หูชั้นกลางอักเสบ (OM) เป็นหนึ่งในโร

หูชั้นกลางอักเสบ (OM) เป็นหนึ่งในโรคอักเสบที่พบบ่อยที่สุดของเด็กและดังนั้นสามเหตุผลที่พบบ่อยที่สุดสำหรับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะในเด็ก ( Holstiege et al., 2013 ) แม้ว่ายาปฏิชีวนะเฉพาะมีการบริหารงานที่มีประสิทธิภาพทางคลินิกโดยรวมจะถูก จำกัด เนื่องจากการเจาะต่ำของยาเสพติดไปยังเยื่อบุหูชั้นกลาง (MEM) ( โคตส์ et al., 2008 ) การเข้าไม่ถึงของเชื้อแบคทีเรียที่อยู่ในไบโอฟิล์มโต ( โพสต์ et al., 2004 ) เช่นเดียวกับการแก้ไขอาการต่ำในครั้งแรก 24 ชั่วโมง ( Glasziou et al., 2004 และ โรเวอร์ส et al., 2006 ) เพื่อเพิ่มผลการรักษาและการยืดเวลาการติดต่อของยาเสพติดที่มียาเสพติดเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อโหลดสูตรเช่นไฮโดรเจลตามอุณหภูมิ ( Lee et al., 2004 , Li et al., 2014 และ Honeder et al., 2014 ), หยด ototopical ( Kutz et al., 2013 ), การปลูกถ่าย ( Goycoolea et al., 1992 , Goycoolea และ Muchow 1994 และ Nether et al., 2004 ), micropumps ( Lehner et al., 1997 ), intranasal ระบบนำส่งยา ( Chandrasekhar และ Mautone 2004 ) เคลือบขาเทียมหูชั้นกลาง ( Lensing et al., 2013 , Ehlert et al., 2013 และ เฮสส์ et al., 2013 ) และเม็ด ( แดเนียล et al., 2012 ) ได้รับการพัฒนา แม้ว่าจะมีหลายวิธีที่แตกต่างกันในการรักษาบำบัด intratympanic ท้องถิ่นน่าจะเป็นประโยชน์มากที่สุดสำหรับการรักษา OM เป็นการลดลงของผลข้างเคียงที่กระตุ้นโดยการรักษาด้วยระบบเช่นเดียวกับการเพิ่มขึ้นในการปฏิบัติตามของผู้ป่วยเด็กจะได้รับการคาดหวังว่า อย่างไรก็ตามการรักษาด้วย intratympanic ท้องถิ่นถูก จำกัด ด้วยเงื่อนไขทางกายวิภาคที่ไม่เอื้ออำนวย ช่องจมูกจะเชื่อมต่อกับช่องแก้วหูที่สามารถนำไปสู่การระบายน้ำอย่างรวดเร็วของการแก้ปัญหาการบริหารงาน intratympanally และสารแขวนลอย เพื่อหลีกเลี่ยงการระบายน้ำ Eustachian และพร้อมกันยืดเวลาการติดต่อของยาเสพติดที่เรานำเสนอระบบบริการ bioadhesive มีปฏิสัมพันธ์กับ MEM ในฐานะที่เป็นหูชั้นกลางจะเรียงรายไปด้วยชั้นเยื่อบุผิวแก้ไขระบบทางเดินหายใจ ( Hentzer 1984 ) และประกอบด้วยหมู่คน ciliated, หลั่งเช่นเดียวกับเซลล์แก้ว ( ลิมและ Shimada, 1972 ), คาร์โบไฮเดรตของ glycocalyx ที่เมมเบรนของเซลล์เหล่านี้ อาจจะใช้เป็นสถานที่สำหรับการจัดส่ง bioadhesive glycotargeted โปรตีนคาร์โบไฮเดรตมีผลผูกพันเช่นเลคตินมีปฏิสัมพันธ์กับโรงงานน้ำตาลบางตกค้างบนผิวเซลล์สามารถทำหน้าที่เป็นแกนด์ แนวคิดของการกำหนดเป้าหมาย bioadhesion เลคตินสื่อนี้ได้รับการรายงานแล้วสำหรับการเอาชนะอุปสรรคทางชีวภาพหลาย ( Bies et al., 2004 และ เวิร์ ธ et al., 2002 ) เช่นเยื่อบุผิวลำไส้ ( บอร์ et al., 1998 ), urothelium ( Plattner et al., 2008 และ Neutsch et al., 2013 ), อุปสรรคเลือดสมอง ( Plattner et al., 2010 ) และเนื้อเยื่อน้ำเหลือง ( Diesner et al., 2012 )

