2.3. Partial purification of bacter

2.3. Partial purification of bacteriocin produced by Lb. plantarum
ST71KM
Lb. plantarum ST71KSwas cultivated in one liter of MRS broth for
18 h at 30
C and the cell-free supernatant was obtained by centrifugation
of the culture suspension at 12,000g for 15 min at 4
C
(Sorvall Instruments, Du Pont, model RC5C, Newtown, USA). The
pH of the supernatant was corrected to 6.0, and heated at 80
C for
30 min for inactivation of extracellular proteases and hydrogen
peroxide. Bacteriocin was precipitated by addition of ammonium
sulfate to the cell-free supernatant to obtain 60% saturation and
stirred for 4 h at 4
C. After an additional centrifugation for 1 h at
12,000g at 4
C, the resulting pellet was re-suspended in 100 mL of
25 mM ammonium acetate buffer (pH 6.5), and loaded on an
activated SepPakC18 cartridge (Waters, Millipore, MA, USA), which
was washed with 20% and 40% isopropanol in 25 mM ammonium
acetate buffer (pH 6.5). The bacteriocin was eluted with 60% isopropanol
in 25 mM ammonium acetate buffer (pH 6.5). The active
fraction was dried under vacuum (Speed-Vac, Savant, France) and
the bacteriocin fraction was re-suspended in sterile distilled water
and filtered using 0.22 mm pore size filter units (Millipore, Carrigtwahill,
Co. Cork, Ireland). Antimicrobial activity against
L. monocytogenes 603 and L. monocytogenes 607 was determined as
previously described by Todorov (2008).
2.4. Estimation of molecular weight of bacteriocin ST71KS
The molecular weight of the partially purified bacteriocin produced
by Lb. plantarum ST71KM was determined by Tricine-SDSPAGE
as described by Schägger and Von Jagow (1987). The acrylamide
gels that were loaded in duplicate with the samples were
then divided in two parts; one half was fixed and stained with
Coomassie Blue R250, whereas the other half was over-laid with
BHI agar containing L. monocytogenes 603 or L. monocytogenes 607
(ca. 106 CFU/mL) and incubated at 37
C for 24 h (Powell et al.,
2007).
2.5. Mode of action of bacteriocin produced by Lb. plantarum
ST71KS
2.5.1. Growth of Lb. plantarum ST71KS and production of
bacteriocin
Lb. plantarum was cultivated (2%, v/v) in glass flasks containing
150 mL of MRS broth for up to 24 h at 30
C and 37
C. The growth of
the microorganismwas monitored measuring the optical density at
600 nm (UV/Visible Spectrophotometer, Ultrospec 2000, Pharmacia
Biotech, Cambridge, UK) and assessment of the pH of the bacterial
suspension (pHmeter Láctea, LCP-210, São Paulo, SP, Brazil) at onehour
time-intervals. The bacteriocin production was evaluated at
a two-hour basis and the activity against L. monocytogenes 603 and
L. monocytogenes 607 and expressed as Arbitrary Units per milliliter
