Fluorescent in situ hybridizationOl

Fluorescent in situ hybridization
Oligonucleotide probes were purchased from MWG-Biotech
(Ebersberg, Germany). Fixed roots were dehydrated by serial
incubation for 3 min each in 50%, 80% and 100% thanol.
Dehydrated roots were placed on gelatine-coated slides
(0.075% gelatin-0.01% CrK(SO4)2). Fluorescence in situ hybridization
was performed at 46 C for 3 h, by adding 13 ml of hybridization solution (50 ng of each oligonucleotide probe,
0.9 M NaCl, 20 mM Tris–HCl pH 8.0, 0.01% SDS) to each root
sample, using the hybridization and washing stringencies
recommended for each probe or probe set (Table 2). Excess of
probes were removed by washing the roots in washing solution
(20 mM Tris–HCl pH 8.0; 0.1% SDS; 5 mM EDTA pH 8.0) for
20 min at 48 C, and salt excess was removed by dipping the
roots in water. DNA-staining with 4,6-diamidino-2-phenylindole
(DAPI) was applied after the FISH-procedure, using 20 ml
drop of a 1 mg/ml DAPI solution on each root sample, incubated
on ice in the dark for 10 min. Finally, the samples were
rinsed quickly with distilled water; air dried, mounted on
citifluor antifading reagent, and then was immediately
observed with a Zeiss Confocal Laser Scanning Microscope
(LSM 510 Axiovert 100 M).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใน situ hybridization เรืองแสงซื้อคลิปปากตะเข้ oligonucleotide จาก MWG-เทคโนโลยีชีวภาพ(Ebersberg เยอรมนี) รากถาวรถูกอบแห้งตามลำดับบ่มใน 3 นาทีแต่ละใน thanol 50%, 80% และ 100%รากแห้งถูกวางบนสไลด์ที่เคลือบ gelatine(0.075% gelatin-0.01% CrK(SO4)2) Fluorescence ในซิ hybridizationทำที่ C 46 สำหรับ 3 h โดยเพิ่ม 13 ml ของโซลูชัน hybridization (50 ng ของโพรบ oligonucleotide แต่ละNaCl 0.9 M, 20 มม.ตรี – HCl pH 8.0, 0.01% SDS) เพื่อแต่ละรากตัวอย่าง ใช้การ hybridization และซักผ้า stringenciesแนะนำสำหรับแต่ละโพรบหรือโพรบชุด (ตาราง 2) เกินกว่าคลิปปากตะเข้ออก โดยรากในโซลูชันการซักผ้าซักผ้า(ตรี – HCl 20 มม.ค่า pH 8.0; 0.1% SDS; 5 mM EDTA pH 8.0) สำหรับ20 นาทีที่ 48 ซี และเกลือเกินถูกเอาออก โดยการจิ้มรากในน้ำ -การย้อมสี DNA กับ 4,6-diamidino-2-phenylindoleใช้หลังจากปลากระบวนการ โดยใช้ปริมาณ 20 ml (DAPI)ปล่อยของโซลูชัน DAPI 1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรในแต่ละตัวอย่างราก incubatedบนน้ำแข็งในมืดสำหรับ 10 นาที สุดท้าย ตัวอย่างดีrinsed ด้วยน้ำกลั่น อย่างรวดเร็ว อากาศแห้ง ติดตั้งบนรีเอเจนต์ antifading citifluor และจากนั้น ได้ทันทีสังเกต ด้วย Zeiss Confocal เลเซอร์สแกนกล้องจุลทรรศน์(ทต้า 510 Axiovert 100 เมตร)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เรืองแสงในแหล่งกำเนิดการผสมพันธุ์
probes Oligonucleotide ที่ซื้อมาจาก MWG-ไบโอเทค
(Ebersberg, เยอรมนี) รากคงได้รับการอบแห้งโดยอนุกรม
บ่มเป็นเวลา 3 นาทีในแต่ละ 50%, 80% และ 100% thanol.