เป็นขั้นตอนแรกในการวางแนวความคิดนี้ไปสู่การปฏิบัติรูปแบบ glycosylation ของ MEM จะต้องมีการอธิบายซึ่งไม่ได้รายงานจนถึงขณะนี้ที่ดีที่สุดของความรู้ของเรา เพื่อระบุ moieties คาร์โบไฮเดรตสามารถเข้าถึงและแกนด์ bioadhesive ที่เหมาะสมในทางกลับกันการทำงานร่วมกันของ MEM แยกได้จากหนูตะเภากับแผงของเลคตินที่มีข้อความเรืองแสงที่มีความจำเพาะคาร์โบไฮเดรตที่แตกต่างกันได้รับการตรวจสอบ: จมูกข้าวสาลี agglutinin (WGA) จากTriticum vulgareผูกพันกับไม่มี -acetyl- ง -glucosamine และกรด sialic ( Goldstein และ Poretz 1986 ), เลคตินจากเมล็ดเฟิ ( Ulex ยูโร isoagglutinin ผม UEA-I) ซึ่งมีปฏิสัมพันธ์กับα- ลิตรคาร์โบไฮเดรต -fucose ที่มี ( Gürtler 1978 ), α-1 3 สรุปเฉพาะGalanthus nivalis agglutinin (GNA) ( Van Damme et al., 1987 ), มันฝรั่งเลคติน (STA) จากหัวมันฝรั่งผูกพันกับไม่มี -acetyl- ง -glucosamine ( อัลเลนและ Neuberger, 1973 ) และ เลคตินจากถั่วเลนส์ culinaris (LCA) ตระหนักถึง galactosaminyl- / mannosyl-ตกค้าง ( Flika et al., 1978 ) อย่างต่อเนื่องจากการทดลอง cytoadhesion ที่ 4 องศาเซลเซียสและการตรวจ cytoinvasion ที่ 37 ° C ความจำเพาะของการปฏิสัมพันธ์จะอธิบาย นอกจากนี้ผู้ร่วมการแปลของคาร์โบไฮเดรตเลคติน-ปฏิสัมพันธ์และ mucopolysaccharides เป็นกรดถูกนำมาใช้เพื่อระบุเลคตินมีผลผูกพันเว็บไซต์ที่ MEM

ทั้งหมดในทุกการศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประมาณลักษณะรูปแบบของคาร์โบไฮเดรต MEM และระบุแกนด์สำหรับ glycotargeting เป็นพื้นฐานสำหรับการพัฒนาของสูตรยาปฏิชีวนะ bioadhesive

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุ
เลคติน fluorescein ที่มีข้อความจากT. vulgare (WGA; agglutinin จมูกข้าวสาลี, อัตราส่วน fluorescein / โปรตีน (F / P) = 4.5), เอส tuberosum (STA; F / P = 3.0) U. ยูโร (UEA-I, isoagglutinin ฉัน; F / P = 2.9), G. nivalis (GNA; F / P = 5.5) และเลนส์ culinaris (LCA; F / P = 3.4) ที่ซื้อมาจากห้องปฏิบัติการเวกเตอร์ (เบอร์ลิน, CA, USA) เฮิ 33342 trihydrochloride trihydrate ที่ได้รับจาก Invitrogen (เวียนนา, ออสเตรีย) ด้วย Alcian สีฟ้าและไม่มี , ไม่มี ' ไม่มี '' -triacetyl-chitotriose มาจาก Sigma-Aldrich (เวียนนา, ออสเตรีย) Fluorescein ป้ายα-lactalbumin ก็มาจาก Probes โมเลกุล (ยูจีนโอเรกอนประเทศสหรัฐอเมริกา) ทั้งหมดสารเคมีอื่น ๆ ที่ถูกซื้อมาจาก บริษัท Sigma-Aldrich และมีคุณภาพในการวิเคราะห์

2.2 ความจุเลคตินมีผลผูกพันของ MEM
ทันทีหลังจากที่เสียสละหนูตะเภา Bullas ถูกชำแหละและเปิดอย่างระมัดระวัง หลังจากล้าง MEM กับ 0.9% NaCl Bullas ถูกติดตั้งกับหูคว่ำและเยื่อเมือกถูกบ่มกับการแก้ปัญหา 500 ไมโครลิตรของเลคติน fluorescein ป้าย (500 pmol / ml 0.9% NaCl) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสหรือ 37 องศา C. หลุดเลคตินถูกลบออกโดยการล้างเซลล์ชั้น 5 ครั้งด้วยน้ำเกลือไมโครลิตร 500 และนิวเคลียสมีการย้อมโดยการบ่มด้วยสารละลาย 500 ไมโครลิตรของเฮิ 33342 (0.1 mg / ml 0.9% NaCl) เป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 37 ° C ตัวอย่างถูกล้างอีกครั้งอย่างละเอียดและรูปแบบการย้อมสีของ MEM ได้รับการแก้ไขโดยการบ่มในเมธานอลเย็นที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที หลังจากที่เครื่องดื่มเกลือแร่ใน 0.9% โซเดียมคลอไรด์ที่อุณหภูมิห้องอีก 20 นาที, MEM ถูกลบออกอย่างระมัดระวังจากโองการและติดตั้งอยู่บนภาพนิ่งใน FluorSave ™สำหรับการแสดงและการหาปริมาณ หากต้องการให้มีการเปรียบเทียบข้อมูลของปัญหาที่แตกต่างกันได้รับการพิจารณาในการคำนวณ: (i) ตั้งแต่ระดับของ fluorescein ทดแทนแตกต่างระหว่างเลคติน, MFI ของเลคตินแต่ละที่เกี่ยวข้องกับจำนวนผันชัดเจนของ 1 mol fluorescein ต่อโมลเลคตินไปตาม fluorescein / อัตราส่วนโปรตีน (ii) ในขณะที่ขนาดของชิ้นงานที่แตกต่างกันและบางครั้งบางส่วนของการเก็บรวบรวม MEM เป็นที่ทับซ้อนกัน, MFI สูงสุดของสี่เหลี่ยมที่มีนิวเคลียสสีถูกกำหนด 100% และสี่เหลี่ยมเท่านั้นโดยพิจารณาจาก MFI สูงกว่า autofluorescence ของเซลล์ (iii) เฉพาะ MFI ของเลคตินเซลล์ที่เกี่ยวข้องของนิวเคลียสสี่เหลี่ยมบวกได้รับการพิจารณาที่เกี่ยวข้องกับ MFI ของนิวเคลียสเปื้อนในสี่เหลี่ยมเหล่านี้และแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์

เป็นตัวควบคุมที่จะประเมินผลผูกพันเชิญชมตัวอย่างที่เตรียมไว้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นได้รับการรักษาด้วยวิธีการแก้ปัญหาของ F-lactalbumin แทนเลคติน

