High-performance liquid chromatography (HPLC; formerly referred to as high-pressure liquid chromatography), is a technique in analytic chemistry used to separate the components in a mixture, to identify each component, and to quantify each component. It relies on pumps to pass a pressurized liquid solvent containing the sample mixture through a column filled with a solid adsorbent material. Each component in the sample interacts slightly differently with the adsorbent material, causing different flow rates for the different components and leading to the separation of the components as they flow out the column.
HPLC has been used for medical (e.g. detecting vitamin D levels in blood serum), legal (e.g. detecting performance enhancement drugs in urine), research (e.g. separating the components of a complex biological sample, or of similar synthetic chemicals from each other), and manufacturing (e.g. during the production process of pharmaceutical and biological products) purposes.[1]
Chromatography can be described as a mass transfer process involving adsorption. HPLC relies on pumps to pass a pressurized liquid and a sample mixture through a column filled with a sorbent, leading to the separation of the sample components. The active component of the column, the sorbent, is typically a granular material made of solid particles (e.g. silica, polymers, etc.), 2–50 micrometers in size. The components of the sample mixture are separated from each other due to their different degrees of interaction with the sorbent particles. The pressurized liquid is typically a mixture of solvents (e.g. water, acetonitrile and/or methanol) and is referred to as a "mobile phase". Its composition and temperature play a major role in the separation process by influencing the interactions taking place between sample components and sorbent. These interactions are physical in nature, such as hydrophobic (dispersive), dipole–dipole and ionic, most often a combination thereof.
HPLC is distinguished from traditional ("low pressure") liquid chromatography because operational pressures are significantly higher (50–350 bar), while ordinary liquid chromatography typically relies on the force of gravity to pass the mobile phase through the column. Due to the small sample amount separated in analytical HPLC, typical column dimensions are 2.1–4.6 mm diameter, and 30–250 mm length. Also HPLC columns are made with smaller sorbent particles (2–50 micrometer in average particle size). This gives HPLC superior resolving power when separating mixtures, which is why it is a popular chromatographic technique.
The schematic of an HPLC instrument typically includes a sampler, pumps, and a detector. The sampler brings the sample mixture into the mobile phase stream which carries it into the column. The pumps deliver the desired flow and composition of the mobile phase through the column. The detector generates a signal proportional to the amount of sample component emerging from the column, hence allowing for quantitative analysis of the sample components. A digital microprocessor and user software control the HPLC instrument and provide data analysis. Some models of mechanical pumps in a HPLC instrument can mix multiple solvents together in ratios changing in time, generating a composition gradient in the mobile phase. Various detectors are in common use, such as UV/Vis, photodiode array (PDA) or based on mass spectrometry. Most HPLC instruments also have a column oven that allows for adjusting the temperature the separation is performed at
Gas chromatography is also similar to fractional distillation, since both processes separate the components of a mixture primarily based on boiling point (or vapor pressure) differences. However, fractional distillation is typically used to separate components of a mixture on a large scale, whereas GC can be used on a much smaller scale (i.e. microscale).[1]