รากแห้งถูกวางไว้บนสไลด์เจลาตินเคลือบ
(0.075% เจลาติน 0.01% CRK (SO4) 2) เรืองแสงในแหล่งกำเนิดพันธุ์
ได้รับการดำเนินการที่ 46 องศาเซลเซียสนาน 3 ชั่วโมงโดยการเพิ่ม 13 มล. ของการแก้ปัญหาการผสมข้ามพันธุ์ (50 ศึกษาของหัว oligonucleotide แต่ละ
0.9 M NaCl, 20 mM Tris-HCl พีเอช 8.0, 0.01% SDS) ไปยังรากแต่ละ
ตัวอย่าง โดยใช้การผสมข้ามพันธุ์และซักผ้า stringencies
แนะนำสำหรับแต่ละสอบสวนหรือชุดสอบสวน (ตารางที่ 2) ส่วนเกินของ
ยานสำรวจที่ถูกถอดออกโดยการล้างรากในการแก้ปัญหาซักผ้า
(20 mM Tris-HCl ค่า pH 8.0; 0.1% SDS; 5 ค่า pH EDTA มิลลิ 8.0) สำหรับ
? 20 นาทีที่ 48 C และเกลือส่วนเกินจะถูกลบออกโดยการจุ่ม
รากในน้ำ . ดีเอ็นเอการย้อมสีที่มี 4,6-diamidino-2-phenylindole
(DAPI) ถูกนำมาใช้หลังจากปลาขั้นตอนโดยใช้ 20 มล.
ลดลง 1 mg / ml แก้ปัญหา DAPI ตัวอย่างรากแต่ละบ่ม
บนน้ำแข็งในความมืดเป็นเวลา 10 นาที . ในที่สุดตัวอย่างถูก
ล้างได้อย่างรวดเร็วด้วยน้ำกลั่น; อากาศแห้ง, ติดตั้งอยู่บน
citifluor antifading น้ำยาและจากนั้นได้รับทันที
ที่สังเกตกับ Zeiss Confocal เลเซอร์สแกนกล้องจุลทรรศน์
(LSM 510 Axiovert 100 M)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เรืองแสงใน situ hybridization
ซึ่งวิธีการซื้อมาจาก mwg เทคโนโลยีชีวภาพ
( ebersberg , เยอรมัน ) คงเป็นรากแห้งโดยอนุกรม
บ่มเป็นเวลา 3 นาทีในแต่ละ 50% , 80% และ 100% thanol .
แห้งรากถูกวางไว้บนภาพนิ่งเคลือบวุ้น
( 0.075 % gelatin-0.01 % เค ( ปา ) 2 ) เรืองแสงใน situ hybridization
แสดงที่ 46  C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงโดยการเพิ่ม 13 มิลลิลิตร สารละลายเบส ( 50 นาโนกรัม ซึ่งแต่ละเครื่อง
0.9 M NaCl , 20 มม. โดย–กรดไฮโดรคลอริก pH 8.0 , 0.01 % SDS ) แต่ละราก
ตัวอย่างโดยใช้ hybridization และล้าง stringencies
แนะนำสำหรับแต่ละชุดสอบสวน หรือตรวจสอบ ( ตารางที่ 2 ) ส่วนเกินของ
) ออกโดยการล้างรากในการแก้ปัญหา
( 20 มม. โดย–กรดไฮโดรคลอริก pH 8.0 ; 0.1 % t ; 5 mM EDTA pH 8.0 )
20 นาทีที่ 48  Cและ เกลือส่วนเกินออกโดยการจุ่ม
รากในน้ำ ดีเอ็นเอ ย้อมด้วย 4,6-diamidino-2-phenylindole
( dapi ) คือใช้หลังจากขั้นตอนที่ปลาใช้ 20 ml
หยด 1 มก. / มล. dapi โซลูชั่นในแต่ละรากตัวอย่างที่บ่ม
บนน้ำแข็งในที่มืดเป็นเวลา 10 นาที สุดท้าย จำนวน
ล้างได้อย่างรวดเร็วด้วยน้ำกลั่น เครื่องแห้ง ติด
citifluor antifading รีเอเจนต์และจากนั้นทันที
สังเกตกับ Zeiss ด้วยเลเซอร์กล้องจุลทรรศน์
( LSM 510 axiovert 100 เมตร )