The Venus gene (V), IRES sequences

The Venus gene (V), IRES sequences (I) and the p19HA fusion gene (p19) used in this report were derived from the Venus-pTA7002GW (Fujioka et al. 2007), yy376 (Yamamoto et al. 2003) and pBICp19HA (Kurihara et al. 2007; Takeda et al. 2002) plasmids, respectively. The HAtagged abscisic acid receptor (HA-PYR1, P) sequence was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from an Arabidopsis cDNA library using the following primers: 5′ATC TAG ATG TAT CCA TAT GAT GTA CCA GAT TAT GCT ATG CCT TCG GAG TTA ACA CCA G-3′ and 5′-AAA AAA CTA GTT CAC GTC ACC TGA GAA CCA CTT CC
3′. The constructs depicted in Figure 1 were constructed by PCR amplification, restriction endonuclease digestion and ligation of selected fragments into a pSK1 vector (Kojima et al. 1999). To construct double-stranded Venus (dsVenus), a partial Venus fragment (256 nt) was amplified using the 5′-CAC CGC TGG ACG GCG ACG TAA ACG-3′ and 5′ACT AGT GTC CTT GAA GAA GAT GGT GC-3′ primers, subcloned into the pENTR/D-TOPO vector and then transferred into the pBI-sense, antisense Gateway vector (Nemoto et al. 2009) using LR clonase II (Invitrogen, Life Technologies, Tokyo, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยีนวีนัส (V) ลำดับ IRES (ฉัน) และยีนฟิวชั่น p19HA (P19) ที่ใช้ในรายงานฉบับนี้ได้มาจากดาวศุกร์-pTA7002GW (Fujioka et al. 2007) yy376 (ยามาโมโตะ et al. 2003) และ pBICp19HA ( Kurihara et al, 2007;.. ทาเคดะ et al, 2002) พลาสมิดตามลำดับ ตัวรับกรดแอบไซซิก HAtagged (HA-PYR1, P) ลำดับที่ได้รับการขยายโดยวิธี Polymerase chain reaction (PCR) จากห้องสมุด cDNA Arabidopsis ใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้: 5'ATC TAG ATG การท่องเที่ยวแห่งประเทศไทยททท CCA GAT GTA CCA GAT ทททจีซีทีซีซีที ATG TCG GAG TTA ACA CCA G-3 'และ 5'-AAA AAA CTA GTT CAC GTC แม็ก TGA GAA CCA CTT CC
3' โครงสร้างที่ปรากฎในรูปที่ 1 ถูกสร้างขึ้นโดยการขยาย PCR การย่อยอาหารและข้อ จำกัด endonuclease ligation ของชิ้นส่วนที่เลือกเป็นเวกเตอร์ pSK1 (ที่โคจิ et al. 1999) เพื่อสร้างวีนัสเกลียวคู่ (dsVenus) บางส่วนส่วนวีนัส (256 เอ็นที) ถูกขยายโดยใช้ 5'-CAC CGC TGG GCG ACG ACG ACG TAA-3 และ 5'ACT AGT GTC CTT GAA GAA GAT GGT GC-3 'ไพรเมอร์, subcloned เข้าไปใน pENTR / เวกเตอร์ D-TOPO และจากนั้นก็ย้ายเข้าไปใน pBI ความรู้สึก, antisense เกตเวย์เวกเตอร์ (Nemoto et al. 2009) โดยใช้ LR clonase ii (Invitrogen เทคโนโลยีชีวิตกรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยีนดาวศุกร์ ( V ) IRES ลำดับ ( ฉัน ) และ p19ha ฟิวชั่นยีน ( p19 ) ใช้ในการรายงานครั้งนี้ ได้มาจาก venus-pta7002gw ( ฟุจิโอกะ et al . 2007 ) , yy376 ( Yamamoto et al . 2546 ) และ pbicp19ha ( คุริฮาระ et al . 2007 ; ทาเคดะ et al . ปี 2002 ) ) ตามลำดับ การ hatagged รีเซพเตอร์ ( ha-pyr1 กรด abscisic ,P ) ลำดับถูกขยายโดยวิธีพีซีอาร์ ( PCR ) จาก Arabidopsis cDNA ห้องสมุดโดยใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้ : 5 นั้น ททท. ททท. ATC แท็ก ATG CCA GAT GTA CCA GAT ททท. GCT ATG CCT TCG มุข TTA ACA CCA ได้รับ 3 และ 5 ’ - AAA AAA CTA gtt the GTC บัญชี TGA CCA ซีทีที CC
3 ได้รับกา . ที่สร้างขึ้นโดยแสดงในรูปที่ 1 โดยขยายการย่อยอาหารและเอนโดนิวคลีเอสจำกัด Ligation เลือกชิ้นส่วนใน psk1 เวกเตอร์ ( โคจิม่า et al . 1999 ) สร้างคู่ตกค้าง ดาวศุกร์ ( dsvenus ) ส่วน วีนัส บางส่วน ( 256 NT ) คือขยายโดยใช้ 5 ’ - CAC CGC tgg ACG gcg ACG ถ้า acg-3 MBC และ 5 นั้น GTC agt พระราชบัญญัติกา กาทั้งหลายทั่วโลกก่อน gc-3 ’ของไพรเมอร์ใน pentr / d-topo เวกเตอร์แล้วโอนเข้ามา pbi ความรู้สึกเวกเตอร์ประตู antisense ( nemoto et al . 2009 ) การใช้ LR clonase II ( Invitrogen , เทคโนโลยี , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) .