A real-time polymerase chain reacti

A real-time polymerase chain reaction (PCR) was developed for the rapid detection and identification of Phaeoacremonium species, the fungi associated with severe diseases in grapevines. A degenerate primer pair (F2bt–R1bt) with homology to the β-tubulin gene was designed to be used in the amplification of 11 species of Phaeoacremonium. Four species-specific probes labelled with three different fluorescent dyes were designed to be used with the degenerate primers in a real-time PCR for the identification of Phaeoacremonium aleophilum, P. parasiticum, P. viticola and P. mortoniae. Combinations of two probes in a duplex real-time PCR allowed to detect and identify a mixture of Phaeoacremonium species and cross-amplifications were not detected. This method was applied to detect Phaeoacremonium species in eight wood fragments from grapevine plants naturally infected, and results were compared with those obtained with nested PCR and culturing on growth media. Real-time PCR detected Phaeoacremonium in 100% of the analysed fragments, whereas nested PCR did only in the 62% of them and requiring subsequent restriction fragment-length polymorphism analysis to identify the species. This method is a sensitive tool to detect and identify Phaeoacremonium species in infected grapevine wood. Real-time PCR assay defined here can be used in a plant nursery program to identify pathogen-free plants in order to manage Petri disease of grapevines. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสแบบเรียลไทม์ (PCR) ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อตรวจสอบอย่างรวดเร็วและระบุชนิด Phaeoacremonium เชื้อราที่เกี่ยวข้องกับโรครุนแรงใน grapevines คู่รองพื้น degenerate (F2bt – R1bt) มี homology กับยีนβ-tubulin ถูกออกแบบมาเพื่อใช้ในการขยายพันธุ์ 11 ของ Phaeoacremonium สี่ species-specific คลิปปากตะเข้มัน มีสามสีเรืองแสงแตกต่างกันถูกออกแบบมาเพื่อใช้กับไพรเมอร์ degenerate ใน PCR แบบเรียลไทม์สำหรับการระบุ Phaeoacremonium aleophilum, P. parasiticum, P. viticola และ P. mortoniae ชุดของสองคลิปปากตะเข้ใน PCR แบบเรียลไทม์สองสามารถตรวจพบ และระบุส่วนผสมพันธุ์ Phaeoacremonium และไม่พบขน-amplifications วิธีการนี้ถูกใช้เพื่อตรวจหาสายพันธุ์ Phaeoacremonium ในแปดชิ้นส่วนไม้จากพืช grapevine ติดเชื้อตามธรรมชาติ และผลได้เทียบกับได้กับ PCR ซ้อน และ culturing สื่อเจริญเติบโต PCR แบบเรียลไทม์ตรวจพบ Phaeoacremonium ใน 100% ของชิ้นส่วน analysed ขณะซ้อน PCR ได้ใน 62% การวิเคราะห์โพลิมอร์ฟิซึมยาวส่วนจำกัดต่อมาพวกเขา และจำเป็นต้องระบุสายพันธุ์เท่านั้น วิธีนี้เป็นเครื่องมือสำคัญเพื่อตรวจสอบ และระบุชนิด Phaeoacremonium ไม้ grapevine ติดไวรัส สามารถใช้ในโรงเรือนเพาะชำโปรแกรมทดสอบ PCR แบบเรียลไทม์ที่กำหนดที่นี่ระบุพืชการศึกษาอิสระเพื่อจัดการโรค