2.3 จำเพาะของเลคตินที่มีผลผูกพัน
เพื่อตรวจสอบความจำเพาะของการปฏิสัมพันธ์ F-WGA เซลล์ทดลองยับยั้งการแข่งขันโดยใช้คาร์โบไฮเดรตที่สมบูรณ์ไม่มี , ไม่มี ' ไม่มี '' -triacetyl-chitotriose ได้ดำเนินการ หลังจากล้างโองการกับ 0.9% NaCl MEM ถูกบ่มด้วยโซลูชั่นส่วนผสมที่ปรุงสดใหม่ของ 250 ไมโครลิตรของคาร์โบไฮเดรตเสริม (0-500 นาโนโมล / ml) และ 250 แก้ปัญหาไมโครลิตรของ F-WGA (500 pmol / ml) เป็นเวลา 30 นาที ที่ 4 ° C หลังจากที่การกำจัดของเลคตินที่ไม่ผูกพันและคาร์โบไฮเดรตเชิงซ้อนเลคตินที่ละลายน้ำได้โดยการล้างมืออย่างละเอียดและเตรียมความพร้อมของ MEM, การเรืองแสงของเซลล์ที่ถูกผูกไว้ถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

2.4 เลคติน-ดูดซึมโดย MEM
เพื่อที่จะหาว่าเลคติน MEM-ผูกพันถูกพาขึ้นสู่เซลล์, โปรโตคอลชีพจรไล่ล่าได้รับการดำเนินการ: MEM ถูกบ่มกับการแก้ปัญหา 500 ไมโครลิตรของเลคติน fluorescein ป้าย (500 pmol / ml 0.9% NaCl) สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C ตามด้วยการกำจัดของเลคตินไม่ได้ผูกไว้โดยการล้าง 5 ครั้งด้วยน้ำเกลือ เลคตินเซลล์ผูกพันได้รับอนุญาตให้ internalized ในช่วงระยะเวลาการไล่ล่าที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอีก 60 นาที ต่อมาเฉลี่ยเรืองแสงความเข้ม MEM-ที่เกี่ยวข้อง (MFI) ถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

2.5 การย้อมสีของส่วนประกอบที่เป็นกรดของเยื่อเมือก
หลังจากแก้ไขหูกับหูในตำแหน่งตั้งตรง, โองการก็เต็มไปด้วย 500 ไมโครลิตร 3% กรดอะซิติกและบ่มเป็นเวลา 3 นาที การแก้ปัญหานี้ก็ถูกแทนที่ด้วย 500 ไมโครลิตรด้วย Alcian แก้ปัญหาสีฟ้า (10 mg / ml ใน 3% กรดอะซิติก) และลบออกหลังจาก 30 นาทีบ่มที่อุณหภูมิห้อง ( ชีฮานและ Hrapchak 1980 และ แบนครอฟและสตีเว่น 1982 ) MEM ถูกล้าง 5 ครั้งด้วยน้ำ 0.9% การแก้ปัญหาโซเดียมคลอไรด์และหลังการย้อมสีด้วย F-WGA ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นเลคตินกำลังการผลิตที่มีผลผูกพันที่ถูกมองเห็นโดยใช้กล้องจุลทรรศน์

2.6 ความมุ่งมั่นกึ่งเชิงปริมาณของเรืองแสงความเข้ม
ญาติเซลล์ชั้นเกี่ยวข้องเรืองแสงความเข้มของเลคติน fluorescein ติดฉลากและเฮิ 33342 นิวเคลียสสีถูกกำหนดโดยการอ่านการเรืองแสง (TECAN, Infinite M200, ออสเตรีย) ที่ความยาวคลื่นกระตุ้น / ปล่อย 485/525 นาโนเมตรและ 365/450 นาโนเมตรตามลำดับ สไลด์ได้รับการแก้ไขในกรอบและเลเซอร์ได้รับการปรับให้อ่าน 3 × 3 มมตารางหลังจากที่อื่นทั่วพื้นที่ทั้งหมดของสไลด์ถาวร เซลล์ชั้นบ่มกับกันชนทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุม autofluorescence ของเซลล์และภาพนิ่ง

เพื่อรับประกันการเปรียบเทียบผลและจะต้องพิจารณาอิทธิพลของพื้นผิวที่ไ​​ม่สม่ำเสมอและพับบางครั้งอัตราผลตอบแทนของควอนตัม, MFI ของนิวเคลียสย้อมด้วยเฮิ 33342 ได้รับเลือกให้เป็นตัวชี้วัดสำหรับปริมาณของเนื้อเยื่อในแต่ละตัวอย่าง fluorescein-readouts ที่เกี่ยวข้องกับพื้นที่นี้และแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์

2.7 กล้องจุลทรรศน์
เพื่อให้มองเห็นการยึดเกาะของเลคตินที่แตกต่างกันเพื่อ MEM ภาพเรืองแสงของสไลด์ที่เตรียมได้มาที่ 20 × 63 ×หรือขยายด้วยระบบกล้องจุลทรรศน์ Zeiss Axio Observer.Z1 ติดตั้งระบบไฟ LED "Colybri" (Zeiss, Göttingenเยอรมนี ) เพื่อความสอดคล้องของภาพ, เวลารับแสงกระตุ้นของเลคตินแต่ละที่เกี่ยวข้องกับจำนวนผันชัดเจนของ 1 mol fluorescein ต่อโมลของเลคตินโดยพิจารณา F / P-อัตราส่วน

