Freeze-dried samples (~50–90 mg) we

Freeze-dried samples (~50–90 mg) were crushed until all eggs/hatchlings were broken,
and then the mass was determined in a pre-weighed eppendorf tube on an electronic balance (±0.01 mg, model XS205DU, Mettler Toldeo, Greifensee, Switzerland). Chloroform:methanol (2:1 v/v) solvent was added to the samples, which were placed in an ultrasonic cleaner (model FS30, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA) for 30 min and then spun in a microcentrifuge (model 5418, Eppendorf AG, Hambrug, Germany) at 7000 rpm for 5 min to separate the solvent containing lipids from other egg components. The solvent was removed and placed into a pre-weighed eppendorf tube. This extraction process was repeated three times per sample and the removed solvent containing lipids was combined. The solvent was evaporated in a Savant™ DNA120OP SpeedVac Concentrator (Thermo Electron Corporation, Milford, MA, USA) before total lipid mass was gravimetrically measured (±0.01 mg, balance XS205DU, Mettler Toldeo, Greifensee, Switzerland).Transesterification was performed using a modification of the method described by Velasquez-Orta et al. (2012). Dried total lipid extract was mixed with 1.2 mL methanol:hexane (1:1 v/v) before 50 μL sodium methoxide was added. The reaction mixture was placed in a Thermomixer R (Eppendorf AG, Hamburg, Germany) for
90 min at 21 °C and 1000 rpm. In order to neutralize the catalyst and stop the reaction, 50 μL of 25% HCl was added. Samples were centrifuged and the upper hexane layer containing the fatty acid methyl ester (FAME) extract was transferred to a gas chromatography vial for analysis (Velasquez-Orta et al., 2012)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างกรอบ (~ 50-90 มิลลิกรัม) ถูกบดจนหมดไข่/ลูกงูแรกเกิดมีหักและจากนั้น กำหนดมวลในหลอด eppendorf ชั่งน้ำหนักก่อนการดุลอิเล็กทรอนิกส์ (ค่าความคลากเคลื่อนมิลลิกรัม รุ่น XS205DU, Mettler Toldeo ทด สวิตเซอร์แลนด์) ตัวอย่าง ที่ทำความสะอาดอัลตราโซนิก (รุ่น FS30, Fisher วิทยาศาสตร์ พิตส์เบิร์ก PA สหรัฐอเมริกา) 30 นาทีแล้ว ปั่นในไมโคร (รุ่น 5418, Eppendorf AG, Hambrug เยอรมนี) ที่ 7000 rpm 5 นาทีเพื่อแยกตัวทำละลายที่ประกอบด้วยไขมันจากส่วนประกอบอื่น ๆ ไข่ ถูกตัวทำละลายคลอโรฟอร์ม: เมทานอล (2:1 v/v) ตัวทำละลายออก และวางลงในหลอด eppendorf ชั่งน้ำหนักก่อน กระบวนการสกัดนี้ซ้ำสามครั้งต่อหนึ่งตัวอย่าง และตัวทำละลายออกที่ประกอบด้วยไขมันได้ร่วม มีระเหยตัวทำละลายใน Savant™ DNA120OP SpeedVac หัว (เทอร์โม คอร์ปอเรชั่นอิเล็กตรอน ลฟอร์ด MA สหรัฐอเมริกา) ก่อนที่จะปิดทั้งหมด ได้วัดมวล gravimetrically (ค่าความคลากเคลื่อนมก. ยอด XS205DU, Mettler Toldeo ทด สวิตเซอร์แลนด์) เพิ่มแก้ไขดำเนินการโดยใช้การเปลี่ยนแปลงของวิธีการอธิบายไว้โดยชื่อ Orta Velasquez et al. (2012) สารสกัดแห้งรวมไขมันถูกผสมกับเมทานอล 1.2 mL: เฮกเซน (1:1 v/v) ก่อน 50 μL โซเดียม methoxide เพิ่ม ส่วนผสมของปฏิกิริยาอยู่ในตัว R Thermomixer (Eppendorf AG ฮัมบูร์ก เยอรมนี) สำหรับ90 นาที ที่ 21 ° C และ 1000 rpm เพื่อต่อต้านแรงกระตุ้น และหยุดปฏิกิริยา 50 μL HCl เพิ่ม 25% ได้จากตัวอย่าง และในเฮกเซนบนชั้นที่ประกอบด้วยสารสกัดจากกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ (ชื่อเสียง) ถูกย้ายไปเป็นขวดเครื่องวิเคราะห์ (Velasquez ชื่อ Orta et al. 2012)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แห้งตัวอย่าง (~ 50-90 มก.) ถูกบดขยี้จนไข่ทั้งหมด / hatchlings ถูกหัก
