RQ determinationTo facilitate a rel

RQ determination
To facilitate a reliable determination of respiratory quotients, experimental conditions involved high cell densities and relatively low gas flow in order to maximize sensitivity in the quantification of O2 consumption. Yeast inocula were incubated in 25 mL YPD broth at 25 °C and 250 rpm orbital shaking for 48 h. Cells were then washed twice with sterile deionized water and the OD600 determined. Five hundred OD600 units were suspended in 25 mL of a 2X chemically defined medium previously described by Herwig et al. (2001) with two modifications: glucose was omitted, and pH was adjusted to 3.5. The suspension was then transferred to 250 mL shake flasks, and incubated in the resulting resting conditions for 24 h at 25 °C. After that time, 25 mL of a 400 g/L glucose solution was added to resting cultures in order to reach a final concentration of 200 g/L glucose, similar to the sugar content of a standard grape must. Cells were then incubated for 24 h at 25 °C and 250 rpm orbital shaking. Immediately after that, cultures were transferred to sterile 100 mL flasks and supplemented with 200 μL of antifoam 204 (Sigma Aldrich) for the determination of the respiratory quotient (RQ) in fully aerobic conditions. To this end, cultures were sparged with air at a flow rate of 0.6 L/h (0.2 vvm) and magnetically stirred at 250 rpm. Fermentation off-gas was led through silica gel filters and the concentration of O2 and CO2 determined every 10 s in a GA4 gas analyzer (DASGIP AG, Jülich, Germany) for 90 min. Concentration of both gases was used to calculate RQ values as the ratio between released CO2 and consumed O2 for each time point.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนด RQเพื่อความสะดวกในการกำหนดความน่าเชื่อถือของทางเดินหายใจ quotients เงื่อนไขทดลองเกี่ยวข้องกับความหนาแน่นของเซลล์สูง และค่อนข้างต่ำกระแสแก๊สเพื่อเพิ่มความไวในการนับปริมาณการใช้ O2 ยีสต์ inocula ได้ incubated ในซุป YPD 25 มิลลิลิตรที่ 25 ° C และ 250 rpm โคจรสั่นสำหรับเซลล์ 48 h. ถูกแล้วล้าง ด้วยน้ำ deionized กอซสอง และ OD600 ที่กำหนด หน่วย OD600 ห้าร้อยถูกหยุดชั่วคราวใน 25 mL 2 X กลางกำหนดสารเคมีโดย Herwig et al. (2001) ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ กับแก้ไขสอง: กลูโคสถูกละเว้น และมีปรับค่า pH 3.5 การระงับแล้วโอนย้ายไป 250 mL ปั่นน้ำ และ incubated ในสภาพที่พักได้ใน 24 ชมที่ 25 องศาเซลเซียส หลังจากนั้น เวลา 25 mL ของโซลูชันกลูโคส 400 g/L ถูกเพิ่มการวางตัววัฒนธรรมเพื่อเข้าถึงความเข้มข้นสุดท้ายของกลูโคส 200 g/L คล้ายจะเป็นน้ำตาลองุ่นมาตรฐานต้อง เซลล์ได้แล้ว incubated ใน 24 ชมที่ 25 ° C และสั่นโคจร 250 รอบต่อนาที ทันทีหลังจากที่ วัฒนธรรมถูกโอนย้ายไป 100 mL ใส่น้ำ และเสริม ด้วย μL 200 ของ antifoam 204 (ซิก Aldrich) สำหรับการกำหนดของผลหารหายใจ (RQ) ในสภาพแอโรบิกทั้งหมด เพื่อการนี้ วัฒนธรรมถูก sparged กับอากาศที่อัตราการไหลของ 0.6 L/h (0.2 vvm) และทางแม่เหล็กกวนที่ 250 รอบต่อนาที นำหมักปิดก๊าซผ่านตัวกรองซิลิก้าเจลและความเข้มข้นของ O2 และ CO2 ขึ้นทุก 10 s ในการ GA4 แก๊สวิเคราะห์ (DASGIP AG, Jülich เยอรมนี) สำหรับ 90 นาทีความเข้มข้นของก๊าซทั้งสองถูกใช้เพื่อคำนวณค่าของ RQ เป็นอัตราส่วนระหว่างปล่อย CO2 และ O2 ที่ใช้แต่ละจุดเวลานั้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความมุ่งมั่น RQ
