A prototype method for the concentr

A prototype method for the concentration and detection of Campylobacter jejuni was developed using a previously reported biotinylated DNA aptamer in conjunction with qPCR. The so-called aptamer-based magnetic capture-qPCR (AMC-qPCR) assay was compared to a similar immunomagnetic separation (IMS)-qPCR assay. In small volume experiments (300 μl) applied to serially diluted C. jejuni suspended in buffer containing a mixed culture of other common food borne pathogens, the lower detection limit of the AMC-qPCR method was 1.1 log10/300 μl C. jejuni cells, one log10 better (lower) than that of IMS-qPCR (2.1 log10 CFU/300 μl). AMC-qPCR capture efficiency was 10–13% at assay detection limit. In 10 ml scale-up experiments, the lower detection limit of AMC-qPCR was 2.0 log10 CFU/10 ml with corresponding capture efficiency of 4–7%. Nucleic acid aptamers are promising alternatives to antibodies for magnetic bead-based capture followed by qPCR detection.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีสร้างสมาธิและตรวจ Campylobacter jejuni ถูกพัฒนาโดยใช้ที่รายงานไปก่อนหน้านี้ biotinylated ดีเอ็นเอ aptamer ร่วมกับ qPCR ทดสอบเรียกใช้ aptamer แม่เหล็กจับ-qPCR (AMC-qPCR) ได้เปรียบเทียบกับการแยก immunomagnetic คล้าย (IMS) -วิเคราะห์ qPCR การ ในปริมาณขนาดเล็กทดลอง (300 μl) กับ C. jejuni serially แตกออกที่ถูกระงับในบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วยวัฒนธรรมแบบผสมอาหารอื่น ๆ ทั่วไปแบกรับโรค ตรวจหาขีดจำกัดล่างของวิธี AMC qPCR ได้ 1.1 เซลล์ C. jejuni μl log10/300, log10 ดีหนึ่ง (ต่ำกว่า) กว่าของ IMS qPCR (2.1 log10 CFU/300 μl) AMC-qPCR จับประสิทธิภาพ 10 – 13% ที่วงเงินตรวจวิเคราะห์ได้ ในการทดลอง 10 ml ขนาดสาย ตรวจหาขีดจำกัดล่างของ AMC qPCR ได้ 2.0 log10 CFU/10 ml มีประสิทธิภาพการจับภาพที่สอดคล้องกัน 4 – 7% Aptamers กรดนิวคลีอิกแอนตี้สำหรับแม่เหล็กลูกปัดตามจับตาม qPCR ตรวจสัญญาแทนได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการต้นแบบสำหรับความเข้มข้นและการตรวจสอบของ Campylobacter jejuni ได้รับการพัฒนาโดยใช้ดีเอ็นเอ aptamer รายงานก่อนหน้านี้ biotinylated ร่วมกับ qPCR ที่เรียกว่า aptamer ที่ใช้แม่เหล็กจับ qPCR (AMC-qPCR) การทดสอบเมื่อเทียบกับการแยก immunomagnetic ที่คล้ายกัน (IMS) -qPCR ทดสอบ ในการทดลองปริมาณขนาดเล็ก (300 ไมโครลิตร) นำไปใช้กับการปรับลดลำดับ C. jejuni ระงับในบัฟเฟอร์ที่มีวัฒนธรรมผสมอื่น ๆ ของเชื้อโรคอาหารร่วมกันขีด จำกัด ล่างของการตรวจสอบวิธีการที่บบส qPCR ได้ 1.1 log10 / 300 ไมโครลิตร C. jejuni เซลล์, log10 หนึ่งที่ดีกว่า (ต่ำกว่า) ของ IMS-qPCR (2.1 log10 CFU / 300 ไมโครลิตร) บบส qPCR ประสิทธิภาพจับภาพเป็น 10-13% ที่ขีด จำกัด การตรวจสอบการทดสอบ ในการทดลอง 10 มล. ขนาดขึ้นขีด จำกัด ของการตรวจสอบการลดลงของบบส qPCR เป็น 2.0 log10 CFU / 10 มล. มีประสิทธิภาพการจับภาพที่สอดคล้องกันของ 4-7% aptamers กรดนิวคลีอิกมีแนวโน้มทางเลือกในการแอนติบอดีสำหรับการจับภาพลูกปัดที่ใช้แม่เหล็กตามด้วยการตรวจสอบ qPCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ต้นแบบวิธีการความเข้มข้นและการตรวจหาเชื้อรวมทั้งได้รับการพัฒนาโดยใช้ก่อนหน้านี้รายงานดีเอ็นเอไล aptamer ร่วมกับ qpcr . การ aptamer ที่เรียกว่าตาม qpcr จับแม่เหล็ก ( AMC qpcr ) โดยเปรียบเทียบกับที่คล้ายกันแยก ( IMS ) - qpcr ตามลำดับ ในการทดลองปริมาณขนาดเล็ก ( 300 μ L ) ใช้กับอนุกรมเจือจาง Cแขวนลอยในบัฟเฟอร์ที่มีเชื้อจุลินทรีย์ผสมของจุลินทรีย์ก่อโรคในอาหารทั่วไป อื่น ๆ , ลดขีดจำกัดของ AMC qpcr วิธีคือ 1.1 LN / 300 μ L C ใช้เซลล์หนึ่ง LN ดีกว่า ( ล่าง ) กว่าของ IMS ( 2.1 qpcr LN CFU / 300 μ L ) AMC qpcr จับประสิทธิภาพ 10 – 13 % ที่ จำกัด การตรวจสอบการทดสอบ ใน 10 มล. ขยายขนาดทดลอง , ลดขีดจำกัดของ AMC qpcr 2 .0 cfu / ml LN 10 ที่มีประสิทธิภาพยึดที่ 4 – 7 % กรดนิวคลีอิกเป็นสัญญาทางเลือกแอนติบอดีสำหรับลูกปัดแม่เหล็กตามจับ ตามด้วยการตรวจหา qpcr .