2. Materials and Methods2.1. Collec

2. Materials and Methods
2.1. Collection of Plant Material. The fresh leaves of R. nasu- tus were collected from Tirumala Hills, Tirupati, Chittoo
districts of Andhra Pradesh from July to October 2009. The plant specimen was verified to be the correct species by Dr. Madhava Setty, a botanist from the Department of Botany, S. V. University, Tirupati, India.
2.2. Preparation of the Extract. Fresh leaves of R. nasutus (500 g) were shade-dried and milled into fine powder using a mechanical grinder (TTK Prestige, Chennai, India). The powdered plant material was macerated and shaken in methanol using a bath shaker (Thermo Scientific, Mumbai, India) for 48 h. The extract was then filtered with filter paper (Whatman no. 1) and evaporated to dryness under a vacuum with reduced pressure using a rotary evaporator at 40∘C. The concentrate was then placed on aluminum foil before freeze drying. The residual extract was dissolved in 1 mL of sterile water before use.
2.3. Chemicals. Streptozotocin (STZ) was purchased from Sigma (USA). All other chemicals and reagents used in this study were of analytical grade. Glibenclamide (Sugatrol, Hyderabad, India) was purchased from a local drug store.
2.4. Experimental Design. Adult male Wistar rats weighing between 150 and 180 g were obtained from Sri Venkateswara Enterprises, Bangalore, India. They were individually housed in clean, sterile polypropylene cages under standard con- ditions (12 h light/dark cycles) with free access to standard chow (Hindustan Lever Ltd., Bangalore, India) and water ad libitum. Before the commencement of experiments, the animals were allowed to acclimatize to laboratory condi- tions for one week. The animal experiments were designed and performed in accordance with the ethical standards approved by the local Ministry of Social Justices and Empowerment, Government of India, and the Institu- tional Animal Ethics Committee Guidelines (Resolution no. 05/(i)/a/CPCSEA/IAEC/SVU/MDN-PVR/dt.13.09.2010).
2.5. Induction of Experimental Diabetes. Diabetes was induced by a single intraperitoneal injection of a freshly prepared STZ solution (Sigma, no. 242-646-8) (50mg/kg in citrate buffer 0.01M, pH 4.5) to overnight-fasted rats. Diabetes was confirmed by the presence of polydipsia and polyurea as well as by measuring the nonfasting plasma glucose levels 48h after STZ injection. Only animals that were confirmed to have blood glucose levels greater than 250 mg/dL were included in the study. All the animals were allowed free access to tap water and pellet chow in accordance with the guidelines of the Institute Animal Ethics committee.
The rats were divided into five groups of six animals each as follows.
2.6. Acute Toxicity Test. R. nasutus (50–250mg/kg body weight) was orally administered to rats for acute toxicity stud- ies. Each group was observed individually for signs of toxicity and behavioral changes such as hyperactivity, grooming, con- vulsions, sedation, or hypothermia. These observations began 1 h after dosing and were continued at least once daily for 14 days. The mortality rate was also calculated.
2.7. Biochemical Measurements. At the end of the study (30 days), after an overnight fasting, the animals were sacrificed by cervical dislocation following anesthesia using isoflurane. The liver tissue was excised and washed with ice-cold saline and was immediately immersed in liquid nitrogen and stored at −80∘C for further biochemical analysis. Then, the measure- ments of liver enzyme activity and biochemical assays were performed.
AST and ALT activities were assayed using the method of Reitman and Frankel [28]. The total carbohydrate content was estimated based on the method established by Carroll et al. [29]. Glycogen content was determined as described by Saifter et al. [30]. The protein content was estimated by the method of Lowry et al. [31] with slight modifications. All enzymatic assays in this study were performed using crude liver homogenate.