(AU/mL), according to Todorov (2008).
2.5.2. Survival of target microorganisms
Two glass flasks containing 50 mL of BHI broth were inoculated
with 2%

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. บางส่วนทำให้บริสุทธิ์ของคเทผลิต โดยปอนด์บาซิลลัสST71KMบาซิลลัสปอนด์ ST71KSwas ปลูกในหนึ่งลิตรของน้ำซุป MRS สำหรับ18 h 30 C และ supernatant ฟรีเซลล์ได้รับ โดยการหมุนเหวี่ยงของวัฒนธรรมกันกระเทือนที่ 12,000g 15 นาทีที่ 4 C(เครื่องมือ Sorvall, Du Pont รุ่น RC5C, Newtown สหรัฐอเมริกา) การค่า pH ของ supernatant ที่แก้ไข 6.0 และความร้อนที่ 80 C สำหรับ30 นาทีสำหรับยกเลิกการเรียกของสารโปรตีเอสและไฮโดรเจนไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ คเทถูกตกตะกอน ด้วยการเพิ่มของแอมโมเนียซัลเฟตเพื่อ supernatant ฟรีเซลล์รับความเข้ม 60% และกวนสำหรับ 4 h ที่ 4 c หลังจากการหมุนเหวี่ยงเพิ่มเติมสำหรับ h 1 ที่จี 12,000 ที่ 4 C เม็ดผลถูกเลื่อนออกไปอีกใน 100 มิลลิลิตรของอะซิเตแอมโมเนีย 25 มม.บัฟเฟอร์ (pH 6.5), และการโหลดในการใช้งานตลับหมึก SepPakC18 (น้ำ มิลลิพอร์ MA, USA), ซึ่งถูกล้าง ด้วย isopropanol 20% และ 40% ในแอมโมเนีย 25 มม.อะซิเตบัฟเฟอร์ (pH 6.5) แบถูก eluted กับ isopropanol 60%ใน 25 มม.แอมโมเนียอะซิเตบัฟเฟอร์ (pH 6.5) ใช้งานอยู่เศษส่วนคือแห้งภายใต้สุญญากาศ (Vac ความเร็ว เมธี ฝรั่งเศส) และเศษส่วนคเทถูกระงับอีกครั้งในน้ำกลั่นที่ปลอดเชื้อและกรองโดยใช้ 0.22 มม.รูขุมขนขนาดหน่วยกรอง (มิลลิพอร์ Carrigtwahillบริษัทคอร์ก ไอร์แลนด์) กิจกรรมต้านจุลชีพกับสมอง L. 603 และ L. สมอง 607 กำหนดเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ โดย Todorov (2008)2.4. การประมาณค่าของน้ำหนักโมเลกุลของแบ ST71KSน้ำหนักโมเลกุลของคเทบริสุทธิ์บางส่วนที่ผลิตโดยปอนด์บาซิลลัส ST71KM ถูกกำหนด โดย Tricine-SDSPAGEตามที่อธิบายไว้ โดย Schägger และ Von Jagow (1987) อะคริลาไมด์เจลที่ถูกโหลดในซ้ำกับกลุ่มตัวอย่างได้จากนั้น แบ่งออกเป็นสองส่วน ครึ่งหนึ่งคงที่ และย้อมด้วยCoomassie Blue R250 ในขณะที่อีกครึ่งหนึ่งถูกวางทับด้วยวุ้น BHI ที่ประกอบด้วยสมอง L. 603 หรือสมอง L. 607(ca. 106 CFU/mL) และรับการกกที่ 37 C ใน 24 ชม (พาวเวลล์ et al.,2007)2.5. โหมดของการดำเนินการของแบผลิต โดยปอนด์บาซิลลัสST71KS2.5.1 การเติบโตของบาซิลลัสปอนด์ ST71KS และการผลิตแบบาซิลลัสปอนด์ถูกปลูก (2%, v/v) ในขวดแก้วที่ประกอบด้วยนางซุปสำหรับนานถึง 24 ชม.ที่ 30 C ถึง 37 c 150 มล. การเติบโตของmicroorganismwas การตรวจสอบการวัดความหนาแน่นของแสงที่600 nm (UV เห็นสเปค Ultrospec 2000 ฟาร์เทคโนโลยีชีวภาพ เคมบริดจ์ สหราชอาณาจักร) และการประเมินค่า ph ที่แบคทีเรียระบบกันสะเทือน (Láctea, pHmeter LCP-210, SP เซาเปาโล บราซิล) ที่ onehourช่วงเวลานี้ รับการประเมินการผลิตแบที่พื้นฐาน 2 ชั่วโมงและกิจกรรมกับสมอง L. 603 และสมอง L. 607 และแสดงเป็นหน่วยกำหนดต่อมิลลิเมตร(AU/mL), ตาม Todorov (2008)2.5.2 การอยู่รอดของจุลินทรีย์เป้าหมายสองแก้วขวดบรรจุ 50 มิลลิลิตรของน้ำซุป BHI ถูก inoculatedกับ 2%

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การทำให้บริสุทธิ์บางส่วนและโปรตีนที่ผลิตโดยปอนด์ plantarum
ST71KM
