In higher eukaryotes, gene expressi

In higher eukaryotes, gene expression is tissue-specific. Only certain cell types show moderate to high expression of a single gene or a group of genes. For example, the genes encoding globin proteins are expressed only in erythrocyte precursor cells, called reticulocytes. Using this information a target gene can be cloned by isolating the mRNA from a specific tissue. The specific DNA sequences are synthesized as copies from mRNAs of a particular cell type, and cloned into bacteriophage vectors. cDNA (complementary DNA) is produced from a fully transcribed mRNA which contains only the expressed genes of an organism. Clones of such DNA copies of mRNAs are called cDNA clones

A cDNA library is a combination of cloned cDNA fragments constituting some portion of the transcriptome of an organism which are inserted into a number of host cells. In eukaryotic cells, the mRNA is spliced before translation into protein. The DNA synthesized from the spliced mRNA doesn't have introns or non-coding regions of the gene. As a result, the protein under expression can be sequenced from the DNA which is the main advantage of cDNA cloning over genomic DNA cloning.











cDNA libraries. Let's consider the important aspects of constructing a cDNA library. A cDNA library simply contains sequences that are complementary to mRNAs. There are a number of different criteria that might be used to judge the quality of a cDNA library. A cDNA library is generally better if the size of the inserts (that is the amount of continuous cDNA in each clone) is large, ideally full-length. Ideally, no member of the library should include cDNAs derived from different mRNAs (this could be confusing). The library should be sufficiently large that it contains the cDNA of interest (or,more precisely, it should have enough independently derived clones that it contains the cDNA of interest). In general this means that it should be representative of all the mRNAs present in a particular tissue. Of course, choosing a tissue that has a relatively large amount of the mRNA of interest is an important experimental choice. In general it is easier to isolate a cDNA from a library where it is represented many times than from a library where it is present rarely. Some characteristics of a library depend on the vector chosen. Vectors are frequently chosen because they allow the screening of a large number of independent members of the library with experimental