แล้วมวลถูกกำหนดในหลอด Eppendorf ก่อนส่งผลกระทบต่อความสมดุลอิเล็กทรอนิกส์ (± 0.01 มก., รุ่น XS205DU, Mettler Toldeo, Greifensee วิตเซอร์แลนด์) คลอโรฟอร์ม: เมทานอล (2: 1 v / v) เป็นตัวทำละลายถูกบันทึกอยู่ในกลุ่มตัวอย่างซึ่งถูกวางไว้ในเครื่องทำความสะอาดอัลตราโซนิก (รุ่น FS30, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, สหรัฐอเมริกา) เป็นเวลา 30 นาทีและหมุนตัวแล้วในไมโคร A (รุ่น 5418 , Eppendorf AG, Hambrug, เยอรมนี) ที่ 7000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีในการแยกตัวทำละลายที่มีไขมันจากองค์ประกอบอื่น ๆ ไข่ ตัวทำละลายจะถูกลบออกและวางลงในหลอด Eppendorf ก่อนชั่งน้ำหนัก กระบวนการสกัดนี้ซ้ำสามครั้งต่อตัวอย่างและตัวทำละลายที่มีไขมันลบออกได้ร่วม ตัวทำละลายระเหยในเมธี™ DNA120OP SpeedVac Concentrator (เทอร์โมอิเลคตรอนคอร์ปอเรชั่นฟอร์ด, MA, USA) ก่อนที่มวลไขมันทั้งหมดวัด gravimetrically (± 0.01 มิลลิกรัมสมดุล XS205DU, Mettler Toldeo, Greifensee วิตเซอร์แลนด์) .Transesterification ถูกดำเนินการโดยใช้ การปรับเปลี่ยนวิธีการอธิบายโดย Velasquez-et al, ออร์ตา (2012) แห้งสารสกัดจากไขมันรวมผสมกับ 1.2 มลเมทานอล: เฮกเซน (1: 1 v / v) ก่อน 50 ไมโครลิตรโซเดียมเมทอกถูกเพิ่มเข้ามา ผสมปฏิกิริยาถูกวางไว้ใน Thermomixer R (Eppendorf AG, ฮัมบูร์ก, เยอรมนี) สำหรับ
90 นาทีที่ 21 องศาเซลเซียสและ 1000 รอบต่อนาที เพื่อที่จะต่อต้านตัวเร่งปฏิกิริยาและหยุดปฏิกิริยา 50 ไมโครลิตร 25% HCl ถูกเพิ่มเข้ามา ตัวอย่างที่ถูกปั่นและชั้นบนเฮกเซนที่มีเอสเตอร์ของกรดไขมันเมทิล (FAME) สารสกัดจากถูกย้ายไปขวดแก๊ส chromatography สำหรับการวิเคราะห์ (Velasquez-ออร์ตา et al., 2012)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตรึงแห้งตัวอย่าง ( ~ 50 - 90 มิลลิกรัม ) ที่ถูกบดจนไข่ / hatchlings แตกแล้วมวลที่ถูกกำหนดในการ pre หลอดบนเครื่องชั่ง ชั่งเพนดอร์ฟ ( ± 0.01 มิลลิกรัม xs205du toldeo เม็ตเลอร์ , รูปแบบ , greifensee , สวิตเซอร์แลนด์ ) คลอโรฟอร์ม : เมทานอล ( 2 : 1 v / v ) ละลายได้เพิ่มกลุ่มตัวอย่างซึ่งอยู่ในการทำความสะอาดอัลตราโซนิก ( แบบ fs30 ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , Pittsburgh , PA , USA ) ประมาณ 30 นาที จากนั้นปั่นในไมโครเซนตริฟิวจ์ ( แบบโปรแกรมเพนดอร์ฟ , AG , hambrug , เยอรมนี ) ที่ 7 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5 นาที เพื่อแยก ตัวทำละลายที่มีส่วนประกอบของไขมันจากไข่อื่นๆ ตัวทำละลายจะถูกลบออกและวางไว้ในเพนดอร์ฟก่อนหนักท่อ กระบวนการนี้ซ้ำ 3 ครั้งต่อตัวอย่างและตัวทำละลายที่มีไขมันออกได้รวมกัน ตัวทำละลายที่ระเหยอยู่ใน™เมธี dna120op ทำให้หัว ( อิเล็กตรอน เทอร์โม จำกัด มิลฟอร์ด , MA , USA ) ก่อนที่มวลไขมัน รวมวัด gravimetrically ( ± 0.01 มิลลิกรัม xs205du toldeo เม็ตเลอร์ , สมดุล , greifensee , สวิตเซอร์แลนด์ ) กระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นได้โดยใช้การดัดแปลงวิธีการบรรยายโดย เวลาสเควซออร์ตา et al . ( 2012 ) แห้งไขมันรวม 1.2 ml สารสกัดผสมกับเมทานอล : น้ำ ( 1 : 1 v / v ) ก่อน 50 μ L โซเดียมเมทอกไซด์ คือเพิ่ม ปฏิกิริยาที่ผสมอยู่ใน thermomixer R ( เพนดอร์ฟ AG , ฮัมบูร์ก , เยอรมนี )90 นาทีที่ 21 ° C และ 1000 รอบต่อนาที เพื่อแก้ตัว และหยุดปฏิกิริยา , 50 μ L 25% HCl ถูกเพิ่มเข้ามา จำนวนระดับบนชั้นและสารที่มีกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ ( ชื่อเสียง ) สารสกัดถูกส่งไปแก๊สโครมาโตกราฟีขวดสำหรับการวิเคราะห์ เวลาสเควซออร์ตา et al . , 2012 )