2.8. Statistical Analysis. The results were expressed as the mean ± SD (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. รวบรวมวัสดุโรงงาน ใบสดของอาร์นาซุ-tus ถูกเก็บรวบรวมจากเนินเขา Tirumala ติรูปัติ Chittooเขตของรัฐอานธรประเทศตั้งแต่เดือนกรกฎาคมถึง 2552 ตุลาคม ตัวอย่างพืชตรวจสอบเป็น สายพันธุ์ที่ถูกต้อง โดยดร. Madhava Setty, botanist จากภาควิชา พฤกษศาสตร์ S. V. มหาวิทยาลัย ติรูปัติ อินเดีย2.2 การเตรียมสารสกัด ใบสดของ R. พันชั่ง (500 กรัม) มีสีแห้ง และสารที่เป็นผงละเอียดโดยใช้เครื่องบดเครื่องจักรกล (TTK เพรสทีจ เจนไน อินเดีย) วัสดุผงพืช macerated และเขย่าในเมทานอลโดยใช้เชคเกอร์น้ำ (วิทยาศาสตร์เทอร์โม มุมไบ อินเดีย) สำหรับ 48 h สารสกัดได้กรอง ด้วยกระดาษกรอง (Whatman หมายเลข 1) แล้ว และหายไปกับความแห้งกร้านภายใต้สุญญากาศ มีความดันลดที่ใช้ evaporator โรตารี่ที่ 40∘C แล้วสมาธิถูกวางบนอลูมิเนียมฟอยล์ก่อนแช่แข็งแห้ง สารสกัดจากส่วนที่เหลือถูกละลายใน 1 mL ของน้ำผ่านการฆ่าเชื้อก่อนใช้2.3. เคมี Streptozotocin (STZ) ถูกซื้อจากซิก (สหรัฐอเมริกา) ทั้งหมดเคมีภัณฑ์อื่น ๆ และ reagents ที่ใช้ในการศึกษานี้ได้วิเคราะห์เกรด Glibenclamide (Sugatrol ไฮเดอราบัด อินเดีย) ที่ซื้อจากร้านขายยาในท้องถิ่น2.4 การทดลองออกแบบ ผู้ใหญ่ชาย Wistar หนูน้ำหนักระหว่าง 150 และ 180 g ได้รับจากวิสาหกิจครอบคลุมบนศรี บังกาลอร์ อินเดีย พวกเขาได้แต่ละแห่งทำความสะอาด ฆ่าเชื้อกรงที่ polypropylene ภายใต้มาตรฐานแอร์-ditions (12 h ไฟ/มืดรอบ) ถึงครัวมาตรฐาน (ฮินดัสแตนคาน จำกัด บังกาลอร์ อินเดีย) และ ad libitum น้ำฟรี ก่อนที่เริ่มดำเนินการทดลอง สัตว์ได้รับอนุญาตให้ acclimatize ไปเบาะ ๆ ว่าพวกเขาปฏิบัติ-tions สำหรับหนึ่งสัปดาห์ ทดลองสัตว์ถูกออกแบบ และทำตามมาตรฐานจริยธรรมที่ได้รับอนุมัติ โดยเฉพาะกระทรวงทางสังคม Justices และอำนาจ รัฐบาลอินเดีย และแนว ทางคณะกรรมการจริยธรรมของสัตว์ Institu tional (แก้ไขหมายเลข 05/(i)/a/CPCSEA/IAEC/SVU/MDN-PVR/dt.13.09.2010)2.5 การเหนี่ยวนำของโรคเบาหวานทดลอง โรคเบาหวานเกิดจากการฉีด intraperitoneal เดียวของโซลูชัน STZ ลิ้ม (ซิก หมายเลข 242-646-8) (50mg/kg ในซิเตรตบัฟเฟอร์ 0.01M, pH 4.5) ให้หนูอดแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์ โรคเบาหวานได้รับการยืนยัน โดยสถานะ polydipsia และ polyurea ริดที่ เป็นการวัดระดับน้ำตาลในพลาสมา nonfasting 48 h หลังจากฉีด STZ สัตว์ที่ถูกยืนยันเพื่อให้ระดับน้ำตาลในเลือดมากกว่า 250 mg/dL ได้รวมอยู่ในการศึกษา สัตว์ทุกตัวได้รับอนุญาตถึงน้ำประปาและรับประทานเม็ดตามคำแนะนำของคณะกรรมการจรรยาบรรณสถาบันสัตว์ฟรีหนูถูกแบ่งออกเป็น 5 กลุ่มหกสัตว์ดังนี้2.6 พันชั่ง Toxicity Test. R. เฉียบพลัน (50 – 250mg/kg น้ำหนักตัว) เป็นบริหารเนื้อหาเพื่อหนูสำหรับความเป็นพิษเฉียบพลันสตั๊ด-ies แต่ละกลุ่มถูกตรวจสอบแต่ละร่องรอยของความเป็นพิษและการเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมเช่นเข้าร่องเข้ารอย กรูมมิ่ง แอร์ vulsions เชลโล หรือ hypothermia ข้อสังเกตเหล่านี้เริ่ม 1 h หลังกระบวน และมีอย่างต่อเนื่องที่ทุก 14 วัน นอกจากนี้ยังมีคำนวณอัตราการตาย2.7. วัดชีวเคมี จบการศึกษา (30 วัน), หลังจากการถือศีลอดที่ค้างคืน สัตว์ถูกนำไปบูชายัญ ด้วยปากมดลูกเคลื่อนใช้ isoflurane ยาต่อไปนี้ เนื้อเยื่อตับถูก excised และล้าง ด้วยน้ำเกลือฉ่ำได้ทันทีแช่อยู่ในไนโตรเจนเหลว และเก็บไว้ที่ −80∘C สำหรับวิเคราะห์ชีวเคมี แล้ว วัด-ments assays ชีวเคมีและเอนไซม์ตับถูกทำAST และ ALT ได้ assayed โดยใช้วิธีของ Reitman Frankel [28] คาร์โบไฮเดรตรวมเนื้อหาถูกประเมินตามวิธีการก่อตั้งขึ้นโดยคาร์ et al. [29] เนื้อหายังถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้โดย Saifter et al. [30] โปรตีนถูกประเมิน โดยวิธีการของ Lowry et al. [31] กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย Assays เอนไซม์ในระบบทั้งหมดในการศึกษานี้ได้ดำเนินการโดยใช้ homogenate น้ำมันตับ2.8. สถิติวิเคราะห์ ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็นการเฉลี่ย± SD (