solation of Full-Length Dlk-1 cDNA

solation of Full-Length Dlk-1 cDNA from Human. PCR primers were designed based on the gene sequences of human Dlk-1 (GenBank accession no. U15979). Sequences of the prepared primers were as follows: forward primer: 5′-cgc-gtc-cgc-aac-cag-aag-ccc-3′ and reverse primer: 5′-aag-ctt-gat-ctc-ctc-gtc-gcc-ggc-c-3′. To the reverse primer, HindIII restriction site was added. PCR was performed using these primers and cDNAs synthesized from total RNAs prepared from human liver at embryonic week 10 (TaKaRa). PCR product was cloned into PCRII vector (Invitrogen) (pCRII-hdlk-1). To construct the expression vector, Flag tag sequences were inserted into the HindIII/SalI site of pBluescript II SK(+) vector (Stratagene) (pBS-Flag). Then, an EcoRI/HindIII fragment was cleaved off from pCRII-hdlk-1 and inserted into the EcoRI/HindIII site of pBS-Flag vector (pBS-hdlk-1-Flag). An EcoRI/SalI fragment was cleaved off from pBS-hdlk-1-Flag and inserted into the EcoRI/XhoI site of pcDNA3.1 vector (Invitrogen) (pcDNA-hdlk-1-Flag).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

solation ของ cDNA Full-Length Dlk-1 จากมนุษย์ ไพรเมอร์ PCR ถูกออกแบบตามลำดับยีนของมนุษย์ Dlk-1 (GenBank ทะเบียนไม่ U15979) ลำดับของไพรเมอร์ที่เตรียมได้ดังนี้: ส่งรองพื้น: รองพื้น 5′-cgc-gtc-cgc-aac-cag-aag-ccc-3′ และย้อนกลับ: 5′-aag-ctt-gat-ctc-ctc-gtc-gcc-ggc-c-3′ การรองพื้นกลับ มีเพิ่มไซต์ HindIII จำกัด PCR ที่ดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์และ cDNAs ที่สังเคราะห์จาก RNAs รวมเตรียมจากตับมนุษย์ที่สัปดาห์ตัวอ่อน 10 (TaKaRa) เหล่านี้ ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโคลนเป็นเวกเตอร์ PCRII (Invitrogen) (pCRII-hdlk-1) สร้างเวกเตอร์นิพจน์ ธงป้ายลำดับถูกแทรกไว้ในเว็บไซต์ HindIII/สลี่ ของเวกเตอร์ II SK(+) pBluescript (Stratagene) (pBS-ธง) แล้ว ส่วน EcoRI/HindIII ถูกแหวกออกจาก pCRII-hdlk-1 และแทรกลงในเว็บไซต์ EcoRI/HindIII ของ pBS ธงเวกเตอร์ (pBS-hdlk-1-ธง) ส่วน EcoRI/สลี่ ที่แหวกออกจาก pBS-hdlk-1-ธงชาติ และแทรกลงในเว็บไซต์ EcoRI/XhoI ของ pcDNA3.1 เวกเตอร์ (Invitrogen) (pcDNA-hdlk-1-ธง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

solation เต็มความยาว DLK-1 จากยีนของมนุษย์ ไพรเมอร์พีซีอาร์ได้รับการออกแบบขึ้นอยู่กับลำดับยีนของมนุษย์ DLK-1 (ภาคยานุวัติ GenBank ไม่มี. U15979) ลำดับของไพรเมอร์ที่เตรียมไว้มีดังนี้ไพรเมอร์ไปข้างหน้า: 5'-CGC-GTC-CGC-AAC-CAG-AAG-CCC-3 'และไพรเมอร์กลับ: 5'-AAG-CTT-GAT-CTC-CTC-gtc- GCC-GGC-C-3 ' ไพรเมอร์ที่จะย้อนกลับ, เว็บไซต์ข้อ จำกัด HindIII ถูกเพิ่มเข้ามา PCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์เหล่านี้และ cDNAs สังเคราะห์จาก RNAs ทั้งหมดที่เตรียมจากตับของมนุษย์ตัวอ่อนในสัปดาห์ที่ 10 (Takara) ผลิตภัณฑ์ PCR เป็นโคลนเข้าไปใน PCRII เวกเตอร์ (Invitrogen) (pCRII-hdlk-1) เพื่อสร้างเวกเตอร์แสดงออกลำดับแท็กธงถูกใส่เข้าไปใน HindIII / เว็บไซต์สาลี่ของ pBluescript II SK (+) เวกเตอร์ (Stratagene) (พีบีเอส-ธง) จากนั้น EcoRI / HindIII ส่วนถูกตัดออกจาก pCRII-hdlk-1 และแทรกเข้าไปใน EcoRI เว็บไซต์ / HindIII เวกเตอร์พีบีเอส-ธง (พีบีเอส-hdlk-1-ธง) EcoRI / สาลี่ส่วนถูกตัดออกจากพีบีเอส-hdlk-1-ธงและแทรกเข้าไปในเว็บไซต์ EcoRI / XhoI ของ pcDNA3.1 เวกเตอร์ (Invitrogen) (pcDNA-hdlk-1-ธง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

solation เต็มความยาว dlk-1 cDNA จากมนุษย์ PCR ไพรเมอร์ที่ออกแบบตามลำดับยีนของมนุษย์ ( ขนาด dlk-1 สนธิไม่ u15979 ) ลำดับของดีเอ็นเอที่เตรียมไว้มีดังนี้ : ส่งต่อรองพื้น : 5 ’ - ’ cgc-gtc-cgc-aac-cag-aag-ccc-3 และกลับหลัก : 5 ’ - ’ aag-ctt-gat-ctc-ctc-gtc-gcc-ggc-c-3 . กลับไปก่อน , - จำกัดเว็บไซต์ที่ถูกเพิ่มปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสโดยใช้ไพรเมอร์ที่สังเคราะห์จากทั้งหมดเหล่านี้ และ cdnas RNAs เตรียมจากตับมนุษย์ตัวอ่อนในสัปดาห์ที่ 10 ( ทาการะ ) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโคลนเข้าไปในเวกเตอร์ pcrii ( Invitrogen ) ( pcrii-hdlk-1 ) สร้างนิพจน์เวกเตอร์ , ป้ายธงลำดับถูกแทรกลงในเว็บไซต์ของสายพันธุ์ / สาลี่ ) SK ( 2 ) เวกเตอร์ ( stratagene ) ( PBS ธง ) จากนั้นเป็นเบสด้วย / - ถูกแหวกออกจาก pcrii-hdlk-1 แทรกเข้าไปด้วย / - เว็บไซต์ของ PBS ธงเวกเตอร์ ( pbs-hdlk-1-flag ) เป็นเบสด้วย / สาลี่ถูกแหวกออก จาก pbs-hdlk-1-flag แทรกเข้าไปด้วย / xhoi เว็บไซต์ของเวกเตอร์ pcdna3.1 ( Invitrogen ) ( pcdna-hdlk-1-flag )