Enzymatic assayCharacterization of

Enzymatic assay
Characterization of protease
Protease activity was monitored in
triplicate by measuring the increase in cleavage
of short chain polypeptides using the method of
Bezerra et al. (2005) with slight modifications. The
total protease activity was determined using 1%
(w/v) azocasein, prepared in buffers at various pH
levels: 0.1 M glycine–HCl pH 2; 0.1 M citrate
buffer pH 3–5; 0.1 M phosphate buffer pH 6–8;
0.05 M carbonate buffer pH 9–10; 0.05 M
Na2HPO4 buffer pH 11; and 0.1 M KCl - NaOH
buffer pH 12–13. The substrate (500 μl) was
incubated with crude extract (20 μl) and buffer
solution (200 μl) at various pH levels for 60 min
at 30°C. Then, 500 μl of 20% (w/v) trichloroacetic
acid (TCA) was added to stop the reaction. After
15 min, centrifugation was carried out at 10,000 g
for 10 min. The supernatant (1.0 ml) was added to
1 M NaOH (1.5 ml) in a glass cuvette and the
absorbance was measured at 440 nm against a
blank similarly prepared, but without the crude
extract sample. The protease-specific activity was
expressed by the change in absorbance per min
per mg protein of the enzyme extract (ΔAbs min

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์เอนไซม์ในระบบคุณสมบัติของรติเอสกิจกรรมรติเอสถูกตรวจสอบในtriplicate โดยการวัดการเพิ่มขึ้นของปริของเปปไทด์สายสั้นที่ใช้วิธีการBezerra et al. (2005) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ที่รติเอสรวมกิจกรรมกำหนดโดยใช้ 1%(w/v) azocasein เตรียมในบัฟเฟอร์ที่ pH ต่าง ๆระดับ: pH glycine – HCl 0.1 M 2 0.1 ซิเตรต Mบัฟเฟอร์ pH 3-5 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6 – 80.05 M carbonate บัฟเฟอร์ pH 9-10 0.05 MNa2HPO4 บัฟเฟอร์ pH 11 0.1 M KCl - NaOH และบัฟเฟอร์ pH 12 – 13 มีพื้นผิว (500 μl)incubated กับสารสกัดน้ำมัน (20 μl) และบัฟเฟอร์โซลูชั่น (200 μl) ที่ระดับ pH ต่าง ๆ สำหรับ 60 นาทีที่ 30 องศาเซลเซียส แล้ว μl 500 ของ trichloroacetic 20% (w/v)มีเพิ่มกรด (TCA) เพื่อหยุดปฏิกิริยา หลังจาก15 นาที centrifugation ถูกดำเนินการที่ 10000 gสำหรับ 10 นาที มีเพิ่ม supernatant (มล 1.0)1 M NaOH (1.5 ml) ใน cuvette แก้วและมีวัด absorbance ที่ 440 nm เทียบกับการช่องว่างที่เตรียมไว้ในทำนองเดียวกัน แต่ ไม่ดิบสารสกัดตัวอย่าง กิจกรรมเฉพาะรติเอสได้แสดง โดยการเปลี่ยนแปลง absorbance ต่อนาทีต่อมิลลิกรัม โปรตีนของเอนไซม์สกัด (ΔAbs นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทดสอบเอนไซม์
โปรติเอสลักษณะของ
กิจกรรมโปรติเอสได้รับการตรวจสอบใน
เพิ่มขึ้นสามเท่าโดยการวัดการเพิ่มขึ้นของความแตกแยก
ของ polypeptides สายสั้นใช้วิธีการ
Bezerra et al, (2005) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
กิจกรรมโปรติเอสทั้งหมดถูกกำหนดโดยใช้ 1%
(w / v) azocasein เตรียมในบัฟเฟอร์ที่ pH ต่างๆ
ระดับพีเอช 0.1 M HCl glycine-2; 0.1 M ซิเตรท
บัฟเฟอร์ pH 3-5; 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 6-8;
0.05 M ค่า pH บัฟเฟอร์คาร์บอเนต 9-10; 0.05 M
Na2HPO4 ค่า pH บัฟเฟอร์ 11; 0.1 M KCl - NaOH
ค่า pH บัฟเฟอร์ 12-13 พื้นผิว (500 ไมโครลิตร) ได้รับการ
บ่มด้วยสารสกัดจากน้ำมันดิบ (20 ไมโครลิตร) และบัฟเฟอร์
การแก้ปัญหา (200 ไมโครลิตร) ในระดับค่า pH ต่างๆสำหรับ 60 นาที
ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส จากนั้น 500 ไมโครลิตร 20% (w / v) ไตรคลอโร
กรด (TCA) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหยุดปฏิกิริยา หลังจาก
15 นาทีการหมุนเหวี่ยงได้ดำเนินการที่ 10,000 กรัม
เป็นเวลา 10 นาที ใส (1.0 ml) ถูกบันทึกอยู่ใน
1 M NaOH (1.5 มล.) ใน cuvette แก้วและ
การดูดกลืนแสงวัดที่ 440 นาโนเมตรกับ
เตรียมว่างเปล่าเหมือนกัน แต่ไม่มีน้ำมันดิบ
ตัวอย่างสารสกัดจาก กิจกรรมโปรติเอสที่เฉพาะเจาะจงได้รับการ
แสดงโดยการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงต่อนาที
ต่อมิลลิกรัมโปรตีนของสารสกัดเอนไซม์ (ΔAbsนาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การใช้เอนไซม์โปรติเอส

กิจกรรมของเอนไซม์โปรติเอสถูกตรวจสอบใน
ทำสำเนาสามฉบับโดยวัดเพิ่มความแตกแยก
ของโปรตีนสายสั้นโดยใช้วิธี
bezerra et al . ( 2005 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
รวมกิจกรรมเอนไซม์โปรติเอสใช้วิเคราะห์ 1 %
( w / v ) azocasein เตรียมบัฟเฟอร์ pH ในระดับต่างๆ : 0.1 M glycine )
2 0.1 M HCl อ ; ซิ
บัฟเฟอร์ pH 3 – 5 ; 01 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6 – 8 ;
2 M คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 9 – 10 ; 0.05 M
na2hpo4 บัฟเฟอร์พีเอช 11 และ 0.1 M NaOH . -
บัฟเฟอร์ pH 12 – 13 พื้นผิว ( 500 μ L )
) ด้วยสารสกัด ( 20 μลิตร ) และสารละลายบัฟเฟอร์
( 200 μ l ) ที่ระดับ pH ต่างๆ 60 นาที
ที่ 30 องศา แล้ว 500 μ L 20 % ( w / v )
กรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหยุดปฏิกิริยา . หลังจาก
15 นาทีปั่นครั้งนี้ 10 , 000 G
เป็นเวลา 10 นาที และน่าน ( 1.0 มล. ) เพิ่ม

1 M NaOH ( 1.5 ml ) ในคิวเวตต์แก้วและ
ค่าวัดที่ 440 nm กับ
ว่างานเตรียมไว้ แต่ไม่ดิบ
สกัดตัวอย่าง โดยเฉพาะโปรกิจกรรมแสดงออกโดยการเปลี่ยนค่า

ต่อนาทีต่อมิลลิกรัมโปรตีนของเอนไซม์สกัด ( Δ ABS มิน