Petri grapevines [บทคัดย่อจากผู้เขียน]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จริงเวลาวิธี polymerase chain reaction (PCR) ได้รับการพัฒนาสำหรับการตรวจสอบอย่างรวดเร็วและบัตรประจำตัวของสายพันธุ์ Phaeoacremonium เชื้อราที่เกี่ยวข้องกับโรคอย่างรุนแรงในองุ่น คู่ไพรเมอร์เลว (F2bt-R1bt) ที่คล้ายคลึงกันกับยีนβ-tubulin ถูกออกแบบมาเพื่อใช้ในการขยายของ 11 ชนิดของ Phaeoacremonium สี่ฟิวส์สายพันธุ์เฉพาะที่มีข้อความที่มีสามสีเรืองแสงที่แตกต่างกันได้รับการออกแบบมาเพื่อใช้กับไพรเมอร์คนเลวใน PCR แบบ real-time เพื่อระบุตัวตนของ Phaeoacremonium aleophilum พี parasiticum พีพี viticola mortoniae การรวมกันของสองฟิวส์ใน PCR เพล็กซ์แบบ real-time ได้รับอนุญาตในการตรวจสอบและระบุส่วนผสมของสปีชีส์ Phaeoacremonium และเครื่องขยายเสียงข้ามถูกตรวจไม่พบ วิธีการนี​​้ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบสายพันธุ์ Phaeoacremonium แปดเศษไม้จากพืชองุ่นติดเชื้อตามธรรมชาติและผลการวิจัยเมื่อเทียบกับผู้ที่ได้รับด้วยวิธี PCR ที่ซ้อนกันและเพาะเลี้ยงในสื่อการเจริญเติบโต PCR แบบ Real-time Phaeoacremonium ตรวจพบใน 100% ของชิ้นส่วนการวิเคราะห์ในขณะที่ซ้อนกัน PCR ได้เฉพาะใน 62% ของพวกเขาและต้องวิเคราะห์ความแตกต่างความยาวส่วนข้อ จำกัด ต่อมาในการระบุสายพันธุ์ วิธีการนี​​้จะเป็นเครื่องมือที่มีความสำคัญในการตรวจสอบและระบุชนิด Phaeoacremonium ไม้องุ่นที่ติดเชื้อ PCR แบบ Real-time กำหนดทดสอบที่นี่สามารถนำมาใช้ในโครงการเพาะชำพืชเพื่อระบุพืชที่ปลอดเชื้อเพื่อจัดการโรค Petri ขององุ่น [บทคัดย่อจากผู้เขียน]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็นแบบเรียลไทม์ปฏิกิริยาลูกโซ่ ) ถูกพัฒนาขึ้นสำหรับการตรวจสอบอย่างรวดเร็วและการ phaeoacremonium ชนิด , เชื้อราที่เกี่ยวข้องกับโรครุนแรงในไร่องุ่น . เป็น degenerate primer คู่ ( f2bt – r1bt ) กับตัวกับยีนบีตา - ทิวบูลินถูกออกแบบมาเพื่อใช้ในการเพิ่มปริมาณ 11 ชนิดของ phaeoacremonium .สี่เผ่าพันธุ์ - เฉพาะวัดที่มี 3 สีเรืองแสงที่แตกต่างกันถูกออกแบบมาเพื่อใช้กับไพรเมอร์ใน PCR แบบเรียลไทม์สำหรับการกำหนด phaeoacremonium aleophilum , หน้า parasiticum , หน้า viticola และ P . mortoniae .ชุดสองง่ามในเพล็กซ์แบบเรียลไทม์พีซีอาร์อนุญาตเพื่อตรวจสอบและระบุชนิดและส่วนผสมของ phaeoacremonium ข้าม amplifications ไม่พบ วิธีการนี้ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบ phaeoacremonium ชนิดในแปดไม้จากต้นองุ่น เศษพืชที่ติดเชื้อตามธรรมชาติและเปรียบเทียบกับการวิเคราะห์ด้วยวิธี PCR และการซ้อนกันบนสื่อการเจริญเติบโตตรวจพบในเวลาจริง phaeoacremonium 100% ของจำนวนชิ้นส่วน ส่วนที่ซ้อนกันซึ่งทำเฉพาะใน 62 % ของพวกเขาและต้องการที่ตามมาการ fragment length polymorphism การวิเคราะห์เพื่อระบุชนิด วิธีนี้เป็นเครื่องมือสำคัญเพื่อตรวจหาและระบุชนิดเชื้อ phaeoacremonium ในเกรปไวน์ไม้เวลาจริงวิธี PCR ที่กำหนดนี้ สามารถใช้ในสถานที่ผลิตโปรแกรมเพื่อระบุเชื้อโรคพืชฟรีในการจัดการโรคของต้นองุ่น Petri . จากผู้เขียน [ บทคัดย่อ ]