For easy expression in E. coli, opt

For easy expression in E. coli, optimized gene of CALB and TLL
were synthesized. They were inserted into the corresponding
restriction enzyme sites of plasmid pRSFDuet to give recombinant
expression plasmid pRSFDuet-Calb and pRSFDuet-Tll, respectively.
CALB gene was also inserted into the corresponding restriction enzyme
sites of plasmid pRSFDuet-Tll to give recombinant co-expression
plasmid pRSFDuet-Calb-Tll. After transformation into E. coli BL
21 (DE3) and selection with kanamycin, E. coli (Calb/Tll) coexpressing
CALB and TLL with one plasmid (pRSFDuet-Calb-Tll)
and E. coli (Calb-Tll) co-expressing the two enzymes with two plasmids
(PETDuet-Calb and pRSFDuet-Tll) were obtained. In addition,
E. coli (Calb) expressing CALB and E. coli (Tll) expressing TLL were
also engineered for comparison.
All E. coli recombinant strains grew well in LB medium, and the
lipases were expressed by induction with 0.2 mM IPTG. After 4 h
induction, the cells were harvested at an OD600nm of 3.0 (Fig. S2).
The soluble cell-free extracts of these strains were analyzed by
SDS–PAGE. As shown in Fig. 2, both CALB and TLL were clearly
expressed in E. coli (Calb/Tll) with one plasmid as well as E. coli
(Calb-Tll) with two plasmids.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับนิพจน์ง่ายใน E. coli ยีน CALB และ TLL ที่ปรับให้เหมาะสมถูกสังเคราะห์ พวกเขาได้แทรกให้สอดคล้องกับเอนไซม์จำกัดเว็บไซต์ของ pRSFDuet plasmid ให้วททชนิพจน์ plasmid pRSFDuet-Calb และ pRSFDuet-Tll ตามลำดับยีน CALB ได้ถูกแทรกยังเอนไซม์จำกัดสอดคล้องกันไซต์ของ Tll pRSFDuet plasmid ให้นิพจน์ recombinant ร่วมplasmid pRSFDuet-Calb-Tll หลังจากแปลงเป็น E. coli BL21 (DE3) และเลือกกับกานามัยซิน E. coli (Calb Tll) coexpressingCALB และ TLL มี plasmid หนึ่ง (pRSFDuet Calb Tll)และ E. coli (Calb-Tll) ร่วมแสดงเอนไซม์สองกับสอง plasmids(PETDuet-Calb และ pRSFDuet-Tll) ได้รับ นอกจากนี้E. coli (Calb) การแสดง CALB และ E. coli (Tll) การแสดง TLLนอกจากนี้ยัง ได้วางแผนสำหรับการเปรียบเทียบทั้งหมด E. coli สายพันธุ์ recombinant เติบโตดีในปอนด์ และlipases ถูกแสดง โดยการเหนี่ยวนำด้วย IPTG 0.2 mM หลังจาก 4 hการเหนี่ยวนำเซลล์ได้เก็บเกี่ยวผลผลิตที่เป็น OD600nm 3.0 (ฟิก S2)สารสกัดเซลล์อิสระที่ละลายน้ำได้ของสายพันธุ์เหล่านี้ถูกวิเคราะห์โดยSDS-หน้า ดังแสดงใน Fig. 2, CALB และ TLL ได้อย่างชัดเจนแสดงใน E. coli (Calb Tll) หนึ่ง plasmid เป็น E. coli(Calb-Tll) กับสอง plasmids

