2.4.4. Quantification of protein ca

2.4.4. Quantification of protein carbonyls
A serum sample (5 ll) was denatured by 5 ll 12% (w/v) sodium dodecyl sulfate
(SDS). Protein carbonyls present in samples were converted to 2,4 dinitrophenylhydrazine
(DNP) hydrazone by DNP in 2 M HCl for 20 min at room temperature. Samples
were diluted in coating buffer, adsorbed to wells of an ELISA plate and blocked
with PBS/0.1% tween/1% bovine serum albumin, then probed with an anti-DNP antibody
(Sigma D9656) and a horseradish peroxidase (HRP) conjugated secondary
antibody (ECL anti-rabbit IgG, HRP-linked whole antiobody from donkey) for 3 h
and 1 h respectively at room temperature. A tetramethylbenzidine (TMB) substrate
was then added and allowed to oxidize for 15 min to a sapphire-blue complex at
room temperature. The reaction was stopped by addition of 2 M HCl and OD measured
at 450 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.4 ปริมาณของโปรตีนสำเนาตัวอย่างซีรั่ม A (5 LL) ถูกเอทิลแอลกอฮอล์ 5 LL 12% (w / v) โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) สำเนาโปรตีนที่มีอยู่ในตัวอย่างที่ถูกแปลงเป็น 2,4 dinitrophenylhydrazine (DNP) hydrazone โดย DNP 2 M HCl เป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ตัวอย่างที่ถูกปรับลดในบัฟเฟอร์เคลือบดูดซับหลุมของแผ่นวิธี ELISA และบล็อกที่มีพีบีเอส/ 0.1% ทวี / 1% โปรตีนชนิดหนึ่งในซีรั่มวัวตรวจสอบแล้วกับแอนติบอดีต่อต้าน DNP (ซิกม่า D9656) และ peroxidase มะรุม (HRP) ผันรองแอนติบอดี (ECL IgG ต่อต้านกระต่ายทั้ง HRP-linked antiobody จากลา) เป็นเวลา 3 ชั่วโมงและ1 ชั่วโมงตามลำดับที่อุณหภูมิห้อง tetramethylbenzidine (TMB) พื้นผิวที่ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วและได้รับอนุญาตให้ออกซิไดซ์เป็นเวลา15 นาทีถึงที่ซับซ้อนไพลินสีฟ้าที่อุณหภูมิห้อง ปฏิกิริยาก็หยุดโดยนอกเหนือจาก 2 M HCl และวัด OD ที่ 450 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4.4 . ปริมาณของโปรตีน carbonyls
ซีรั่มตัวอย่าง 5 จะ ) คือใช้ 5 จะ 12 % ( w / v )
โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) carbonyls โปรตีนที่มีอยู่ในตัวอย่างที่แปลง 2 , 4 dinitrophenylhydrazine
( DNP ) โดย DNP จาก 2 M HCl เป็นเวลา 20 นาที ที่อุณหภูมิห้อง ตัวอย่าง
ลดในการเคลือบบัฟเฟอร์ ดูดซับไปบ่อจาน ELISA และบล็อก
กับ PBS / 01 tween / 1% อัลบูมิน แล้วตรวจสอบการต่อต้าน DNP )
( Sigma d9656 ) และ horseradish peroxidase ( HRP ) และมัธยมศึกษา
แอนติบอดี ( IgG anti กระต่าย ECL HRP เชื่อมโยงทั้ง antiobody จากลา ) 3 H
1 H ตามลำดับ ที่อุณหภูมิห้อง เป็น tetramethylbenzidine ( TMB ) พื้นผิว
ก็เพิ่มและอนุญาตให้เทอะ 15 นาทีกับไพลินที่ซับซ้อน
อุณหภูมิห้องปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยนอกเหนือจาก 2 M HCl และ OD วัด
450 nm .