เพื่ออำนวยความสะดวกความมุ่งมั่นบวกลบคูณหารที่เชื่อถือได้ของระบบทางเดินหายใจเงื่อนไขการทดลองที่เกี่ยวข้องกับความหนาแน่นของเซลล์สูงและการไหลของก๊าซที่ค่อนข้างต่ำในการสั่งซื้อเพื่อเพิ่มความไวในการหาปริมาณการบริโภค O2 inocula ยีสต์ถูกบ่มใน 25 มิลลิลิตรน้ำซุป YPD ที่ 25 ° C และ 250 รอบต่อนาทีโคจรเขย่าเป็นเวลา 48 ชั่วโมง เซลล์ที่ถูกล้างแล้วสองครั้งด้วยน้ำปราศจากไอออนผ่านการฆ่าเชื้อและ OD600 กำหนด ห้าร้อย OD600 หน่วยถูกระงับใน 25 มิลลิลิตร 2X กำหนดเคมีขนาดกลางที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Herwig et al, (2001) ที่มีการปรับเปลี่ยนสอง: กลูโคสถูกมองข้ามและมีการปรับค่า pH 3.5 ระงับนั้นก็ย้ายไป 250 มิลลิลิตรเขย่าขวดและบ่มในสภาพที่พักผ่อนผลเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 25 ° C หลังจากนั้น 25 มิลลิลิตร 400 กรัม / ลิตรวิธีการแก้ปัญหาน้ำตาลกลูโคสถูกบันทึกอยู่ในวัฒนธรรมที่พักผ่อนเพื่อให้สามารถเข้าถึงความเข้มข้นสุดท้ายของ 200 กรัม / ลิตรกลูโคสคล้ายกับปริมาณน้ำตาลองุ่นต้องมาตรฐาน เซลล์ที่ถูกบ่มแล้วเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 25 ° C และ 250 รอบต่อนาทีโคจรสั่น ทันทีหลังจากที่วัฒนธรรมถูกถ่ายโอนไปผ่านการฆ่าเชื้อ 100 มิลลิลิตรขวดและเสริมด้วย 200 ไมโครลิตรของ Antifoam 204 (ซิกม่าดิช) สำหรับการกำหนดความฉลาดทางระบบทางเดินหายใจ (RQ) ในสภาพแอโรบิกอย่างเต็มที่ ด้วยเหตุนี้วัฒนธรรมถูก sparged กับอากาศที่อัตราการไหล 0.6 ลิตร / ชั่วโมง (0.2 VVM) และกวนสนามแม่เหล็กที่ 250 รอบต่อนาที การหมักก๊าซออกนำผ่านตัวกรองซิลิกาเจลและความเข้มข้นของ O2 และ CO2 กำหนดทุก 10 วินาทีในการวิเคราะห์ก๊าซ GA4 (DASGIP แบงก์Jülich, เยอรมัน) เป็นเวลา 90 นาที ความเข้มข้นของก๊าซทั้งสองถูกใช้ในการคำนวณค่า RQ เป็นอัตราส่วนระหว่าง CO2 ที่ปล่อยออกมาและบริโภค O2 สำหรับแต่ละจุดเวลา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อความสะดวกในการกำหนด RQ
ที่เชื่อถือได้ของระบบทางเดินหายใจฉลาด เงื่อนไขการทดลองที่เกี่ยวข้องกับความหนาแน่นเซลล์สูงและอัตราการไหลของแก๊สค่อนข้างต่ำเพื่อเพิ่มความไวในการปริมาณของ O2 การบริโภค inocula ยีสต์ถูกบ่มในน้ำซุปที่ 25 ml ypd 25 ° C และเขย่า 250 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 48 ชั่วโมง โคจรเซลล์แล้วล้างสองครั้งด้วยน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสานงานและ od600 มุ่งมั่น หน่วยห้าร้อย od600 หยุดชั่วคราวใน 25 มิลลิลิตรต่อ 2x ไว้กลางอธิบายไว้ก่อนหน้า โดยเฮอร์วิก et al . ( 2001 ) กับสองการปรับเปลี่ยน : กลูโคสถูกละเว้น และปรับ pH 3.5 . ถูกระงับแล้วโอนไป 250 มิลลิลิตร เขย่าขวด ,โดยในเงื่อนไขที่เกิดพักผ่อนเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 25 องศา หลังจากนั้น 25 ml 400 กรัม / ลิตร สารละลายกลูโคสเพิ่มพักผ่อนวัฒนธรรมเพื่อเข้าถึงความเข้มข้นสุดท้าย 200 กรัมต่อลิตรและกลูโคส คล้ายกับปริมาณน้ำตาลองุ่นมาตรฐานต้อง เซลล์แล้วบ่มเชื้อเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 25 ° C และ 250 รอบต่อนาที แบบสั่น ทันทีหลังจากนั้นวัฒนธรรมที่ถูกโอนไปยังปลอดเชื้อ 100 ml ขวดเติม 200 ลิตรและμ antifoam 204 ( ซิกม่า Aldrich ) สำหรับการหาผลหารหายใจ ( RQ ) ในเงื่อนไขแอโรบิก อย่างเต็มที่ จบเรื่องนี้ วัฒนธรรมเป็น sparged กับอากาศในอัตรา 0.6 ลิตร / ชั่วโมง ( 0.2 การให้ ) และสนามแม่เหล็กกวน 250 รอบต่อนาทีหมักปิดแก๊สถูกนำผ่านซิลิกาเจลและความเข้มข้นของ O2 และ CO2 มุ่งมั่นทุกๆ 10 ใน ga4 ก๊าซเครื่องวิเคราะห์ ( dasgip AG , ลิมบวร์ก , เยอรมนี ) สำหรับ 90 นาที ความเข้มข้นของก๊าซทั้งสองใช้คำนวณค่าอัตราส่วนระหว่างปล่อย RQ เป็น CO2 และ O2 ที่ใช้สำหรับแต่ละจุดเวลา