To work quicklyduring kinetics expe

To work quickly
during kinetics experiments and to avoid procedural artifacts, e.g.
caused by cell detachment, which could lead to damage or permeabilization
of the cells, it is advisable to grow cells in suspension.
Importantly, the ability of the adherent cells to grow in
suspension should be tested beforehand. The cells are seeded at
1–5  105 cells/ml per well the day before analysis in 24-well
suspension plates (Sarstedt). The next day cell death is induced.
Cell samples from suspension cultures are analyzed at regular
intervals on the flow cytometer. For this, 270 ll of cell suspension
from the 24-well suspension plate is transferred to a 5-ml polypropylene
round bottom tube, and 30 ll of cell impermeant
probe (e.g. PI) is added from a 10 solution (30 lM) prepared
from a 3-mM stock). The laser and detector need to be adapted
according to the excitation and emission properties of the probe.
The flow cytometer is set up for a dot plot with forward and sideward
scatters, both on a linear scale, to determine cell size and
granularity (Fig. 2). PI uptake is detected at 610 nm. To clearly
see the dead cells on the dot plot, PI-positive cells are gated,
e.g. in red. The region of analysis is gated (R1), and gating must
be large enough for measurement of both living and dying cell
populations.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การทำงานได้อย่างรวดเร็วใน ระหว่างการทดลองจลนพลศาสตร์ และ เพื่อหลีกเลี่ยงขั้นตอนสิ่งประดิษฐ์ เช่นเกิดจากเซลล์ปลด ซึ่งอาจนำไปสู่ความเสียหายหรือ permeabilizationเซลล์ มันจะแนะนำให้เซลล์หยุดการเจริญเติบโตสำคัญ ความสามารถของเซลล์นฤมลจะเติบโตในควรทดสอบระงับไว้ล่วงหน้า เซลล์มี seeded ที่1 – 5 105 เซลล์/มล.ต่อวันก่อนวิเคราะห์ใน 24 ดีดีแขวนแผ่น (Sarstedt) เกิดเซลล์ตายถัดไปของวันตัวอย่างเซลล์จากแขวนลักษณะที่ปกติช่วงบน cytometer กระแส สำหรับนี้ 270 จะระงับเซลล์จากการระงับดี 24 แผ่นถูกโอนย้ายไปโพรพิลีน 5 mlรอบท่อล่าง และ 30 ll ของเซลล์ impermeantโพรบ (เช่น PI) จะเพิ่มจากโซลูชันที่ 10 (30 lM) เตรียมไว้จาก 3 mM คลัง) เลเซอร์และเครื่องตรวจจับต้องปรับตามคุณสมบัติในการกระตุ้นและปล่อยก๊าซของโพรบCytometer กระแสถูกตั้งค่าสำหรับแผนจุดไป และ sidewardscatters ทั้งในระดับเชิงเส้น การกำหนดขนาดของเซลล์ และส่วนประกอบ (Fig. 2) ตรวจพบการดูดซับ PI ที่ 610 nm การอย่างชัดเจนเห็นเซลล์ตายบนพล็อตจุด PI บวกเซลล์คือ gatedเช่นในแดง ขอบเขตของการวิเคราะห์เป็นรั้ว (R1), และต้อง gatingมีขนาดใหญ่พอที่วัดอยู่ และเซลล์ตายประชากร

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการทำงานได้อย่างรวดเร็ว
ในช่วงการทดลองจลนพลศาสตร์และเพื่อหลีกเลี่ยงสิ่งประดิษฐ์ขั้นตอนเช่น
ที่เกิดจากการออกเซลล์ซึ่งอาจนำไปสู่ความเสียหายหรือการผ่าน
ของเซลล์ที่จะแนะนำให้เลือกที่จะเติบโตเซลล์ในการระงับ.
ที่สำคัญความสามารถของเซลล์สานุศิษย์ที่จะเติบโตใน
การระงับ ควรจะทดสอบก่อน เซลล์ที่มีเมล็ดที่
1-5? 105 เซลล์ / มิลลิลิตรต่อดีวันก่อนการวิเคราะห์ใน 24 หลุม
แผ่นระงับ (ซาร์สเต็ดท์) การตายของเซลล์ในวันถัดไปจะถูกเหนี่ยวนำ.