ease. Some vectors are designed to express only the cDNAs, while others have been modified to express not only the cDNA but also to express it in a context so the cDNA is made into a protein or a fusion protein. (Fusion proteins will be discussed below.) Before using a cDNA library it is wise to determine if it is a good quality library. More than one student has wasted months of time screening a library that had no inserts or inserts so short that they were of little value.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใน eukaryotes สูง ยีนคือเนื้อเยื่อเฉพาะ เฉพาะบางชนิดเซลล์แสดงปานกลางถึงสูงค่าของยีนเดียวหรือกลุ่มของยีน ตัวอย่าง ยีนที่เข้ารหัสโปรตีน globin จะแสดงเฉพาะในเซลล์ในสารตั้งต้นของเม็ดเลือดแดง เรียก reticulocytes ใช้ข้อมูลนี้ยีนเป้าหมายสามารถถูก cloned โดยแยก mRNA จากเนื้อเยื่อเฉพาะ ลำดับดีเอ็นเอเฉพาะสังเคราะห์เป็นสำเนาจาก mRNAs ชนิดเซลล์เฉพาะ และโคลนเป็นแบคทีเวกเตอร์ cDNA (เสริมดีเอ็นเอ) ผลิตจาก mRNA ทับอย่างสมบูรณ์ซึ่งประกอบด้วยเฉพาะยีนของสิ่งมีชีวิตการแสดง เรียกว่าโคลนดังกล่าวสำเนาดีเอ็นเอของ mRNAs cDNA โคลนห้องสมุด cDNA เป็นชุดของ cDNA โคลนบางส่วนของค่าบางส่วนของ transcriptome ของชีวิตที่มีแทรกหมายเลขของเซลล์โฮสต์ เซลล์ eukaryotic, spliced mRNA ก่อนแปลเป็นโปรตีน ดีเอ็นเอที่สังเคราะห์จาก spliced mRNA ไม่มี introns หรือภูมิภาคที่ไม่ใช่รหัสของยีน ดัง โปรตีนภายใต้นิพจน์สามารถจะเรียงลำดับจากดีเอ็นเอซึ่งเป็นข้อดีหลักของ cDNA โคลนผ่าน genomic DNA โคลนไลบรารีของ cDNA ลองพิจารณาลักษณะสำคัญของการสร้างห้องสมุด cDNA ห้องสมุด cDNA ก็ประกอบด้วยลำดับที่เสริมการ mRNAs มีจำนวนของเงื่อนไขต่าง ๆ ที่อาจใช้ในการตัดสินคุณภาพของห้องสมุด cDNA ห้องสมุด cDNA จะดีกว่าโดยทั่วไปถ้าขนาดของการแทรก (นั่นคือจำนวนของ cDNA อย่างต่อเนื่องในแต่ละโคลน) ขนาดใหญ่ ห้องจัด ดาว ไม่สมาชิกของห้องสมุดควรรวม cDNAs มา mRNAs ที่แตกต่างกัน (อาจสับสน) รีควรใหญ่พอที่ประกอบด้วย cDNA น่าสนใจ (หรือ ได้แม่นยำมาก ควรมีอิสระพอมาโคลนประกอบด้วย cDNA น่าสนใจ) โดยทั่วไป หมายความ ว่า ควรเป็นตัวแทนของ mRNAs อยู่ในเนื้อเยื่อเฉพาะ แน่นอน การเลือกเนื้อเยื่อที่มีขนาดค่อนข้างใหญ่ของ mRNA น่าสนใจ เป็นทางเลือกการทดลองสำคัญ โดยทั่วไป ได้ง่ายขึ้นจะแยก cDNA จากไลบรารีที่แทนหลายครั้งกว่าจากไลบรารีที่มีอยู่ไม่ค่อย ลักษณะบางอย่างของไลบรารีขึ้นอยู่กับเวกเตอร์ที่เลือก มักจะเลือกเวกเตอร์เนื่องจากพวกเขาอนุญาตให้คัดสมาชิกอิสระของไลบรารีเป็นจำนวนมาก ด้วยความง่ายในการทดลอง เวกเตอร์บางถูกออกแบบให้แสดงเฉพาะ cDNAs ในขณะที่คนอื่น ๆ มีการปรับเปลี่ยนแสดง cDNA ไม่เพียง แต่แสดงในบริบทเพื่อทำ cDNA มีโปรตีนหรือโปรตีนฟิวชั่น (อาหารโปรตีนจะถูกอธิบายไว้ด้านล่าง) ก่อนการใช้ห้องสมุด cDNA ได้ฉลาดที่จะระบุว่า เป็นรีคุณภาพดี