ปอนด์ plantarum ST71KSwas ปลูกในหนึ่งลิตรของน้ำซุป MRS สำหรับ
18 ชั่วโมงวันที่ 30 องศาเซลเซียสและสารละลายปราศจากเซลล์ที่ได้รับจากการหมุนเหวี่ยง
ของการระงับวัฒนธรรมที่ 12,000g 15 นาทีที่ 4? C
(Sorvall? เครื่องดนตรี, Du Pont, RC5C รุ่น , Newtown, สหรัฐอเมริกา)
ค่า pH ของสารละลายได้รับการแก้ไข 6.0 และความร้อนที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียสเป็น
เวลา 30 นาทีสำหรับการใช้งานของโปรตีเอสและสารไฮโดรเจน
เปอร์ออกไซด์ แบคทีเรียได้รับการตกตะกอนโดยการเติมแอมโมเนียม
ซัลเฟตกับสารละลายปราศจากเซลล์ที่จะได้รับความอิ่มตัว 60% และ
ขยับเป็นเวลา 4 ชั่วโมงที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากการหมุนเหวี่ยงเพิ่มเติมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่
12,000g ที่ 4? C, เม็ดส่งผลให้เป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ใน 100 มล
25 มมบัฟเฟอร์แอมโมเนียมอะซิเตท (pH 6.5) และโหลดบน
ตลับ SepPakC18 เปิดใช้งาน (น่านน้ำอร์ค, MA, สหรัฐอเมริกา) ซึ่ง
ถูกล้างด้วย 20% และ 40% ใน isopropanol 25 มมแอมโมเนียม
บัฟเฟอร์อะซิเตท (pH 6.5) bacteriocin ถูกชะด้วย 60% isopropanol
ใน 25 มมบัฟเฟอร์แอมโมเนียมอะซิเตท (pH 6.5) ที่ใช้งาน
ส่วนแห้งภายใต้สูญญากาศ (Speed-Vac, เมธี, ฝรั่งเศส) และ
ส่วน bacteriocin เป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ
และกรองโดยใช้ 0.22 มิลลิเมตรหน่วยขนาดรูขุมขนตัวกรอง (ค Carrigtwahill,
Co. Cork, ไอร์แลนด์) ฤทธิ์ยับยั้งการเจริญ
ลิตร monocytogenes 603 ลิตรและ 607 monocytogenes ถูกกำหนดเป็น
อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Todorov (2008).
2.4 การประมาณค่าน้ำหนักโมเลกุลของ bacteriocin ST71KS
น้ำหนักโมเลกุลของ bacteriocin บริสุทธิ์บางส่วนที่ผลิต
โดยปอนด์ plantarum ST71KM ถูกกำหนดโดย Tricine-SDSPAGE
ตามที่อธิบายSchäggerฟอน Jagow (1987) ริลาไมด์
เจลที่ถูกโหลดในที่ซ้ำกันกับกลุ่มตัวอย่างถูก
แบ่งออกเป็นสองส่วน; ครึ่งหนึ่งได้รับการแก้ไขและการย้อมด้วยสี
Coomassie สีฟ้า R250 ในขณะที่อีกครึ่งหนึ่งถูกกว่าวางกับ
BHI วุ้นที่มี L. monocytogenes 603 หรือ 607 ลิตร monocytogenes
(แคลิฟอร์เนีย 106 CFU / มิลลิลิตร) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ( พาวเวล et al.,
2007).
2.5 โหมดของการกระทำของ bacteriocin ที่ผลิตโดยปอนด์ plantarum
ST71KS
2.5.1 การเจริญเติบโตของปอนด์ plantarum ST71KS และการผลิตของ
bacteriocin
ปอนด์ plantarum ได้รับการปลูกฝัง (2% v / v) ในขวดแก้วที่มี
150 มล MRS น้ำซุปนานถึง 24 ชั่วโมงวันที่ 30 องศาเซลเซียสและ 37 องศาเซลเซียส การเจริญเติบโตของ
microorganismwas การตรวจติดตามการวัดความหนาแน่นของแสงที่
600 นาโนเมตร (UV / Spectrophotometer มองเห็น Ultrospec 2000 Pharmacia
ไบโอเทค, เคมบริดจ์, สหราชอาณาจักร) และการประเมินค่า pH ของแบคทีเรีย
ระงับ (pHmeter lactea, LCP-210, เซาเปาโล, SP บราซิล) ที่ onehour
เวลาช่วงเวลา การผลิตแบคที่ถูกประเมิน
เป็นประจำทุกสองชั่วโมงและฤทธิ์ต้านลิตร monocytogenes 603 และ
แอล monocytogenes 607 และแสดงเป็นหน่วยตามอำเภอใจต่อมิลลิลิตร
(ออสเตรเลีย / มิลลิลิตร) ตาม Todorov (2008).