ภาพที่ได้รับการตรวจชิ้นเนื้อโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ Nikon คราส 50i พร้อมกับ EXFO X-Cite ระบบไฟส่องสว่างเรืองแสง 120 (Nikon, เยอรมนี) ภาพของเลคตินติดฉลาก FITC ที่กระตุ้น / ความยาวคลื่นปล่อย 465-495 / 515-555 นาโนเมตรเช่นเดียวกับการส่งภาพแสงได้มาที่ 40 ×ขยายและประมวลผลโดยใช้ซอฟแวร์ลูเซีย G v5.0 สำหรับการประเมินผล

2.8 สถิติ
เครื่องมือในการวิเคราะห์แบบบูรณาการของ Microsoft Excel ®ถูกนำมาใช้ในการดำเนินการวิเคราะห์ทางสถิติ ทดสอบสมมติฐานที่ถูกสร้างขึ้นโดยการเปรียบเทียบสองวิธีจากตัวอย่างที่เป็นอิสระระหว่างสองชุดข้อมูล ( T -test) ค่าของP

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เป็นหนึ่งในโรคอักเสบที่พบบ่อยที่สุดของเด็กและดังนั้นสามเหตุผลที่พบบ่อยที่สุดสำหรับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะในเด็กหูชั้นกลางอักเสบ (ออม) (Holstiege et al., 2013) แม้ว่ายาปฏิชีวนะเฉพาะมีการบริหารงานที่มีประสิทธิภาพทางคลินิกโดยรวมจะถูกจำกัดเนื่องจากการเจาะต่ำของยาเสพติดไปยังเยื่อบุหูชั้นกลาง (MEM) (โคตส์ et al., 2008) การเข้าไม่ถึงของเชื้อแบคทีเรียที่อยู่ในไบโอฟิล์มโต (โพสต์ et al., 2004) เช่นเดียวกับการแก้ไขอาการต่ำในครั้งแรก 24 ชั่วโมง (Glasziou et al., 2004 และโรเวอร์สและ al., 2006) เพื่อเพิ่มผลการรักษาและการยืดเวลาการติดต่อของยาเสพติดที่มียาเสพติดเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อโหลดสูตรเช่นไฮโดรเจลตามอุณหภูมิ (Lee et al., 2004, Li et al., 2014 และ Honeder et al., 2014), หยด ototopical (Kutz et al., 2013), การปลูกถ่าย (Goycoolea et al., 1992, Goycoolea และ Muchow ปี 1994 และ Nether et al., 2004), micropumps (Lehner et al., 1997), intranasal ระบบนำส่งยา (จันทรสิกขาและ Mautone 2004) เคลือบขาเทียมหูชั้นกลาง (Lensing et al., 2013, Ehlert et al., 2013 และเฮสส์ et al., 2013) (แดเนียล et al., 2012) และเม็ดเป็นการลดลงของผลข้างเคียงที่กระตุ้นโดยการรักษาด้วยระบบเช่นเดได้รับการพัฒนาแม้ว่าจะมีหลายวิธีที่แตกต่างกันในการรักษาบำบัด intratympanic ท้องถิ่นน่าจะเป็นประโยชน์มากที่สุดสำหรับการรักษาออมียวกับการเพิ่มขึ้นในการปฏิบัติตามของผู้ป่วยเด็กจะได้รับการคาดหวังว่าอย่างไรก็ตามการรักษาด้วย intratympanic ท้องถิ่นถูกจำกัดด้วยเงื่อนไขทางกายวิภาคที่ไม่เอื้ออำนวยช่องจมูกจะเชื่อมต่อกับช่องแก้วหูที่สามารถนำไปสู่การระบายน้ำอย่างรวดเร็วของการแก้ปัญหาการบริหารงาน intratympanally และสารแขวนลอยเพื่อหลีกเลี่ยงการระบายน้ำ Eustachian และพร้อมกันยืดเวลาการติดต่อของยาเสพติดที่เรานำเสนอระบบบริการ bioadhesive มีปฏิสัมพันธ์กับหน่วยความจำในฐานะที่เป็นหูชั้นกลางจะเรียงรายไปด้วยชั้นเยื่อบุผิวแก้ไขระบบทางเดินหายใจ (Hentzer 1984) และประกอบด้วยหมู่คน ciliated หลั่งเช่นเดียวกับเซลล์แก้ว (ลิมและชิมาดะ 1972), คาร์โบไฮเดรตของ glycocalyx ที่เมมเบรนของเซลล์เหล่านี้อาจจะใช้เป็นสถานที่สำหรับการจัดส่ง bioadhesive glycotargeted โปรตีนคาร์โบไฮเดรตมีผลผูกพันเช่นเลคตินมีปฏิสัมพันธ์กับโรงงานน้ำตาลบางตกค้างบนผิวเซลล์สามารถทำหน้าที่เป็นแกนด์แนวคิดของการกำหนดเป้าหมาย bioadhesion เลคตินสื่อนี้ได้รับการรายงานแล้วสำหรับการเอาชนะอุปสรรคทางชีวภาพหลาย (Bies et al., 2004 และเวิร์ธและ al., 2002) เช่นเยื่อบุผิวลำไส้ (บอร์ et al., 1998), urothelium (Plattner et al., 2008 และ Neutsch et al., 2013), อุปสรรคเลือดสมอง (Plattner et al., 2010) และเนื้อเยื่อน้ำเหลือง (Diesner et al., 2012)เป็นขั้นตอนแรกในการวางแนวความคิดนี้ไปสู่การปฏิบัติรูปแบบ glycosylation นั้น ๆ หน่วยความจำจะต้องมีการอธิบายซึ่งไม่ได้รายงานจนถึงขณะนี้ที่ดีที่สุดของความรู้ของเราเพื่อระบุ moieties คาร์โบไฮเดรตสามารถเข้าถึงและแกนด์ bioadhesive ที่เหมาะสมในทางกลับกันการทำงานร่วมกันของหน่วยความจำแยกได้จากหนูตะเภากับแผงของเลคตินที่มีข้อความเรืองแสงที่มีความจำเพาะคาร์โบไฮเดรตที่แตกต่างกันได้รับการตรวจสอบ: จมูกข้าวสาลี agglutinin (WGA) จากTriticum vulgareผูกพันกับไม่มี - acetyl - ง - glucosamine และกรด sialic (Goldstein และ Poretz 1986), เลคตินจากเมล็ดเฟิ (Ulex ยูโร isoagglutinin ผมวรวัจน์-ฉัน) ซึ่งมีปฏิสัมพันธ์กับα-ลิตรคาร์โบไฮเดรต-ที่มี fucose (Gürtler 1978), α-1 3 สรุปเฉพาะGalanthus nivalis agglutinin (สบันงา) (Van Damme et al., 1987), มันฝรั่งเลคติน (สตา) จากหัวมันฝรั่งผูกพันกับไม่มี - acetyl - ง - glucosamine (อัลเลนและ Neuberger, 1973) และเลคตินจากถั่วเลนส์ culinaris (LCA) ตระหนักถึง galactosaminyl - / mannosyl-ตกค้าง (Flika et al., 1978) อย่างต่อเนื่องจากการทดลอง cytoadhesion 4 องศาเซลเซียสและการตรวจ cytoinvasion 37 ° C ความจำเพาะของการปฏิสัมพันธ์จะอธิบายนอกจากนี้ผู้ร่วมการแปลของคาร์โบไฮเดรตเลคตินปฏิสัมพันธ์และ mucopolysaccharides เป็นกรดถูกนำมาใช้เพื่อระบุเลคตินมีผลผูกพันเว็บไซต์ที่หน่วยความจำทั้งหมดในทุกการศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประมาณลักษณะรูปแบบของคาร์โบไฮเดรตหน่วยความจำและระบุแกนด์สำหรับ glycotargeting เป็นพื้นฐานสำหรับการพัฒนาของสูตรยาปฏิชีวนะ bioadhesive2. วัสดุและวิธีการ2.1 วัสดุเลคติน fluorescein ที่มีข้อความจากT vulgare (WGA; agglutinin จมูกข้าวสาลี อัตราส่วน fluorescein / โปรตีน (F / P) = 4.5), เอส tuberosum (สตา F / P = 3.0) สหรัฐยูโร (วรวัจน์-ผม isoagglutinin ฉัน F / P = 2.9), nivalis กรัม (สบันงา F / P = 5.5) และเลนส์ culinaris (LCA F / P = 3.4) ที่ซื้อมาจากห้องปฏิบัติการเวกเตอร์ (เบอร์ลิน CA, USA) เฮิ 33342 trihydrochloride trihydrate ที่ได้รับจาก Invitrogen (เวียนนา ออสเตรีย) ด้วย Alcian สีฟ้าและไม่มี ไม่มี ' ไม่มี '' - triacetyl chitotriose มาจากซิก-Aldrich (เวียนนา ออสเตรีย) Fluorescein ป้ายα lactalbumin ก็มาจากคลิปปากตะเข้โมเลกุล (ยูจีนโอเรกอนประเทศสหรัฐอเมริกา) ทั้งหมดสารเคมีอื่นๆ ที่ถูกซื้อมาจากบริษัทซิก-Aldrich และมีคุณภาพในการวิเคราะห์2.2 ความจุเลคตินมีผลผูกพันของหน่วยความจำทันทีหลังจากที่เสียสละหนูตะเภา