นักเรียนมากกว่าหนึ่งได้เสียเดือนเวลาคัดกรองไลบรารีที่ไม่แทรกหรือแทรกสั้น ๆ เพื่อว่า พวกเขามีค่าน้อย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในยูคาริโอที่สูงขึ้นการแสดงออกของยีนเป็นเนื้อเยื่อเฉพาะ เฉพาะเซลล์ชนิดหนึ่งแสดงระดับปานกลางถึงสูงของการแสดงออกของยีนเดียวหรือกลุ่มของยีน ยกตัวอย่างเช่นยีนที่เข้ารหัสโปรตีนโกลบินจะแสดงเฉพาะในเซลล์เม็ดเลือดแดงสารตั้งต้นที่เรียกว่า reticulocytes การใช้ข้อมูลนี้ยีนเป้าหมายสามารถโคลนโดยการแยก mRNA จากเนื้อเยื่อที่เฉพาะเจาะจง ลำดับดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงมีการสังเคราะห์เป็นสำเนาจาก mRNAs ของเซลล์ชนิดโดยเฉพาะอย่างยิ่งและโคลนเข้าไปในเวกเตอร์ bacteriophage ยีน (DNA ประกอบ) ที่ผลิตจาก mRNA คัดลอกอย่างเต็มที่ซึ่งมีเพียงการแสดงออกของยีนของสิ่งมีชีวิต โคลนนิ่งสำเนาดีเอ็นเอดังกล่าวของ mRNAs จะเรียกว่าโคลนยีนห้องสมุดcDNA คือการรวมกันของชิ้นส่วน cDNA โคลน constituting ส่วนหนึ่งของยีนของสิ่งมีชีวิตบางอย่างที่จะแทรกเข้าไปในจำนวนของเซลล์โฮสต์ ในเซลล์ยูคาริโอ, mRNA จะแต่งงานก่อนที่จะแปลเป็นโปรตีน ดีเอ็นเอสังเคราะห์จาก mRNA แต่งงานไม่ได้มี introns หรือพื้นที่ที่ไม่ได้เข้ารหัสของยีน เป็นผลให้โปรตีนภายใต้การแสดงออกสามารถติดใจจากดีเอ็นเอซึ่งเป็นประโยชน์หลักของการโคลนยีนมากกว่าการโคลนดีเอ็นเอ. ห้องสมุด cDNA ลองพิจารณาที่สำคัญในการสร้างห้องสมุด cDNA ห้องสมุด cDNA ก็มีลำดับที่จะประกอบ mRNAs มีจำนวนของเกณฑ์ที่แตกต่างกันที่อาจจะใช้ในการตัดสินคุณภาพของห้องสมุด cDNA ที่มี ห้องสมุด cDNA โดยทั่วไปจะดีกว่าถ้าขนาดของแทรก (นั่นคือปริมาณของยีนอย่างต่อเนื่องในแต่ละโคลน) ที่มีขนาดใหญ่, ความนึกคิดยาวเต็มรูปแบบ จะเป็นการดีที่สมาชิกของห้องสมุดไม่ควรจะรวมถึง cDNAs มาจาก mRNAs ที่แตกต่างกัน (นี้อาจจะทำให้เกิดความสับสน) ห้องสมุดควรจะมีขนาดใหญ่พอที่จะมียีนที่น่าสนใจ (หรืออย่างแม่นยำมากขึ้นก็ควรมีเพียงพอโคลนมาเป็นอิสระที่จะมียีนที่น่าสนใจ) โดยทั่วไปนี้หมายความว่ามันควรจะเป็นตัวแทนของ mRNAs ทั้งหมดที่มีอยู่ในเนื้อเยื่อโดยเฉพาะอย่างยิ่ง แน่นอนว่าการเลือกเนื้อเยื่อที่มีเป็นจำนวนเงินที่ค่อนข้างใหญ่ของ mRNA ที่น่าสนใจเป็นทางเลือกที่สำคัญการทดลอง โดยทั่วไปมันเป็นเรื่องง่ายที่จะแยกยีนจากห้องสมุดซึ่งจะมีการแสดงหลายครั้งกว่าจากห้องสมุดที่มันไม่ค่อยเป็นปัจจุบัน ลักษณะบางส่วนของห้องสมุดขึ้นอยู่กับเวกเตอร์ได้รับการแต่งตั้ง เวกเตอร์ได้รับการแต่งตั้งบ่อยเพราะพวกเขาอนุญาตให้มีการตรวจคัดกรองของจำนวนมากของกรรมการอิสระของห้องสมุดที่มีความสะดวกในการทดลอง เวกเตอร์บางคนได้รับการออกแบบที่จะแสดงเพียง cDNAs ในขณะที่คนอื่น ๆ ได้รับการแก้ไขในการแสดงไม่เพียงยีน แต่ยังจะแสดงมันในบริบทดังนั้นยีนที่ทำเป็นโปรตีนหรือโปรตีนฟิวชั่น (โปรตีนฟิวชั่นจะมีการหารือด้านล่าง.) ก่อนที่จะใช้ห้องสมุด cDNA ก็ควรที่จะตรวจสอบว่ามันเป็นห้องสมุดที่มีคุณภาพดี