Method 5 modified from Moreira & Ol

Method 5 modified from Moreira & Oliveira (2011). Protocol:
1. Add 700 µL extraction buffer (100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 20 mM EDTA, pH 8.0, 2.8 % (w/v) CTAB, 1.3 M NaCl and 1 % PVP), and grind until getting suspension. Transfer to a micro centrifuge.
2. Add 1.4 µL (0.2 %) β-mercaptoetanol and 5 µL RNaseA (10 mg/mL), mix and incubate each sample at 65 °C for 15 min with occasional swirling.
3. Add 500 µL chloroform:isoamyl alcohol (24:1) to the tube and homogenize by gentle inversion. Centrifuge samples at 8,800 rpm for 3 min in a micro centrifuge at room temperature.
4. Transfer the supernatant carefully to new tubes, and incubate at 65 °C for 5 min.
5. Repeat Step CIA.
6. Precipitate the DNA by adding a 0.7 volume of isopropanol, mix well, and centrifuge at 12,000 rpm for 3 min. Pour of the supernatant and rinse the pellet with 70 % ethanol.
7. Add 150 µL TE. Store the DNA solution at -20 °C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีที่ 5 แก้ไขจาก Moreira Oliveira (2011) โพรโทคอล:1. เพิ่มบัฟเฟอร์สกัด µL 700 (100 mM ทริสเรทติ้ง HCl, pH 8.0, EDTA, pH 8.0, 20 มม. 2.8% (w/v) CTAB, 1.3 M NaCl และ 1% PVP), และบดจนได้รับการระงับ โอนไปเครื่องหมุนเหวี่ยงขนาดเล็ก2. เพิ่ม 1.4 µL (0.2%) Β-mercaptoetanol และ 5 µL ผสม RNaseA (10 mg/mL), และฟักอย่างละ 65 ° c 15 นาทีกับการหมุนเป็นครั้งคราว3. เพิ่มแอลกอฮอล์คลอโรฟอร์ม: isoamyl µL 500 (24:1) หลอด และ homogenize ด้วยกลับอ่อนโยน ตัวอย่างเครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 8,800 rpm เป็นเวลา 3 นาทีในเครื่องหมุนเหวี่ยงขนาดเล็กที่อุณหภูมิห้อง4. โอน supernatant ระมัดระวังหลอดใหม่ และฟักที่อุณหภูมิ 65 ° C 5 นาทีทำซ้ำขั้นตอนที่ CIA6. ตกตะกอนดีเอ็นเอ โดยการเพิ่มปริมาณ 0.7 ของ isopropanol ส่วนผสม เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 rpm สำหรับ 3 นาทีเทของ supernatant และล้างเม็ด ด้วย 70% เอทานอล7. เพิ่ม 150 µL TE เก็บโซลูชันดีเอ็นเอที่-20 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีที่ 5 การแก้ไขจากอิ & Oliveira (2011) โปรโตคอล:
1 เพิ่มบัฟเฟอร์สกัด 700 ไมโครลิตร (100 มิลลิเมตร Tris-HCl ค่า pH 8.0 20 มิลลิเมตร EDTA, พีเอช 8.0, 2.8% (w / v) CTAB 1.3 M NaCl และ 1% PVP) และบดจนได้รับการระงับ ถ่ายโอนไปยัง centrifuge ไมโคร.
2 เพิ่ม 1.4 ไมโครลิตร (0.2%) β-mercaptoetanol และ 5 ไมโครลิตร RNaseA (10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ผสมและฟักไข่แต่ละตัวอย่างที่ 65 องศาเซลเซียสนาน 15 นาทีกับการหมุนเป็นครั้งคราว.
3 เพิ่ม 500 ไมโครลิตรคลอโรฟอร์ม: เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isoamyl (24: 1) หลอดและเป็นเนื้อเดียวกันโดยผกผันอ่อนโยน ตัวอย่างการหมุนเหวี่ยงที่ 8,800 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีในการหมุนเหวี่ยงขนาดเล็กที่อุณหภูมิห้อง.
4 โอนใสอย่างรอบคอบเพื่อหลอดใหม่และบ่มเพาะที่ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที.
5 ทำซ้ำขั้นตอนของซีไอเอ.
6 ตกตะกอนดีเอ็นเอโดยการเพิ่มปริมาณ 0.7 ของ isopropanol ผสมให้เข้ากันและหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที เทสารละลายและล้างอัดเม็ดที่มีเอทานอล 70%.
7 เพิ่ม 150 ไมโครลิตร TE วิธีการแก้ปัญหาการจัดเก็บดีเอ็นเอที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีที่ 5 การแก้ไขจาก โมไรร่า & Oliveira ( 2011 ) โปรโตคอล :1 . เพิ่ม 700 µผมใช้สาร ( 100 มม. หรือ HCl , pH 8.0 , 20 mM EDTA pH 8.0 2.8 % ( w / v ) ctab 1.3 M NaCl และ 1% PVP ) และบดจนต้องระงับ โอนไปยังเครื่องไมโคร2 . เพิ่ม 1.4 µ L ( 0.2% ) และบีตา - mercaptoetanol 5 rnasea ผมµ ( 10 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ผสม และบ่มเพาะแต่ละตัวอย่างที่อุณหภูมิ 65 องศา C เป็นเวลา 15 นาที ตามโอกาสตก3 . เพิ่ม 500 µชั้นคลอโรฟอร์ม : แอลกอฮอล์ในปริมาณ ( 24 : 1 ) หลอดเดียวกันโดยอ่อนโยนการกลับกัน ซึ่งตัวอย่างที่ 8 , 800 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีในเครื่องหมุนเหวี่ยงขนาดเล็กที่อุณหภูมิห้อง4 . โอนที่นำหลอดใหม่อย่างระมัดระวัง และบ่มเพาะที่อุณหภูมิ 65 องศา C เป็นเวลา 5 นาที5 . ทำซ้ำขั้นตอนที่ซีไอเอ6 . การเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอโดย 0.7 ของไอโซโพรพานอล ผสมให้เข้ากัน และเครื่อง 12 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที เทของน่าน และล้างเม็ดด้วยแอลกอฮอล์ 70%7 . เพิ่ม 150 µผมเต้ เก็บสารละลายดีเอ็นเอที่ - 20 องศา