Ligation, transformation and select

Ligation, transformation and selection of recombinant clones were carried out according to the manufacturer’s recommended protocol (T-Vector Cloning Brochure, Promega,Medison, WI, USA). Recombinant colonies and then digested with the restriction enzyme Eco RI . Full-length inserts were identified by comparing the size of inserts with that of the PCR-amplified fragment. The DNA sequence of both strands of the cloned PCR products was then determined using dye terminator chemistry and a DNA automatic sequencer (Applied Biosystem model 377, Foster City, CA, USA).The first nucleotide of the sequence started at position 365 of the reference Western X disease phytoplasma sequence (L04682). The nucleotide sequence (875 nt) obtained from faba bean and periwinkle were identical and this was deposited in the GenBank database under accession number AJ557264.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไข่ การแปลง และเลือกโคลน recombinant ได้ดำเนินออกตามโพรโทคอแนะนำของผู้ผลิต (เวกเตอร์ T โคลนโบรชัวร์ Promega, Medison, WI สหรัฐอเมริกา) อาณานิคม recombinant และเจ่าแล้ว ด้วยข้อจำกัดของเอนไซม์ Eco RI ระบุปราศจากแทรก โดยการเปรียบเทียบขนาดของแทรกที่ส่วนขยาย PCR ลำดับดีเอ็นเอของทั้งสอง strands ของผลิตภัณฑ์ PCR โคลนได้แล้วกำหนดใช้สีย้อมเคมีเทอร์มิเนเตอร์และมีดีเอ็นเออัตโนมัติ sequencer (Biosystem ใช้รุ่น 377 ฟอสเตอร์ City, CA, USA)นิวคลีโอไทด์แรกลำดับเริ่มต้นที่ตำแหน่ง 365 ของการอ้างอิงลำดับ phytoplasma โรค X เวสเทิร์น (L04682) ลำดับนิวคลีโอไทด์ (875 nt) รับจาก faba ถั่วและ periwinkle มีเหมือนกัน และนี้ถูกฝากใน GenBank ฐานข้อมูลภายใต้หมายเลขทะเบียน AJ557264

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ligation การเปลี่ยนแปลงและการเลือกโคลน recombinant ได้ดำเนินการตามโปรโตคอลแนะนำของผู้ผลิต (T-เวกเตอร์โคลนโบรชัวร์, Promega, Medison, WI, USA) อาณานิคม recombinant และย่อยด้วยข้อ จำกัด ของเอนไซม์ Eco RI แล้ว แทรกเต็มตัวถูกระบุโดยการเปรียบเทียบขนาดของแทรกกับที่ของชิ้น PCR-ขยาย ลำดับดีเอ็นเอของเส้นทั้งสองของผลิตภัณฑ์พีซีอาร์โคลนจากนั้นก็คำนวณโดยใช้สีย้อมเคมีเทอร์มิและซีเควนดีเอ็นเออัตโนมัติ (ประยุกต์ Biosystem รุ่น 377, ฟอสเตอร์ซิตี้, CA, USA) ความเบื่อหน่ายแรกของลำดับเริ่มต้นในตำแหน่งที่ 365 ของการอ้างอิง เวสเทิร์ลำดับ X เชื้อไฟโตพลาสมาโรค (L04682) ลำดับนิวคลีโอ (875 NT) ที่ได้จากถั่วปากอ้าและหอยขมเหมือนกันและนี่คือที่ฝากไว้ในฐานข้อมูลของ GenBank ภายใต้หมายเลขภาคยานุวัติ AJ557264

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโคลนและ Ligation การแปลงยีน ได้ดำเนินการไปตามขั้นตอนของผู้ผลิตแนะนำ ( t-vector โคลนโบรชัวร์ promega เมดิสัน , วี , USA ) อาณานิคมแนนท์แล้วย่อยด้วยเอนไซม์ โค รี แทรกเต็มความยาวถูกระบุโดยการเปรียบเทียบขนาดของแทรกกับของ PCR ส่วนขยาย .ดีเอ็นเอลำดับทั้งเส้นของตัวผลิตภัณฑ์แล้ว โดยการพิจารณาเคมีย้อม DNA sequencer และ Terminator ( ใช้แบบอัตโนมัติ biosystem 377 , Foster City , CA , USA ) . แรกของลำดับนิวคลีโอไทด์ตำแหน่งเริ่มต้นที่ 365 ของตะวันตก x โรคไฟโตพลาสมา อ้างอิงลำดับ ( l04682 )การลำดับนิวคลีโอไทด์ ( 875 NT ) ที่ได้จากถั่วและ faba หอยขมมีเหมือนกันและนี้ฝากไว้ในขนาดฐานข้อมูลภายใต้หมายเลขภาคยานุวัติ aj557264 .