มากกว่านักศึกษาคนหนึ่งที่สูญเสียไปได้เดือนของเวลาการตรวจคัดกรองห้องสมุดที่มีการแทรกหรือแทรกสั้นเพื่อให้พวกเขามีค่าเล็ก ๆ น้อย ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในยูแคริโอตสูงกว่า การแสดงออกของยีนก็ tissue-specific . เพียงบางชนิดของเซลล์ที่แสดงถึงการแสดงออกสูงของยีนเดี่ยวหรือกลุ่มของยีน ปานกลาง ตัวอย่างเช่นยีนเข้ารหัสโปรตีนโกลบินในเม็ดเลือดแดงเซลล์ตั้งต้นแสดงเท่านั้น เรียกว่าเรทิคูโลไซต์ . การใช้ข้อมูลนี้เป็นเป้าหมายของยีนสามารถโคลนโดยการแยกยีนจากเนื้อเยื่อที่เฉพาะเจาะจงลำดับของดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงจะสังเคราะห์เป็นชุดจากรหัสของชนิดของเซลล์ที่เฉพาะเจาะจงและโคลนเข้าไปในโรงพยาบาลเวกเตอร์ . ดีเอ็นเอ ( DNA ประกอบ ) ผลิตจากอย่างเต็มที่และ mRNA ซึ่งมีเพียงแสดงออกยีนของสิ่งมีชีวิต . เช่น สำเนาของรหัสดีเอ็นเอโคลนของ cDNA โคลน

เรียกว่าสายพันธุ์ของห้องสมุดคือการรวมกันของการโคลนยีน ชิ้นส่วนประกอบบางส่วนของทราน ริปโตมของสิ่งมีชีวิตซึ่งจะถูกแทรกลงในหมายเลขของเซลล์โฮสต์ ในยูคาริโอติกเซลล์ ของจะแต่งงานก่อนที่จะแปลเป็นโปรตีน ดีเอ็นเอสังเคราะห์ mRNA จากไมไม่มี introns หรือไม่ใช่รหัสภูมิภาคของยีน ผลโปรตีนภายใต้การแสดงออกสามารถลำดับจากดีเอ็นเอซึ่งเป็นประโยชน์หลักของการโคลนดีเอ็นเอ cDNA โคลนไป ห้องสมุด cDNA











. ลองพิจารณาที่สำคัญของการสร้าง cDNA ห้องสมุด ห้องสมุดก็มีสายพันธุ์ที่เป็นลำดับ ประกอบกับรหัส มีจำนวนของเกณฑ์ที่แตกต่างกันที่อาจถูกใช้เพื่อตัดสินคุณภาพของ cDNA ห้องสมุดสายพันธุ์ห้องสมุดทั่วไปดีขึ้น ถ้าขนาดของการแทรก ( คือปริมาณ cDNA อย่างต่อเนื่องในแต่ละโคลน ) มีขนาดใหญ่ ใจกลางเต็ม . ซึ่งไม่มีสมาชิกของห้องสมุดควรมี cdnas มาจากรหัสที่แตกต่างกัน ( อาจจะสับสน ) ห้องสมุดควรมีขนาดใหญ่เพียงพอที่ประกอบด้วยยีนที่น่าสนใจ ( หรือมากขึ้นแน่นอนมันน่าจะพอเป็นอิสระที่ได้มามันมีโคลน cDNA ของดอกเบี้ย ) โดยทั่วไปซึ่งหมายความว่ามันควรจะเป็นตัวแทนของรหัสทั้งหมดที่มีอยู่ในเนื้อเยื่อโดยเฉพาะ แน่นอน การเลือกเนื้อเยื่อมีปริมาณที่ค่อนข้างใหญ่ของ mRNA ที่น่าสนใจเป็นทางเลือกที่ทดลองที่สำคัญโดยทั่วไปมันเป็นเรื่องง่ายที่จะแยกสายพันธุ์จากห้องสมุดที่มันจะแสดงหลายครั้งกว่าจากห้องสมุดที่มีอยู่น้อย บางลักษณะของห้องสมุด ขึ้นอยู่กับแบบที่เลือก เวกเตอร์มักเลือกเพราะพวกเขาอนุญาตให้มีการคัดกรองของจํานวนกรรมการอิสระของห้องสมุดที่มีความสะดวกในการทดลอง บางเวกเตอร์ได้รับการออกแบบเพื่อแสดง cdnas เท่านั้น ,ในขณะที่คนอื่น ๆได้รับการแก้ไขเพื่อให้บริการไม่เพียง แต่วิธีแต่ยังแสดงในบริบทดังนั้น cDNA ถูกสร้างเป็นโปรตีน หรือ ผสมโปรตีน โปรตีน ( ฟิวชั่นจะกล่าวถึงด้านล่าง . ) ก่อนโดยใช้ cDNA ห้องสมุดมันเป็นฉลาดเพื่อตรวจสอบว่ามันเป็นห้องสมุดที่มีคุณภาพที่ดีนักเรียนมากกว่าหนึ่งได้สูญเสียเดือนเวลาคัดกรองห้องสมุดไม่มีแทรกหรือแทรกสั้นดังนั้นพวกเขามีค่าเล็ก ๆน้อย ๆ