Bullas ถูกชำแหละและเปิดอย่างระมัดระวังหลังจากล้างหน่วยความจำดื่มด่ำ 0.9% NaCl Bullas ถูกติดตั้งกับหูคว่ำและเยื่อเมือกถูกบ่มกับการแก้ปัญหา 500 ไมโครลิตรของเลคติน fluorescein ป้าย (500 pmol / ml 0.9% NaCl) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสหรือ 37 องศา C. หลุดเลคตินถูกลบออกโดยการล้างเซลล์ชั้น 5 ครั้งด้วยน้ำเกลือไมโครลิตร 500 และนิวเคลียสมีการย้อมโดยการบ่มด้วยสารละลาย 500 ไมโครลิตรของเฮิ 33342 (0.1 mg/ml 0.9% NaCl) เป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 37 ° C ตัวอย่างถูกล้างอีกครั้งอย่างละเอียดและรูปแบบการย้อมสีของหน่วยความจำได้รับการแก้ไขโดยการบ่มในเมธานอลเย็นที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีหลังจากที่เครื่องดื่มเกลือแร่ใน 0.9% โซเดียมคลอไรด์ที่อุณหภูมิห้องอีก 20 นาที หน่วยความจำถูกลบออกอย่างระมัดระวังจากโองการและติดตั้งอยู่บนภาพนิ่งใน FluorSave ™สำหรับการแสดงและการหาปริมาณหากต้องการให้มีการเปรียบเทียบข้อมูลของปัญหาที่แตกต่างกันได้รับการพิจารณาในการคำนวณ: (i) ตั้งแต่ระดับของ fluorescein ทดแทนแตกต่างระหว่างเลคติน MFI ของเลคตินแต่ละที่เกี่ยวข้องกับจำนวนผันชัดเจนของ 1 โมล fluorescein fluorescein ต่อโมลเลคตินไปตาม / อัตราส่วนโปรตีน (ii) ในขเป็นที่ทับซ้อนกันณะที่ขนาดของชิ้นงานที่แตกต่างกันและบางครั้งบางส่วนของการเก็บรวบรวมหน่วยความจำ MFI สูงสุดของสี่เหลี่ยมที่มีนิวเคลียสสีถูกกำหนดและสี่เหลี่ยมเท่านั้นโดยพิจารณาจาก 100% MFI สูงกว่า autofluorescence ของเซลล์ (iii) เฉพาะ MFI ของเลคตินเซลล์ที่เกี่ยวข้องของนิวเคลียสสี่เหลี่ยมบวกได้รับการพิจารณาที่เกี่ยวข้องกับ MFI ของนิวเคลียสเปื้อนในสี่เหลี่ยมเหล่านี้และแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์เป็นตัวควบคุมที่จะประเมินผลผูกพันเชิญชมตัวอย่างที่เต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หูชั้นกลางอักเสบ (OM) (Holstiege et al., 2013) จำกัด (MEM) (โคตส์ et al., 2008) (โพสต์ et al., 2004) 24 ชั่วโมง (Glasziou et al., 2004 และโรเวอร์ส et al., 2006) (Lee et al., 2004, Li et al., 2014 และ Honeder et al., 2014), หยด ototopical (Kutz et al., 2013), การปลูกถ่าย (Goycoolea et al., 1992 Goycoolea และ Muchow 1994 และ Nether et al., 2004), micropumps (Lehner et al., 1997), intranasal ระบบนำส่งยา (Chandrasekhar และ Mautone 2004) เคลือบขาเทียมหูชั้นกลาง (Lensing et al., 2013, Ehlert et al., 2013 และ เฮสส์ et al., 2013) และเม็ด (แดเนียล et al., 2012) ได้รับการพัฒนา intratympanic OM อย่างไรก็ตามการรักษาด้วย intratympanic ท้องถิ่นถูก จำกัด intratympanally และสารแขวนลอยเพื่อหลีกเลี่ยงการระบายน้ำ Eustachian bioadhesive มีปฏิสัมพันธ์กับ MEM (Hentzer 1984) และประกอบด้วยหมู่คน ciliated, หลั่งเช่นเดียวกับเซลล์แก้ว (ลิมและ Shimada, 1972), คาร์โบไฮเดรตของ glycocalyx ที่เมมเบรนของเซลล์เหล่านี้ bioadhesive glycotargeted แนวคิดของการกำหนดเป้าหมาย bioadhesion (Bies et al., 2004 และเวิร์ ธ et al., 2002) เช่นเยื่อบุผิวลำไส้ (บอร์ et al., 1998), urothelium (Plattner et al., 2008 และ Neutsch et al., 2013), อุปสรรคเลือด สมอง (Plattner et al., 2010) และเนื้อเยื่อน้ำเหลือง (Diesner et al., 2012 glycosylation ของ MEM เพื่อระบุ moieties คาร์โบไฮเดรตสามารถเข้าถึงและแกนด์ bioadhesive MEM จมูกข้าวสาลี agglutinin (WGA) จาก Triticum vulgare ผูกพันกับไม่มี -acetyl- ง -glucosamine และกรด sialic (Goldstein และ Poretz 1986), เลคตินจากเมล็ดเฟิ (Ulex ยูโร isoagglutinin ผม UEA-I) ซึ่งมีปฏิสัมพันธ์กับα- ลิตรคาร์โบไฮเดรต -fucose ที่มี (Gürtler 1978), α-1 3 สรุปเฉพาะ Galanthus nivalis agglutinin (GNA) (Van Damme et al., 1987), มันฝรั่งเลคติน (STA) จากหัวมันฝรั่งผูกพันกับไม่มี -acetyl- ง -glucosamine (อัลเลนและ Neuberger, 1973) และเลคตินจากถั่วเลนส์ culinaris (LCA) ตระหนักถึง galactosaminyl- / mannosyl- ตกค้าง (Flika et al., 1978) อย่างต่อเนื่องจากการทดลอง cytoadhesion ที่ 4 องศาเซลเซียสและการ ตรวจ cytoinvasion ที่ 37 องศาเซลเซียส mucopolysaccharides MEM และระบุแกนด์สำหรับ glycotargeting bioadhesive 2. วัสดุและวิธีการ2.1 วัสดุเลคติน fluorescein ที่มีข้อความจาก T. vulgare (WGA; agglutinin จมูกข้าวสาลี, อัตราส่วน fluorescein / โปรตีน (F / P) = 4.5), เอส tuberosum (STA; F / P = 3.0) U. ยูโร (UEA-I, isoagglutinin ฉัน; F / P = 2.9), G. nivalis (GNA; F / P = 5.5) และเลนส์ culinaris (LCA; F / P = 3.4) (เบอร์ลิน, CA, USA) เฮิ 33342 trihydrochloride trihydrate ที่ได้รับจาก Invitrogen (เวียนนา, ออสเตรีย) ด้วยด้วย Alcian สีฟ้าและไม่มี, ไม่มี 'ไม่มี' '-triacetyl-chitotriose มาจาก Sigma-Aldrich (เวียนนา, ออสเตรีย) Fluorescein ป้ายα -lactalbumin ก็มาจาก Probes โมเลกุล (ยูจีนโอเรกอนประเทศสหรัฐอเมริกา) ทั้งหมดสารเคมีอื่น ๆ ที่ถูกซื้อมาจาก บริษัท Sigma-Aldrich และมีคุณภาพในการวิเคราะห์2.2 ความจุเลคตินมีผลผูกพันของ MEM ทันทีหลังจาก ที่เสียสละหนูตะเภา Bullas ถูกชำแหละและเปิดอย่างระมัดระวังหลังจากล้าง MEM กับ 0.9% NaCl Bullas 500 ไมโครลิตรของเลคติน fluorescein ป้าย (500 pmol / ml 0.9% NaCl) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสหรือ 37 องศาเซลเซียส 5 ครั้งด้วยน้ำเกลือไมโครลิตร 500 500 ไมโครลิตรของเฮิ 33342 (0.1 mg / ml 0.9% NaCl) เป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส MEM -20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีหลังจากที่เครื่องดื่มเกลือแร่ใน 0.9% โซเดียมคลอไรด์ที่อุณหภูมิห้องอีก 20 นาที, MEM FluorSave ™สำหรับการแสดงและการหาปริมาณ (i) ตั้งแต่ระดับของ fluorescein ทดแทนแตกต่างระหว่างเลคติน, MFI 1 mol fluorescein ต่อโมลเลคตินไปตาม fluorescein / อัตราส่วนโปรตีน (ii) MEM เป็นที่ทับซ้อนกัน, MFI 100% MFI สูงกว่า autofluorescence ของเซลล์ (iii) เฉพาะ MFI MFI

