DNA extraction and genotyping of bu

DNA extraction and genotyping of bull samples Semen straws from 848 Holstein-Friesian sires, repre- senting the Irish dairy germplasm in recent years, were collected for genomic DNA extraction. Semen was washed twice in phosphate buffered saline (pH7.4) and centrifuged. The resulting cell pellets were resuspended in 450 μl of pre-warmed extraction buffer (10 mM Tris pH8, 10 mM EDTA, 0.1% SDS, 100 mM NaCl) and 15 μl of 2-mercaptoethanol was subsequently added. Fol- lowing addition of 10 μl proteinase K (20 mg/ml), sam- ples were incubated for 15 minutes at 55°C. An overnight incubation at 60°C ensured complete lysis. DNA was extracted using the Maxwell® instrument (Pro- mega Corp., Madison, WT, USA) according to the man- ufacturer’s instructions. All SNPs were genotyped in the bull population by Sequenom® using the iPLEX Gold assay on a MassARRAY® platform http://www.seque- nom.com. As a quality control measure, genomic DNA representing twenty-five animals was genotyped in duplicate for each SNP. Concordance across all dupli- cates was 100%.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสกัดดีเอ็นเอและ genotyping ตัวอย่างน้ำเชื้อวัวหลอดจาก 848 ตระกูลโฮล-Friesian, เป็นตัวแทน senting เชื้อพันธุกรรมโคนมไอริชในปีที่ผ่านมาถูกเก็บรวบรวมในการสกัดดีเอ็นเอจีโนม น้ำอสุจิถูกล้างสองครั้งในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (ph7.4) และหมุนเหวี่ยง ส่งผลให้เม็ดมือถือถูก resuspended ใน 450 ไมโครลิตรของ buffer สกัดก่อนอุ่น (10 มิลลิเมตร PH8 tris, 10 มม. EDTA, sds 0.1%100 มิลลิเมตร NaCl) และ 15 ไมโครลิตรของ 2 Mercaptoethanol ถูกเพิ่มเข้ามาในภายหลัง นอกจากนี้ FOL-ควายเหล็กจาก 10 ไมโครลิตรโปร k (20 mg / ml) sam-Ples บ่มเป็นเวลา 15 นาทีที่ 55 องศาเซลเซียส บ่มค้างคืนที่ 60 องศาเซลเซียสมั่นใจสลายสมบูรณ์ dna ถูกสกัดโดยใช้แมกซ์เวล®เครื่องมือ (โปรล้านคอร์ป. เมดิสัน, น้ำหนัก, usa) ตามคำแนะนำของคน ufacturer ของSNPs ทั้งหมดถูก genotyped ในประชากรวัวโดย SEQUENOM ®โดยใช้การทดสอบทอง iplex ใน massarray ®แพลตฟอร์ม http://www.seque- nom.com เป็นมาตรการการควบคุมคุณภาพที่เป็นตัวแทนของจีโนมดีเอ็นเอยี่สิบห้าสัตว์ที่ได้รับการ genotyped ในที่ซ้ำกันสำหรับแต่ละ snp ความสอดคล้องในทุกเคทส์-Dupli เป็น 100%.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดดีเอ็นเอและ genotyping ของหลอดน้ำเชื้อตัวอย่างวัวจาก 848 ปริมาณพ่อพันธุ์โค repre-senting germplasm นมไอริชในปีที่ผ่านมา ถูกรวบรวมสำหรับ genomic DNA สกัด น้ำเชื้อถูกล้างในน้ำเกลือฟอสเฟต buffered (pH7.4) สองครั้ง และ centrifuged ขี้เซลล์ผลลัพธ์ถูก resuspended ใน μl 450 warmed ก่อนแยกบัฟเฟอร์ (10 mM ทริสเรทติ้ง pH8, 10 mM EDTA, 0.1% SDS NaCl 100 มม.) และต่อมาได้เพิ่ม 15 μl ของ 2 mercaptoethanol Fol - ควายเหล็กแห่ง 10 μl proteinase K (20 mg/ml), สาม ples ถูก incubated 15 นาทีที่ 55 องศาเซลเซียส คณะทันตแพทยศาสตร์ค้างคืนที่ 60° C มั่นใจสมบูรณ์ lysis ดีเอ็นเอที่สกัดโดยใช้ตราแมกซ์เวลล์® (Pro-ร็อค Corp. เมดิสัน WT สหรัฐอเมริกา) ได้ตามคำแนะนำคน-ufacturer ของ SNPs ทั้งหมดถูก genotyped ในประชากรวัวโดยใช้ iPLEX ทดสอบทองความ MassARRAY ®แพลตฟอร์ม http://www.seque-nom.com ® Sequenom เป็นเครื่องมือวัดควบคุมคุณภาพ genomic DNA แสดงสัตว์ยี่สิบห้าถูก genotyped ในซ้ำสำหรับแต่ละ SNP สอดคล้องระหว่าง cates dupli ทั้งหมดเป็น 100%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หอบฟางดีเอ็นเอเลือดและน้ำอสุจิ genotyping ของตัวอย่างจังหวัดปราจีนบุรีจาก 848 sires holstein-friesian repre - senting เชื้อนมไอริชในช่วงหลายปีที่ผ่านมาได้จากการเก็บข้อมูลสำหรับการขุดเจาะดีเอ็นเอ genomic น้ำอสุจิขึ้นมาสองครั้งในแบบเต็มบัฟเฟอร์ฟอสเฟตน้ำเกลือ( PH 7.4 )และ centrifuged กระสุนลูกปรายส่งผลให้เซลล์ที่มี resuspended ใน 450 μl ของบัฟเฟอร์สำหรับการขุดก่อนอุ่น( 10 บริษัททริสเรทติ้งมม. PH 8 edta 10 มม.เซิร์ฟเวอร์ SDS 0.1%100 มม. NaCl )และ 15 μl 2 - mercaptoethanol ภายหลัง มีการเพิ่มเติม PRL - อวยของ 10 proteinase μl K ( 20 มล.มก./)สาม - ples เป็น incubated สำหรับ 15 นาทีที่ 55 ° C อบพักค้างคืนที่ 60 ° C lysis สร้างความมั่นใจให้เสร็จสมบูรณ์ ดีเอ็นเอก็ถูกแยกออกมาโดยใช้ Maxwell ®เครื่องมือ( pro - เมกะแบงกิ้งคอร์ปอเรชั่น Madison WT , USA )ตามคำแนะนำของชาย - ufacturer ได้snps genotyped ทั้งหมดมีประชากรในจังหวัดปราจีนบุรีโดย sequenom ®โดยใช้สอบสีทอง iplex บน nom.com. http://www.seque- แพลตฟอร์ม massarray ®ที่ ในส่วนของมาตรการการควบคุม คุณภาพ ที่ดีเอ็นเอเป็นตัวแทน genomic ยี่สิบห้าสัตว์เป็น genotyped ใน snp. ที่ซ้ำกันสำหรับแต่ละรายการ ความปรองดองกันข้าม dupli - cates ทั้งหมดเป็น 100% .