2.5.2 การอยู่รอดของเชื้อจุลินทรีย์เป้าหมาย
สองขวดแก้วที่มี 50 มล BHI น้ำซุปถูกเชื้อ
กับ 2%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การทำให้บริสุทธิ์บางส่วนของกรดต่อผลิตโดยปอนด์st71kmปอนด์ plantarum st71kswas ปลูกใน MRS broth 1 ลิตรสำหรับ18 ชั่วโมง 30 C และการสังเคราะห์สูงได้โดยการปั่นเหวี่ยงของวัฒนธรรมการระงับที่ 12000g สำหรับ 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส( sorvall เครื่องมือ ดูปองท์ รุ่น rc5c Newtown , USA ) ที่pH ของน่านคือแก้ไขที่ 6.0 และอุณหภูมิ 80 C สำหรับ30 นาที สำหรับใช้งานของทางภายนอก และไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ แบคทีริโอซินถูกตกตะกอนโดยเพิ่มแอมโมเนียการสังเคราะห์ซัลเฟตสูงเพื่อให้ได้ร้อยละ 60 และความอิ่มตัวกวน 4 H ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากนั้นอีก 3 ที่12000g ที่ 4 องศาเซลเซียส ส่งผลให้เม็ด เป็นอีกครั้งที่แขวนลอยใน 100 มิลลิลิตร25 มิลลิเมตร แอมโมเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 6.5 ) , และโหลดบนเปิดตลับ seppakc18 ( น้ำ มิลลิ , MA , USA ) ซึ่งซัก 20 % และไอโซโพรพานอล 40 % 25 มิลลิเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 6.5 ) การต่อคือ ตัวอย่างร้อยละ 60 ไอโซโพรพานอล25 มิลลิเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 6.5 ) ใช้งานส่วนอบแห้งภายใต้สูญญากาศ ( ความเร็ว VAC , เมธี , ฝรั่งเศส ) และการต่อหมันเศษส่วนเป็นอีกครั้งที่แขวนลอยในน้ำกรองใช้กรอง 0.22 มม. ขนาดรูพรุนในหน่วยมิลลิ carrigtwahill , ,บริษัทคอร์ก , ไอร์แลนด์ ฤทธิ์ต้านจุลชีพฉัน monocytogenes 603 และ monocytogenes 607 ตั้งใจเป็นก่อนหน้านี้ที่อธิบายโดย Todorov ( 2008 )2.4 . การประมาณน้ำหนักโมเลกุลของแบคเทอริโอซิน st71ksโมเลกุลของแบคเทอริโอซินที่บริสุทธิ์บางส่วนโดยปอนด์ plantarum st71km ถูกกำหนดโดย sdspage ไตรซีนตามที่อธิบายไว้โดยการศึกษาและ jagow SCH gger ฟอน ( 1987 ) ใช้อะคริลาไมด์เจลที่ถูกโหลดในซ้ำกับตัวอย่างแล้วแบ่งออกเป็นสองส่วน ครึ่งหนึ่งคือคงที่และเปื้อนr250 เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า ส่วนอีกครึ่งหนึ่งถูกวางด้วยวุ้น BHI ที่มี L monocytogenes 603 หรือ monocytogenes 607 L( ประมาณ 106 cfu / ml ) บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ( พาวเวลล์ et al . ,2007 )2.5 โหมดของการกระทำของกรดต่อผลิตโดยปอนด์st71ksดาวน์โหลด . การเจริญเติบโตของปอนด์ plantarum st71ks และการผลิตแบคทีริโอซินปอนด์ plantarum ถูกปลูก ( 2 % v / v ) ในขวดแก้วที่มี150 มิลลิลิตร MRS broth ได้ถึง 24 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสและ 37 องศาเซลเซียส การเจริญเติบโตของการ microorganismwas ตรวจสอบการวัดความหนาแน่นของแสงที่600 nm ( UV / มองเห็นความมุ่งมั่น ultrospec , 2000เทคโนโลยีชีวภาพ , เคมบริดจ์ , UK ) และการประเมิน ของแบคทีเรียช่วงล่าง ( L . kgm lcp-210 ctea , พีเ มิเตอร์ , เซาเปาลู , SP , ประเทศบราซิล ) ที่ onehourช่วงเวลา ต่อประเมินอยู่ที่การผลิตเป็นสองชั่วโมงที่พื้นฐานและกิจกรรมต่อลิตร monocytogenes 603 และฉัน monocytogenes และแสดงเป็นหนึ่งหน่วยต่อมิลลิลิตร( AU / ml ) ตาม โทโดรอฟ ( 2008 )งานวาง . การอยู่รอดของจุลินทรีย์เป้าหมายสองขวดแก้วบรรจุ 50 มล. ของน้ำซุป BHI ปลูกเชื้อกับ 2%