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หูชั้นกลางอักเสบ ( โอม ) เป็นหนึ่งในโรคอักเสบที่พบบ่อยที่สุดของเด็กและดังนั้นสามเหตุผลที่พบบ่อยที่สุดสำหรับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะในเด็ก ( holstiege et al . ,2013 ) แม้ว่ายาปฏิชีวนะเฉพาะมีการบริหารงานที่มีประสิทธิภาพทางคลินิกโดยรวมจะถูกจำกัดเนื่องจากการเจาะต่ำของยาเสพติดไปยังเยื่อบุหูชั้นกลาง ( แหม่ม ) ( โคตส์ et al . ,2008 ) การเข้าไม่ถึงของเชื้อแบคทีเรียที่อยู่ในไบโอฟิล์มโต ( โพสต์ et al . , 2004 ) เช่นเดียวกับการแก้ไขอาการต่ำในครั้งแรก 24 ชั่วโมง ( glasziou et al . , 2004 และโรเวอร์ส et al . ,2006 ) เพื่อเพิ่มผลการรักษาและการยืดเวลาการติดต่อของยาเสพติดที่มียาเสพติดเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อโหลดสูตรเช่นไฮโดรเจลตามอุณหภูมิ ( ลี et al . , 2004 , Li et al . , 2014 และ honeder et al . , 2010 ) , หยด ototopical ( kutz et al . , 2013 ) , การปลูกถ่าย ( goycoolea et al . ,1992 goycoolea และ muchow 1994 และ Nether et al . , 2004 ) micropumps ( เลห์เนอร์ et al . , 1997 ) พบระบบนำส่งยา ( จันทรเศขรและ mautone ( 2004 ) เคลือบขาเทียมหูชั้นกลาง lensing et al . , 2013 , เอเลิร์ท et al . , 2013 และเฮสส์ et al . , 2013 ) และเม็ด ( แดเนียล et al . ,2012 ) ได้รับการพัฒนาแม้ว่าจะมีหลายวิธีที่แตกต่างกันในการรักษาบำบัด intratympanic ท้องถิ่นน่าจะเป็นประโยชน์มากที่สุดสำหรับการรักษาโอมอย่างไรก็ตามการรักษาด้วย intratympanic ท้องถิ่นถูกจำกัดด้วยเงื่อนไขทางกายวิภาคที่ไม่เอื้ออำนวยช่องจมูกจะเชื่อมต่อกับช่องแก้วหูที่สามารถนำไปสู่การระบายน้ำอย่างรวดเร็วของการแก้ปัญหาการบริหารงาน intratympanallyเพื่อหลีกเลี่ยงการระบายน้ำ Eustachian และพร้อมกันยืดเวลาการติดต่อของยาเสพติดที่เรานำเสนอระบบบริการ bioadhesive มีปฏิสัมพันธ์กับแหม่มในฐานะที่เป็นหูชั้นกลางจะเรียงรายไปด้วยชั้นเยื่อบุผิวแก้ไขระบบทางเดินหายใจ ( hentzer 1984ciliated และประกอบด้วยหมู่คน ,หลั่งเช่นเดียวกับเซลล์แก้ว ( ลิมและชิมาดะ , 1972 )คาร์โบไฮเดรตของที่เมมเบรนของเซลล์เหล่านี้อาจจะใช้เป็นสถานที่สำหรับการจัดส่ง bioadhesive glycotargeted ไกลโคแคลิ ก ซ์แนวคิดของการกำหนดเป้าหมาย bioadhesion เลคตินสื่อนี้ได้รับการรายงานแล้วสำหรับการเอาชนะอุปสรรคทางชีวภาพหลาย ( bies et al .2004 และเวิร์โดย et al . , 2002 ) เช่นเยื่อบุผิวลำไส้ ( บอร์ et al . , 1998 ) , ยูโรทีเลียม ( plattner et al . , 2008 และ neutsch et al . , 2013 ) , อุปสรรคเลือดสมอง ( plattner et al . , 2010 ) และเนื้อเยื่อน้ำเหลือง ( diesner et al . , 2012 )