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการแสดงออกง่ายในเชื้อ E. coli ยีนที่ดีที่สุดของ CALB และ TLL
ถูกสังเคราะห์ พวกเขาถูกใส่เข้าไปในที่สอดคล้องกันเว็บไซต์เอนไซม์ จำกัด ของพลาสมิด pRSFDuet เพื่อให้ recombinant แสดงออกพลาสมิด pRSFDuet-Calb และ pRSFDuet-TLL ตามลำดับ. ยีน CALB ถูกแทรกเข้าไปในเอนไซม์ข้อ จำกัด ที่สอดคล้องกันเว็บไซต์ของพลาสมิดpRSFDuet-TLL เพื่อให้ recombinant ร่วมแสดงออกพลาสมิดpRSFDuet-Calb-TLL หลังจากการแปลงเป็นเชื้อ E. coli BL 21 (DE3) และการเลือกกับกานามัยซิน, เชื้อ E. coli (Calb / TLL) coexpressing CALB และ TLL กับพลาสมิด (pRSFDuet-Calb-TLL) และเชื้อ E. coli (Calb-TLL) ร่วมแสดง ทั้งสองเอนไซม์ที่มีสองพลาสมิด(PETDuet-Calb และ pRSFDuet-TLL) ที่ได้รับ นอกจากนี้อี coli (Calb) แสดง CALB และเชื้อ E. coli (TLL) แสดง TLL ถูกออกแบบมาสำหรับการเปรียบเทียบ. ทุกสายพันธุ์อีโคไล recombinant เติบโตได้ดีในระดับปานกลาง LB และไลเปสที่ถูกแสดงออกมาด้วยการเหนี่ยวนำด้วยIPTG 0.2 มิลลิ 4 ชั่วโมงหลังจากการเหนี่ยวนำเซลล์เก็บเกี่ยวที่OD600nm 3.0 (รูป. S2). สารสกัดจากเซลล์ฟรีที่ละลายน้ำได้สายพันธุ์เหล่านี้ถูกวิเคราะห์โดยวิธี SDS-PAGE ดังแสดงในรูป 2 ทั้ง CALB และ TLL ได้รับอย่างชัดเจนแสดงในเชื้อE. coli (Calb / TLL) ด้วยพลาสมิดเช่นเดียวกับเชื้อ E. coli (Calb-TLL) ที่มีสองพลาสมิด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับการแสดงออกที่ง่ายใน E . coli , ที่ดีที่สุดของยีนและสังเคราะห์ calb tll
. พวกเขาถูกแทรกลงในไซต์ของเอนไซม์ พลาสมิดเหมือนกัน

prsfduet ให้รีคอมบิแนนท์พลาสมิดและการแสดงออก prsfduet calb prsfduet tll ตามลำดับ .
calb ยีนก็ยังแทรกเข้าไปที่ไซต์ของเอนไซม์ พลาสมิด
prsfduet tll ให้ยีนแสดงออก
โคพลาสมิด prsfduet calb tll . หลังจากการเปลี่ยนแปลงใน E . coli BL
21 ( DE3 ) และการเลือกด้วยเหตุผล , E . coli ( calb / TII TII calb ) coexpressing
และด้วยพลาสมิด ( prsfduet calb TII )
) และ E . coli ( calb TII ) ร่วมแสดงสองเอนไซม์กับสอง )
( petduet และ calb prsfduet TII ) ที่ได้รับ นอกจากนี้
E . coli ( E . coli calb calb ) การแสดงและการแสดง TII )
( TII )นอกจากนี้ได้วางแผนสำหรับการเปรียบเทียบ เช่น ใช้เชื้อทุกสายพันธุ์
ขยายตัวดีในปอนด์ขนาดกลาง และมีการแสดงออกโดยการเหนี่ยวนำด้วย
ไลเปสเอนไซม์ 0.2 มิลลิเมตร หลังจาก 4 H
เหนี่ยวเซลล์เก็บที่ od600nm ของ 3.0 ( รูป S2 )
ละลายสารสกัดจากการสังเคราะห์ของสายพันธุ์เหล่านี้มาวิเคราะห์โดย
SDS - หน้า ดังแสดงในรูปที่ 2 และมีความชัดเจน ทั้ง calb tll
แสดงออกใน E( ( calb / TII ) กับพลาสมิด เช่น E . coli
( calb TII ) 2 ) .