2.3.2. Phosphate solubilization ability
The actinobacterial isolates were screened for Ca3(PO4)2
solubilization by the method of Franco-Correaa et al. (2010).
The development of a clear zone around the colony on the
culture plates was taken as an index of phosphate solubiliza-
tion.
2.3.3. Production of indole compounds and siderophore
Indole-3-acetic acid (IAA) was determined in strains grown in
the dark in test tubes containing 3 ml of minimal salts medium
(glucose 0.5%, yeast extract 0.25%, K2HPO4 0.2%, MgSO4 0.05%,
CaCO3 0.05%, pH 7.2) supplemented with 0.5 mg ml1 of trypto-
phan. Log-phase cultures grown at 28 C were used. The IAA
concentration was determined using a calibration curve of pure
IAA as a standard following the linear regression analysis.
Siderophore production was detected by the standard Chrome
Azurol-S (CAS) assay (Schwyn and Neilands, 1987) in Petri dishes,
and the diameter of the clearing zone was measured.
2.3.4. Growth in N-free medium
The nitrogen-fixing activities were examined preliminarily by
observing the growth on N-free semi-solid JNFb medium
(Döbereiner et al., 1995). Plates were incubated at 28 C for 7 days
and then strains were re-inoculated in the JNFb N-free semi solid
medium for
five times.
2.4. Evaluation of selected isolates for their effects on seedling growth
of Jatropha curcas L.
Seeds of healthy J. curcas L. were surface sterilized by washing
coat-less seed kernels in 75% ethanol (v/v) for 1 min, then washed
with sterilized water for three times, and 1% HgCl2 (v/w) for 10 min
followed by 3–5 rinses in sterilized distilled water. Seeds were
then germinated in glasshouse containing Murashige and Skoog
(MS) medium in a tissue culture room with a temperature of 25 C
and 16/8 h light–dark cycles. Pure cultures of selected ACC
deaminase producing strains were grown in ISP 2 agar plates
for 8 days. Then the mycelia and spore were collected by washing
the plate with 3 ml sterilized distilled water. The spores were then
harvested by centrifugation at 7000
g for 10 min and resus-
pended in sterilized distilled water to make a
final concentration
of 1.0
108–2.0
108 CFU/ml. After 8 days of seed germination,
20 ml inoculants of each strain were inoculated onto the MS
medium surrounding the base of each seedling. Three seedlings
were grown in each glass bottle (Shu Niu 250 ml). Each treatment
contained three glass bottles of cultures. Control seedlings were
treated with 20 ml sterile distilled water only. Roots and shoots
from plants were harvested after 34 days and growth promoting
effects were evaluated by measuring the fresh weight, root length,
shoot length and leaf area.
2.3.2 ความสามารถในการละลายฟอสเฟตเชื้อ actinobacterial ถูกคัดกรอง Ca3 (PO4) 2 ละลายโดยวิธีการของฝรั่งเศส Correaa et al, (2010). การพัฒนาวงใสรอบโคโลนีบนจานวัฒนธรรมถูกนำมาเป็นดัชนีของ solubiliza- ฟอสเฟตการ. 2.3.3 การผลิตสารอินโดลและ siderophore Indole-3-กรดอะซิติก (IAA) ถูกกำหนดในสายพันธุ์ที่ปลูกในที่มืดในหลอดทดลองที่มี3 มล. ของเกลือน้อยที่สุดกลาง(กลูโคส 0.5% ยีสต์สกัด 0.25% K2HPO4 0.2% MgSO4 0.05% , CaCO3 0.05% pH 7.2) เสริมด้วย 0.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1 ของ trypto- phan วัฒนธรรมเข้าสู่ระบบเฟสเติบโตที่ 28 องศาเซลเซียสถูกนำมาใช้ IAA เข้มข้นถูกกำหนดโดยใช้เส้นโค้งการสอบเทียบบริสุทธิ์IAA เป็นมาตรฐานต่อไปนี้การวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น. ผลิต siderophore ถูกตรวจพบโดยมาตรฐาน Chrome Azurol-S (CAS) การทดสอบ (Schwyn และ Neilands, 1987) ในจานเลี้ยงเชื้อ, และขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง เขตสำนักหักบัญชีวัด. 2.3.4 การเจริญเติบโตในระดับปานกลาง N-ฟรีกิจกรรมตรึงไนโตรเจนมีการตรวจสอบในเบื้องต้นโดยการสังเกตการเจริญเติบโตของN-ฟรี JNFb กลางกึ่งของแข็ง(Döbereiner et al., 1995) แผ่นถูกบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 วันจากนั้นสายพันธุ์ที่ถูกเชื้ออีกครั้งในJNFb N-ฟรีกึ่งของแข็งสื่อกลางในห้าครั้ง. 2.4 การประเมินผลการเลือกแยกสำหรับผลกระทบต่อการเจริญเติบโตของสบู่ดำเมล็ดพันธุ์แห่งการมีสุขภาพดีเจcurcas L. ถูกพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยการล้างเมล็ดเสื้อน้อยในเอทานอล75% (v / v) 1 นาทีแล้วล้างด้วยการฆ่าเชื้อน้ำสามครั้งและ 1% HgCl2 (V / w) เป็นเวลา 10 นาทีตามด้วย3-5 ล้างในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ เมล็ดงอกแล้วในเรือนกระจกที่มีอาหารสูตร Murashige และ Skoog (MS) ขนาดกลางในห้องเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่มีอุณหภูมิ 25? เซลเซียสและ16/8 ซรอบแสงที่มืด วัฒนธรรมบริสุทธิ์ของแม็กเลือกdeaminase การผลิตสายพันธุ์ที่ปลูกใน ISP 2 แผ่นวุ้น8 วัน จากนั้นเส้นใยและสปอร์ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการล้างจานที่มี 3 มล. น้ำกลั่นฆ่าเชื้อ สปอร์จากนั้นก็เก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่7000? กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและ resus- pended ในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อที่จะทำให้ความเข้มข้นสุดท้าย1.0? 108-2.0? 108 CFU / ml หลังจาก 8 วันของการงอกของเมล็ด, 20 มล. จุลินทรีย์ของแต่ละสายพันธุ์ถูกเชื้อเข้าสู่ MS กลางโดยรอบฐานของต้นกล้าแต่ละ สามต้นกล้าปลูกในแต่ละขวดแก้ว (Shu Niu 250 มล.) การรักษาแต่ละคนมีสามขวดแก้วของวัฒนธรรม ต้นกล้าควบคุมได้รับการรักษาด้วย 20 มล. น้ำกลั่นปลอดเชื้อเท่านั้น รากและยอดจากพืชเก็บเกี่ยวหลังจาก 34 วันและส่งเสริมการเจริญเติบโตผลกระทบที่ได้รับการประเมินโดยการวัดน้ำหนักสดความยาวรากระยะเวลาในการถ่ายและพื้นที่ใบ
การแปล กรุณารอสักครู่..