เป็นขั้นตอนแรกในการวางแนวความคิดนี้ไปสู่การปฏิบัติรูปแบบ glycosylation ของแหม่มจะต้องมีการอธิบายซึ่งไม่ได้รายงานจนถึงขณะนี้ที่ดีที่สุดของความรู้ของเราเพื่อระบุดังกล่าวคาร์โบไฮเดรตสามารถเข้าถึงและแกนด์ bioadhesiveแยกได้จากหนูตะเภากับแผงของเลคตินที่มีข้อความเรืองแสงที่มีความจำเพาะคาร์โบไฮเดรตที่แตกต่างกันได้รับการตรวจสอบ : แหม่มจมูกข้าวสาลีแอกกลูตินิน ( WGA ) จากสาลีผูกพันกับไม่มี - อะ - ง - กลูและกรดเซียริก ( Goldstein และ poretz 1986 ) , เลคตินจากเมล็ดเฟิ ( ulex ยูโร isoagglutinin ผม uea-i ) ซึ่งมีปฏิสัมพันธ์กับα - ลิตรคาร์โบไฮเดรต - ฟูโคสที่มี ( G ü rtler 1978 )แอลฟา 1 สรุปเฉพาะหยาดหิมะ nivalis แอกกลูตินิน ( GNA ) ( van damme et al . , 1987 ) มันฝรั่งเลคติน ( STA ) จากหัวมันฝรั่งผูกพันกับไม่มี - อะ - ง - กลู ( อัลเลนและนูเบอร์เกอร์ , 1973 ) และเลคตินจากถั่วเลนส์ culinaris ( LCA ) ตระหนักถึง galactosaminyl - / mannosyl - ตกค้าง ( flika et al . ,1978 ) อย่างต่อเนื่องจากการทดลอง cytoadhesion ที่ 4 องศาเซลเซียสและการตรวจ cytoinvasion ที่ 37 ° C ความจำเพาะของการปฏิสัมพันธ์จะอธิบายนอกจากนี้ผู้ร่วมการแปลของคาร์โบไฮเดรตเลคติน - ปฏิสัมพันธ์และมิวโคพอลิแซ็กคาไรด์แหม่ม

