2. Materials and methods2.1. Plant

2. Materials and methods
2.1. Plant material

Baby primrose (P. forbesii) seeds were collected in the glasshouse of Beijing Forestry University. The seeds were sown in September and emerging plants were grown in the glasshouse under standard cultivation conditions. Flower buds appeared three months after sowing. About 200 plants were used as anther donor plants.

2.2. Determination of microspore developmental stages

The relationship between the flower bud morphology, bud size, and microspore developmental stage was determined firstly. Different sizes of flower buds were collected and measured the lengths. Anthers were then isolated from the buds and placed on glass slides, stained with Carbol fuchsin solution, mashed, and observed under a microscope (Olympus BX51, Japan). Cell size and position of the nucleus were recorded, and one hundred pollen grains per anther were counted in randomly chosen fields of vision using 400× magnification to determine viability. Microspores that were not stained by fuchsin were considered non-viable.

2.3. Preparation of induction media and induction of callus

Using MS as the basic culture medium (Murashige and Skoog, 1962), eight induction media labeled I1–I8 were used to determine optimal conditions supporting in vitro callus formation of P. forbesii ( Table 1). Among the eight different media, two levels of BAP (1.0 and 2.0 mg/l) and four levels of 2,4-D (0.5, 1.0, 1.5, 2.0 mg/l) were tested. All media were adjusted to pH 5.9–6.0 and contained 30 g/l sucrose and 6.5 g/l agar. Following 20 min of autoclaving at 121 °C and 1.1 kg/cm2 pressure, 30 ml aliquots of media were poured into 90-mm-diameter Petri dishes. The dishes were sealed with parafilm while cooling

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. พืชวัสดุเด็ก primrose (P. forbesii) เมล็ดถูกเก็บไว้ในเรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้ของมหาวิทยาลัยปักกิ่งวนศาสตร์ มีหว่านเมล็ดในเดือนกันยายน และเกิดพืชที่ปลูกในเรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐานการเพาะปลูก อาหารดอกไม้ปรากฏ สามเดือนหลังจาก sowing พืชประมาณ 200 ถูกใช้เป็นพืชผู้บริจาค anther2.2 การกำหนดขั้นตอนพัฒนา microsporeได้กำหนดความสัมพันธ์ระหว่างสัณฐานวิทยาของดอกตูมดอก ดอกตูมขนาด และ microspore พัฒนาระยะแรก ขนาดแตกต่างกันของอาหารดอกไม้ถูกรวบรวมไว้ และวัดความยาว เหมือนถูกแล้วแยกต่างหากจากอาหารวางอยู่บนกระจกสไลด์ สีกับโซลูชัน Carbol fuchsin ทำ และสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์ (BX51 โอลิมปัส ญี่ปุ่น) เซลล์ขนาดและตำแหน่งของนิวเคลียสถูกบันทึกไว้ และธัญพืชละอองเกสรร้อยต่อ anther นับได้ในวิสัยทัศน์ของเขตสุ่มท่านที่ใช้ขยาย× 400 เพื่อกำหนดชีวิต Microspores ที่ไม่มีสี โดย fuchsin ได้ถือไม่ได้2.3. เตรียมสื่อแม่เหล็กไฟฟ้าและการเหนี่ยวนำของแคลลัสใช้ MS เป็นสื่อวัฒนธรรมพื้นฐาน (Murashige และ Skoog, 1962), สื่อเหนี่ยวนำแปดชื่อ I1-I8 ถูกใช้เพื่อกำหนดเงื่อนไขที่เหมาะสมสนับสนุนการเพาะเลี้ยงแคลลัสการก่อตัวของ P. forbesii (ตารางที่ 1) ในสื่อต่าง ๆ แปด ระดับสองของ BAP (1.0 และ 2.0 mg/l) และระดับสี่ของ 2, 4-D (0.5, 1.0, 1.5, 2.0 mg/l) ทดสอบ สื่อทั้งหมดถูกปรับ pH 5.9-6.0 และประกอบด้วยซูโครส 30 g/l และ agar 6.5 g/l ต่อ 20 นาทีของ autoclaving ที่ 121 ° C และความดัน 1.1 kg/cm2, 30 ml aliquots สื่อถูก poured ในจาน Petri ขนาด 90 มม. อาหารถูกปิดผนึก ด้วย parafilm ขณะเย็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 โรงงานวัสดุเด็กสีเหลืองอ่อน (พี forbesii) เมล็ดถูกเก็บไว้ในเรือนกระจกของกรุงปักกิ่งป่าไม้มหาวิทยาลัย เมล็ดถูกหว่านในเดือนกันยายนและพืชที่เกิดขึ้นใหม่ได้รับการปลูกในเรือนกระจกภายใต้เงื่อนไขมาตรฐานการเพาะปลูก ดอกตูมปรากฏสามเดือนหลังหยอดเมล็ด ประมาณ 200 โรงงานถูกนำมาใช้เป็นอับละอองเกสรพืชบริจาค. 2.2 การกำหนดขั้นตอนการพัฒนา microspore ความสัมพันธ์ระหว่างลักษณะทางสัณฐานวิทยาตาดอกขนาดตาและ microspore ขั้นตอนการพัฒนาก็ตั้งใจแรก ขนาดที่แตกต่างกันของดอกตูมถูกเก็บรวบรวมและวัดความยาว อับเรณูถูกแยกออกจากตาและวางไว้บนสไลด์แก้วย้อมด้วยวิธีการแก้ปัญหา Carbol ฟุบดและสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์ (โอลิมปั BX51 ญี่ปุ่น) ขนาดของเซลล์และตำแหน่งของนิวเคลียสที่ถูกบันทึกไว้และหนึ่งร้อยละอองเรณูต่ออับละอองเกสรนับในสาขาที่สุ่มเลือกของวิสัยทัศน์โดยใช้ 400 ×ขยายเพื่อตรวจสอบความมีชีวิต microspores ที่ไม่ได้ย้อมสีโดยฟุได้รับการพิจารณาที่ไม่ทำงานได้. 2.3 การจัดทำสื่อการเหนี่ยวนำและการชักนำของแคลลัสใช้ MS เป็นสื่อวัฒนธรรมระดับล่าง (Murashige และ Skoog, 1962) แปดสื่อเหนี่ยวนำที่มีข้อความ I1-I8 ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบสภาวะที่เหมาะสมในการสนับสนุนการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อแคลลัสการก่อตัวของพี forbesii (ตารางที่ 1) ท่ามกลางแปดสื่อที่แตกต่างกันสองระดับของ BAP (1.0 และ 2.0 mg / l) และสี่ระดับของ 2,4-D (0.5, 1.0, 1.5, 2.0 mg / l) ได้รับการทดสอบ สื่อทั้งหมดได้รับการปรับค่าพีเอช 5.9-6.0 และมี 30 กรัม / ลิตรและซูโครส 6.5 g / l วุ้น ต่อไป 20 นาทีของการนึ่งฆ่าเชื้อที่ 121 องศาเซลเซียสและ 1.1 กก. / cm2 ความดัน 30 มล aliquots ของสื่อถูกเทลง 90 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางจานเลี้ยงเชื้อ อาหารที่ถูกปิดผนึกด้วยในขณะที่การระบายความร้อน parafilm

