To demonstrate that the prototype biochips described above
could be used to detect mycobacteria in environmental samples
in a robust, rapid, and easy-to-use fashion, biochips were
incubated with a variety of biological samples. The culturing
and detection procedures discussed earlier were used. Similar
to the results reported in our preliminary work [26,27], the
results of this study showed that target microorganisms bound
to paraffin in the device in a predictable manner, with non-target
microorganism not exhibiting significant adhesion. Calibration
of the chip with a broad range of pure cultures of mycobacteria,
including Gordonia spp. isolated from activated sludge foam,
and comparisons with molecular biology-based assays, including
16S rRNA-targeted fluorescence in situ hybridization (FISH)
and antibody staining, were reported in [27]. Representative
results are shown in Fig. 7, illustrating the results of challenging
the biochip with either a pure culture of G. amarae or a pure culture
of non-target E. coli following a 30-min incubation. Cells of
the target organism can be clearly observed on the surface. Fig. 8
shows results of a 2-h incubation of a biochip with a pure culture
of G. amarae. Once again, cells of the target microorganism
can be clearly seen on the paraffin surface, whereas only minimal
cellular debris is visualized off the paraffin surface. Since
the paraffin islands and microfluidic channels were both fabricated
using a transparency mask, printed using an inkjet printer
at 1200 dpi, edges of paraffin islands are not very smooth and
appear wavy (Fig. 8(a)). However, this has no affect the biochip
function. These microscopic observations are in agreement with
results we reported recently in [27], and indicate that paraffinbating
technology can be successfully miniaturized into an the
culture-based microfluidic biosensor. Overall, these results successfully
demonstrate an alternative platform technology for
inexpensive monitoring of environmental microorganisms.
To demonstrate that the prototype biochips described abovecould be used to detect mycobacteria in environmental samplesin a robust, rapid, and easy-to-use fashion, biochips wereincubated with a variety of biological samples. The culturingand detection procedures discussed earlier were used. Similarto the results reported in our preliminary work [26,27], theresults of this study showed that target microorganisms boundto paraffin in the device in a predictable manner, with non-targetmicroorganism not exhibiting significant adhesion. Calibrationof the chip with a broad range of pure cultures of mycobacteria,including Gordonia spp. isolated from activated sludge foam,and comparisons with molecular biology-based assays, including16S rRNA-targeted fluorescence in situ hybridization (FISH)and antibody staining, were reported in [27]. Representativeresults are shown in Fig. 7, illustrating the results of challengingthe biochip with either a pure culture of G. amarae or a pure cultureof non-target E. coli following a 30-min incubation. Cells ofthe target organism can be clearly observed on the surface. Fig. 8shows results of a 2-h incubation of a biochip with a pure cultureof G. amarae. Once again, cells of the target microorganismcan be clearly seen on the paraffin surface, whereas only minimalcellular debris is visualized off the paraffin surface. Sincethe paraffin islands and microfluidic channels were both fabricatedusing a transparency mask, printed using an inkjet printerat 1200 dpi, edges of paraffin islands are not very smooth andappear wavy (Fig. 8(a)). However, this has no affect the biochipfunction. These microscopic observations are in agreement withresults we reported recently in [27], and indicate that paraffinbatingtechnology can be successfully miniaturized into an theculture-based microfluidic biosensor. Overall, these results successfullydemonstrate an alternative platform technology forinexpensive monitoring of environmental microorganisms.
การแปล กรุณารอสักครู่..
เพื่อแสดงให้เห็นว่า ต้นแบบที่อธิบายข้างต้น
biochips สามารถนำมาใช้ตรวจสอบมัยโคแบคทีเรียในตัวอย่างสิ่งแวดล้อม
ในที่แข็งแกร่ง , รวดเร็ว , และแฟชั่นง่ายต่อการใช้งาน , biochips ได้
บ่มที่มีความหลากหลายของตัวอย่างทางชีวภาพ การเพาะเลี้ยงและการตรวจสอบขั้นตอนที่กล่าวถึงก่อนหน้านี้
มาใช้ ที่คล้ายกัน
ผลรายงานในเบื้องต้น 26,27 งาน [
]ผลจากการศึกษาพบว่าจุลินทรีย์เป้าหมายผูกพัน
เพื่อพาราฟินในอุปกรณ์ในลักษณะที่ไม่ระบุเป้าหมาย
จุลินทรีย์ exhibiting ความยึดเกาะได้ การสอบเทียบ
ของชิปที่มีช่วงกว้างของเชื้อบริสุทธิ์ของมัยโคแบคทีเรีย
, รวมทั้ง gordonia spp . ที่แยกได้จากโฟมและใช้ตะกอน
เปรียบเทียบกับชีววิทยาระดับโมเลกุลโดยวิธีรวมทั้ง
เบส 16S rRNA เป้าหมายเรืองแสงใน situ hybridization ( FISH )
แอนติบอดีชนิดมีรายงานใน [ 27 ] ผลตัวแทน
แสดงในรูปที่ 7 , ซึ่งแสดงให้เห็นถึงผลของความท้าทาย
ไบโอชิปด้วยบริสุทธิ์วัฒนธรรมของกรัม amarae หรือเชื้อบริสุทธิ์
เป้าหมายไม่ใช่เชื้ออีโคไลหลัง 30 นาที การบ่ม เซลล์ของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย
ให้สามารถสังเกตได้บนพื้นผิว ภาพที่ 8
แสดงผลของการบ่มเพาะ 2-h ของไบโอชิปด้วยเชื้อบริสุทธิ์
G . amarae . อีกครั้ง เป้าหมายเซลล์ของจุลินทรีย์
สามารถเห็นได้อย่างชัดเจนบนผิวพาราฟิน ในขณะที่เพียงเล็กน้อย
มือถือเศษจะมองเห็นปิดผิวพาราฟิน ตั้งแต่
พาราฟินเกาะและช่องไมโครฟลูอิดิกทั้งคู่ประดิษฐ์
ใช้หน้ากากใส พิมพ์โดยใช้เครื่องพิมพ์อิงค์เจ็ท
ที่ 1200 จุดต่อนิ้ว ,ขอบของเกาะพาราฟินไม่เรียบและหยัก
ปรากฏ ( รูปที่ 8 ( ก ) ) แต่นี้ไม่ได้ส่งผลกระทบต่อฟังก์ชัน biochip
สังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เหล่านี้อยู่ในข้อตกลงกับ
ผลลัพธ์ที่เรารายงานเมื่อเร็ว ๆ นี้ใน [ 27 ] และระบุว่า paraffinbating
เทคโนโลยีสามารถประสบความสำเร็จขนาดเล็กเป็น
วัฒนธรรมไมโครฟลูอิดิกไบโอเซนเซอร์ที่ใช้ โดยรวม ผลสําเร็จ
แสดงให้เห็นถึงเทคโนโลยีแพลตฟอร์มทางเลือกสำหรับ
ติดตามราคาไม่แพงของจุลินทรีย์สิ่งแวดล้อม
การแปล กรุณารอสักครู่..