ทั้งหมดในทุกการศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประมาณลักษณะรูปแบบของคาร์โบไฮเดรตแหม่มและระบุแกนด์สำหรับ glycotargeting เป็นพื้นฐานสำหรับการพัฒนาของสูตรยาปฏิชีวนะ bioadhesive

2 วัสดุและวิธีการวัสดุ

๑เลคตินี่ที่มีข้อความจากที vulgare ( WGA ; มีจมูกข้าวสาลีอัตราส่วน , ี่ / โปรตีน ( F / P ) = 4.5 ) , เอส tuberosum ( STA ; F / P = 3.0 ) U . ยูโร ( uea-i isoagglutinin , ฉัน ; F / P , G = 2.9 ) nivalis ( GNA ; F / P = 5.5 ) และเลนส์ culinaris ( LCA ; F / P = 34 ) ที่ซื้อมาจากห้องปฏิบัติการเวกเตอร์ ( เบอร์ลิน , CA , USA ) เฮิ 33342 trihydrochloride ต่างๆที่ได้รับจาก Invitrogen ( เวียนนาออสเตรีย , ) ด้วยอัลเซียนสีฟ้าและไม่มีไม่มี ' ' , ' ไม่มี - triacetyl chitotriose มาจาก ( เวียนนาซิกม่า Aldrich ,ออสเตรีย ) ี่ป้ายα - แลคตัลบูมินก็มาจาก probes โมเลกุล ( ยูจีนโอเรกอนประเทศสหรัฐอเมริกา ) ทั้งหมดสารเคมีอื่นจะที่ถูกซื้อมาจากบริษัทซิกม่า Aldrich และมีคุณภาพในการวิเคราะห์ความจุเลคตินมีผลผูกพันของแหม่ม

.ทันทีหลังจากที่เสียสละหนูตะเภา bullas ถูกชำแหละและเปิดอย่างระมัดระวังหลังจากล้างแหม่มกับ 0.9% NaCl bullas ถูกติดตั้งกับหูคว่ำและเยื่อเมือกถูกบ่มกับการแก้ปัญหา 500 ไมโครลิตรของเลคตินี่ป้าย ( มล. 500 pmol / 09 % NaCl ) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสหรือ 37 องศา C หลุดเลคตินถูกลบออกโดยการล้างเซลล์ชั้น 5 ครั้งด้วยน้ำเกลือไมโครลิตร 500 และนิวเคลียสมีการย้อมโดยการบ่มด้วยสารละลาย 500 ml ไมโครลิตรของเฮิ 33342 ( 0.1 มก. / 09 % NaCl ) เป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 37 °องศาเซลเซียสตัวอย่างถูกล้างอีกครั้งอย่างละเอียดและรูปแบบการย้อมสีของแหม่มได้รับการแก้ไขโดยการบ่มในเมธานอลเย็นที่อุณหภูมิ - 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีหลังจากที่เครื่องดื่มเกลือแร่ใน9 เดือน 20 นาทีโซเดียมคลอไรด์ที่อุณหภูมิห้องอีก ,แหม่ม ถูกลบออกอย่างระมัดระวังจากโองการและติดตั้งอยู่บนภาพนิ่งใน fluorsave ™สำหรับการแสดงและการหาปริมาณหากต้องการให้มีการเปรียบเทียบข้อมูลของปัญหาที่แตกต่างกันได้รับการพิจารณาในการคำนวณ :( ผม ) ตั้งแต่ระดับของทดแทนแตกต่างระหว่างเลคตินี่ ,MFI ของเลคตินแต่ละที่เกี่ยวข้องกับจำนวนผันชัดเจนของ 1 โมลี่ต่อโมลเลคตินไปตามี่ / อัตราส่วนโปรตีน ( 2 ) ในขณะที่ขนาดของชิ้นงานที่แตกต่างกันและบางครั้งบางส่วนของการเก็บรวบรวมเป็นที่ทับซ้อนกันแหม่ม ,MFI สูงสุดของสี่เหลี่ยมที่มีนิวเคลียสสีถูกกำหนด 100% และสี่เหลี่ยมเท่านั้นโดยพิจารณาจาก MFI สูงกว่า autofluorescence ของเซลล์ ( III ) เฉพาะ MFIMFI ของนิวเคลียสเปื้อนในสี่เหลี่ยมเหล่านี้และแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์

เป็นตัวควบคุมที่จะประเมินผลผูกพันเชิญชมตัวอย่างที่เต