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุปลูก

น้องพริมโรส ( หน้า forbesii ) เมล็ดที่เก็บรวบรวมได้ในเรือนกระจกของมหาวิทยาลัยการป่าไม้กรุงปักกิ่ง เมล็ดที่ถูกหว่านในเดือนกันยายน และพืชที่ปลูกใหม่ การปลูกในเรือนกระจก ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน ดอกตูมโผล่มา 3 เดือน หลังหยอดเมล็ด เกี่ยวกับ 200 พืชใช้เป็นพืชผู้บริจาค ( .

. .การวิเคราะห์ละอองเกสร

ขั้นตอนพัฒนาการความสัมพันธ์ระหว่างขนาดของดอกตูม ดอกตูมลักษณะและพัฒนาการของละอองเกสรเวทีตั้งใจตอนแรก ขนาดของดอกตูมในการเก็บรวบรวมและวัดความยาว เรณู แล้วแยกจากตาและวางไว้บนกระจกสไลด์ย้อมด้วยสารละลายเท่า carbol บด ,การสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ( Olympus bx51 , ญี่ปุ่น ) เซลล์ขนาดและตำแหน่งของนิวเคลียสที่ถูกบันทึกไว้และหนึ่งร้อยต่ออับเรณูเป็นนับในการสุ่มเลือกเขตของวิสัยทัศน์ที่ใช้ 400 ×ขยายกำหนดเวลา . ข้าวที่ไม่ได้สีเท่าก็ถือว่าไม่ได้

2.3 การเตรียมสื่อและชักนำให้เกิดแคลลัส

ของใช้ MS เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐาน ( อาหารสูตร Murashige and Skoog , 1962 ) , สื่อการติดป้าย i0 –ถูกใช้ศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการเพาะเลี้ยง การสนับสนุนของ P . forbesii ( ตารางที่ 1 ) ระหว่างแปดสื่อที่แตกต่างกันสองระดับของ BAP ( 1.0 และ 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ) และ 2 , 4-D 4 ระดับ ( 0.5 , 1.0 , 1.5 , 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ) ได้ถูกทดสอบ สื่อทั้งหมดเป็นค่า pH 5.9 – 60 และบรรจุ 30 กรัม / ลิตรน้ำตาลซูโครสและ 6.5 กรัม / ลิตรวุ้น ต่อไปนี้ 20 นาทีของอัตราส่วนโฟกัสที่ 121 ° C และ 1.1 kg / cm2 แรงดัน 30 ml เฉยๆของสื่อที่ถูกเทลงไปใน 90 มม. เส้นผ่าศูนย์กลางจานเพาะเลี้ยง อาหารที่ถูกผนึกด้วยพาราฟิล์มในขณะที่เย็น