Gas chromatography is also sometimes known as vapor-phase chromatography (VPC), or gas–liquid partition chromatography (GLPC). These alternative names, as well as their respective abbreviations, are frequently used in scientific literature. Strictly speaking, GLPC is the most correct terminology, and is thus preferred by many authors.
ใช้บ่อยในวรรณกรรมทางวิทยาศาสตร์ อย่างเคร่งครัดพูด glpc เป็นศัพท์ที่ถูกต้องมากที่สุดและดังนั้นจึงต้องการ โดยมากผู้เขียนวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ; เดิมเรียกว่าแรงดันของเหลว chromatography ) เป็นเทคนิคในการวิเคราะห์เคมีที่ใช้ส่วนประกอบที่แยกจากกันในการผสมเพื่อศึกษาแต่ละองค์ประกอบและปริมาณของแต่ละองค์ประกอบ มันอาศัยปั๊มผ่านของเหลวที่มีแรงดันตัวทำละลายที่มีตัวอย่างผสมผ่านคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยวัสดุดูดซับที่เป็นของแข็งแต่ละองค์ประกอบในตัวอย่างติดต่อที่แตกต่างเล็กน้อยกับวัสดุดูดซับ ทำให้อัตราการไหลที่แตกต่างกันสำหรับองค์ประกอบที่แตกต่างกันและนำไปสู่การแยกองค์ประกอบของพวกเขา ไหลเข้าคอลัมน์
HPLC ได้ถูกใช้สำหรับการแพทย์ เช่น การตรวจหาระดับวิตามิน D ในเลือด ) , กฎหมาย ( เช่นการเพิ่มประสิทธิภาพการตรวจหายาเสพติดในปัสสาวะ ) , วิจัย ( เช่นการแยกองค์ประกอบของตัวอย่างที่ซับซ้อนทางชีวภาพ หรือสารเคมีสังเคราะห์ที่คล้ายกันจากแต่ละอื่น ๆ ) และการผลิต ( เช่นในการผลิตของผลิตภัณฑ์เภสัชกรรมชีวภาพและ ) วัตถุประสงค์ [ 1 ]
chromatography สามารถอธิบายเป็นขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับการถ่ายเทมวลการดูดซับโดยอาศัยแรงดันปั๊มผ่านของเหลวและตัวอย่างส่วนผสมผ่านคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยดูดซับ ทำให้เกิดการแยกของตัวอย่างส่วนประกอบ ใช้งานคอมโพเนนต์ของคอลัมน์ดูดซับ คือโดยปกติวัสดุที่ละเอียดของอนุภาคของแข็ง ( เช่น ซิลิกา , พอลิเมอร์ , ฯลฯ ) , ไมโครมิเตอร์ 2 – 50 ขนาดส่วนประกอบของตัวอย่างที่ผสมจะถูกแยกออกจากแต่ละอื่น ๆเนื่องจาก องศาที่แตกต่างกันของพวกเขามีปฏิสัมพันธ์กับดูดซับอนุภาค ของเหลวที่มีแรงดันโดยทั่วไปจะมีส่วนผสมของตัวทำละลาย ( เช่นน้ำ , ไน และ / หรือ เมทานอล ) และเรียกว่าขั้นตอน " มือถือ " .ขององค์ประกอบและอุณหภูมิมีบทบาทสำคัญในกระบวนการแยกโดยการปฏิสัมพันธ์ที่เกิดขึ้นระหว่างชิ้นส่วนตัวอย่างและดูดซับ . การโต้ตอบเหล่านี้ทางกายภาพ ในธรรมชาติ เช่น ไฮโดรโฟบิก ( กระจาย ) , ไดโพลไดโพล และ ไอออน ซึ่งส่วนใหญ่มักจะรวมกัน
"โดยจะแตกต่างจากแบบดั้งเดิม ( " ความดันต่ำ " ) ของเหลว chromatography เพราะแรงกดดันการดำเนินงานจะสูงกว่า ( 50 - 350 บาร์ ) ในขณะที่ของเหลว chromatography สามัญโดยทั่วไปจะอาศัยแรงโน้มถ่วงที่จะผ่านเฟสเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ เนื่องจากการแยกวิเคราะห์ HPLC จำนวนตัวอย่างเล็กขนาด 4.6 มม. 2.1 –คอลัมน์ทั่วไปมีเส้นผ่านศูนย์กลางและ 30 – 250 มม. ความยาว นอกจากนี้คอลัมน์ HPLC ที่ทําด้วยอนุภาคดูดซับขนาดเล็ก ( 2 ) ขนาดอนุภาคเฉลี่ย 50 ไมโครเมตร ) นี้จะช่วยให้เทคนิคที่เหนือกว่าอำนาจการตัดสินใจเมื่อแยกสารผสม ซึ่งทำให้มันเป็นที่นิยม และเทคนิค
schematic ของเครื่องมือ HPLC โดยทั่วไปรวมถึงตัวอย่าง , ปั๊มและเครื่องตรวจจับตัวอย่างนำตัวอย่างที่ผสมลงในเฟสเคลื่อนที่กระแสซึ่งประกอบลงในคอลัมน์ ปั๊มส่งที่ต้องการการไหลและองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ เครื่องตรวจจับสัญญาณจะเป็นสัดส่วนกับปริมาณตัวอย่างชิ้นส่วนที่เกิดขึ้นจากคอลัมน์จึงอนุญาตให้สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณของตัวอย่างส่วนประกอบแบบดิจิตอลไมโครโปรเซสเซอร์และผู้ใช้ซอฟต์แวร์ควบคุมโดยเครื่องมือวัดและการวิเคราะห์ข้อมูล บางรุ่นของเครื่องสูบเชิงกลใน HPLC อุปกรณ์สามารถผสมหลายตัวทําละลายกันในอัตราส่วนที่เปลี่ยนแปลงในเวลา การสร้างองค์ประกอบที่ไล่ระดับสีในเฟสเคลื่อนที่ เครื่องตรวจจับต่างๆ ในการใช้งานทั่วไป เช่น UV / VIS , โฟโตไดโอดเรย์ ( PDA ) หรือจากแมสสเปกโทรเมตรีส่วนใหญ่ก็มีคอลัมน์ HPLC ในเตาอบที่ช่วยให้การปรับอุณหภูมิแยกที่จะดำเนินการ
แก๊สโครมาโตกราฟียังคล้ายเศษการกลั่น เนื่องจากทั้งสองกระบวนการแยกองค์ประกอบของส่วนผสมหลักตามจุดเดือด ( หรือความดันไอน้ำที่แตกต่างกัน อย่างไรก็ตามการกลั่นลำดับส่วนโดยทั่วไปจะใช้เพื่อแยกองค์ประกอบของส่วนผสมในขนาดใหญ่ ในขณะที่ GC สามารถใช้ในขนาดเล็กมาก ( เช่น จุลภาค ) [ 1 ]
แก๊สโครมาโตกราฟีนอกจากนี้บางครั้งเรียกว่า ไอเฟสโครมาโทกราฟี ( VPC ) หรือก๊าซ - ของเหลวดูไม่จืด ( glpc ) ชื่อเหล่านี้เป็นคำย่อของตน ,ใช้บ่อยในวรรณกรรมทางวิทยาศาสตร์ อย่างเคร่งครัดพูด glpc เป็นศัพท์ที่ถูกต้องมากที่สุดและดังนั้นจึงต้องการ โดยมากผู้เขียน
การแปล กรุณารอสักครู่..
