และตัวทำละลายอินทรีย์ การสูญเสีย COEF ไฟเพียงพอ (ε
280
1%) ของเอนไซม์เป็นที่คาดกันว่าเป็น
20.56 และประกอบด้วย 13 โพรไบโอ, 9 ซายน์, 8 และ cysteine ​​ตกค้างอดีต 4 disul Fi เดสะพาน.
นอกจากนี้มีนัยสำคัญผลกระทบลาดเทของสารยับยั้งการกำหนดเป้าหมายสะพานเอสเอส (mercaptoethanol, L-cysteine กลูตาไธโอน)
เช่นเดียวกับสารยับยั้งการกำหนดเป้าหมาย heme (โซเดียมเอไซด์และไฮดรอกซิ) กับกิจกรรม peroxidase,
ในขณะที่การยับยั้งไม่ได้สังเกตด้วย ethylmaleinimide เนื่องจากขาด cysteine ​​ลดลง
ในการทำงานของเอนไซม์ แอนติบอดีต่อต้านเอนไซม์ที่ได้รับการเลี้ยงดูมาในกระต่ายและ
Immunodiffusion แสดงให้เห็นว่าปัจจัยแอนติเจนของ MGP จะไม่ซ้ำกัน N-ขั้ว
ลำดับของ MGP (DEACIFSAVKEVVDA) แสดงความคล้ายคลึงกันมากในลำดับ
อื่น ๆ peroxidases พืชที่รู้จักกัน การศึกษาสเปกโทรสโก (ดูดกลืนแสงชั้น uorescence และวงกลม
dichroism) เผยให้เห็นว่ามีคุณสมบัติ MGP โครงสร้างทุติยภูมิด้วย R /? พิมพ์ด้วยประมาณ 20%
R-helicity

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นิยายนี่มี mgp จากน้ำยางของไอโพเมีย carnea subsp . จึง stulosa ( ผักบุ้ง )
เป็นของครอบครัววงศ์คือปุริมจึงใช้วิธีการแลกเปลี่ยนไอออนแอมโมเนียม ซัลเฟต
ตกตะกอน ปฏิกิริยาไฮโดรโฟบิกและเจลจึง ltration โครมาโทกราฟี เอนไซม์
เป็นอื่น และมีมวลโมเลกุลของ 42.06 kDa ( maldi-tof ) และไอโซอิเล็กทริกจุดด่าง
4.3 .เอนไซม์ที่มีผลผลิตสูง กว้าง หลากหลายประเภทจึงเมืองและความมั่นคงสูงต่อค่า pH , อุณหภูมิ ,
chaotrophs และตัวทำละลายอินทรีย์ การสูญพันธุ์ coef จึง cient ( 280 ε

1 % ) ของเอนไซม์ประมาณเป็น
20.56 และมันประกอบด้วยทริปโตเฟนและไทโรซีน 13 , 9 , 8 และ 4 disul จึงสร้างกรดอะมิโน เดอ สะพาน
มี signi จึงไม่สามารถยับยั้งผลของเป้าหมาย ( mercaptoethanol s-s สะพาน ,L-Cysteine , glutathione ) ,
ตลอดจนการกำหนดเป้าหมายฮีม ( ไซด์ และโซเดียมไฮดรอกชีลามีน ) ในกิจกรรมทั้งในขณะที่การยับยั้งไม่สังเกตด้วย
ethylmaleinimide เนื่องจากขาดกรดอะมิโน
ลดลงในเอนไซม์ แอนติบอดีโพลีกับเอนไซม์ที่ได้รับการยกในกระต่ายและ
immunodiffusion ชี้ให้เห็นว่าปัจจัยของแอนติเจนของ mgp ที่เป็นเอกลักษณ์ลำดับของกรดอะมิโน
mgp ( d-e-a-c-i-f-s-a-v-k-e-v-v-d-a ) มีความเหมือนมากในลำดับต้นๆ ที่รู้จัก
ของเพอร์ กซิเดส . การศึกษา ( flสเปกโทรสโกปีการดูดกลืน uorescence และกลม
dichroism ) เปิดเผยว่า ได้มีโครงสร้างทุติยภูมิ mgp R /  ประเภทที่มีประมาณ 20 %
r-helicity