ตัวอย่างเซลล์จากวัฒนธรรมระงับมีการวิเคราะห์ที่ปกติ
ช่วงเวลาใน cytometer ไหล สำหรับเรื่องนี้ 270 LL ของเซลล์แขวนลอย
จากแผ่นระงับ 24 หลุมจะถูกโอนไปโพรพิลีน 5 มิลลิลิตร
หลอดด้านล่างรอบและ 30 LL ของเซลล์ impermeant
สอบสวน (เช่น PI) จะเพิ่มจาก 10? วิธีการแก้ปัญหา (30 LM) จัดทำขึ้น
จากหุ้น 3 มม) เลเซอร์และเครื่องตรวจจับจะต้องมีการปรับตัว
ตามการกระตุ้นและคุณสมบัติการปล่อยสอบสวน.
cytometer ไหลจะตั้งขึ้นสำหรับพล็อตจุดที่มีไปข้างหน้าและข้าง
สหภาพแรงงานทั้งในระดับเชิงเส้นเพื่อกำหนดขนาดของเซลล์และ
เมล็ด (รูปที่ 2) ดูดซึม PI มีการตรวจพบที่ 610 นาโนเมตร ได้อย่างชัดเจน
เห็นเซลล์ที่ตายแล้วบนพล็อตจุดเซลล์ PI-บวกรั้วรอบขอบชิด
เช่นสีแดง ภูมิภาคของการวิเคราะห์เป็นรั้วรอบขอบชิด (R1) และ gating จะต้อง
มีขนาดใหญ่พอสำหรับการวัดของทั้งสองที่อยู่อาศัยและการตายของเซลล์
ประชากร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทำงานได้อย่างรวดเร็วในระหว่างการทดลองจลนศาสตร์
และหลีกเลี่ยงวัตถุกระบวนการเช่น
เกิดจากเซลล์ออก ซึ่งจะทำให้เกิดความเสียหาย หรือ permeabilization
ของเซลล์ จะแนะนําการเติบโตของเซลล์ในการระงับ
คือความสามารถของเซลล์พลพรรคที่จะเติบโตใน
ช่วงล่างควรทดสอบก่อน เซลล์มีเมล็ดที่
1 – 5  105 เซลล์ / มล. ต่อทั้งวันก่อนการวิเคราะห์ด้วย
ระงับ 24 แผ่น ( Sarstedt ) วันต่อมาเซลล์ตายจะเกิด .
ตัวอย่างเซลล์จากวัฒนธรรมการใช้ในช่วงเวลาปกติ
ในการใช้โมโน . สำหรับเรื่องนี้ แต่จะของเซลล์แขวนลอย
จาก 24 ดีช่วงล่างจานก็ย้ายไป 5-ml Polypropylene
กลมด้านล่างหลอดและ 30 จะเซลล์ impermeant
โพรบ ( เช่นPI ) เพิ่มจาก 10  โซลูชั่น 30 ( LM ) เตรียม
จาก 3-mm หุ้น ) เลเซอร์และเครื่อง ต้องดัดแปลง
ตามการกระตุ้นและคุณสมบัติของการสอบสวน การใช้โมโน
ตั้งค่าสำหรับพล็อตจุดข้างหน้าและไปด้านข้าง
สหภาพแรงงานทั้งในระดับเชิงเส้นเพื่อกำหนดขนาดเซลล์และ granularity
( รูปที่ 2 ) ปี่ การตรวจพบ 610 nm .
ให้ชัดเจนเจอเซลล์ที่ตายแล้วบนจุดพล็อตดบวกเซลล์เป็นคนเฝ้า
เช่นสีแดง ขอบเขตของการวิเคราะห์ gated ( R1 ) และหลักการต้อง
มีขนาดใหญ่พอสำหรับการวัดทั้งอยู่และตายประชากรเซลล์