Purification and basic biochemical

Purification and basic biochemical characterization of 19 recombinant
plant peroxidase isoenzymes produced in Pichia pastoris
The plant enzyme horseradish peroxidase (HRP) is used in several important industrial and medical
applications, of which especially biosensors and diagnostic kits describe an emerging field. Although
there is an increasing demand for high amounts of pure enzyme preparations, HRP is still isolated from
the plant as a mixture of different isoenzymes with different biochemical properties. Based on a recent
next generation sequencing approach of the horseradish transcriptome, we produced 19 individual
HRP isoenzymes recombinantly in the yeast Pichia pastoris. After optimizing a previously reported 2-step
purification strategy for the recombinant isoenzyme HRP C1A by substituting an unfavorable size exclusion
chromatography step with an anion exchange step using a monolithic column, we purified the 19
HRP isoenzymes with varying success. Subsequent basic biochemical characterization revealed differences
in catalytic activity, substrate specificity and thermal stability of the purified HRP preparations.
The preparations of the isoenzymes HRP A2A and HRP A2B were found to be highly interesting candidates
for future applications in diagnostic kits with increased sensitivity

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ฟอกและสมบัติเชิงชีวเคมีพื้นฐานของวททช 19ผลิตพืช peroxidase isoenzymes Pichia pastorisพืชเอนไซม์ horseradish peroxidase (HRP) ใช้ในหลายอุตสาหกรรมสำคัญและแพทย์โปรแกรมประยุกต์ ซึ่งโดยเฉพาะอย่างยิ่ง biosensors และวินิจฉัยอธิบายฟิลด์เกิดใหม่ ถึงแม้ว่ามีความต้องการเพิ่มขึ้นสำหรับจำนวนสูงเตรียมเอนไซม์บริสุทธิ์ HRP จะยังคงแยกต่างหากจากพืชเป็นส่วนผสมของ isoenzymes แตกต่างกันมีคุณสมบัติทางชีวเคมีที่แตกต่างกัน ตามความล่าสุดถัดไปสร้างลำดับวิธีการของ horseradish transcriptome เราผลิตละ 19Isoenzymes HRP recombinantly ในยีสต์ Pichia pastoris หลังจากที่รายงานไปก่อนหน้านี้ 2-ขั้นตอนการเพิ่มประสิทธิภาพกลยุทธ์ฟอกสำหรับ isoenzyme recombinant HRP C1A โดยการแทนที่การแยกขนาดร้ายchromatography ขั้นตอนกับขั้นตอนการแลกเปลี่ยน anion ที่ใช้คอลัมน์เสาหิน เราบริสุทธิ์ 19Isoenzymes HRP ดีแตกต่างกัน จำแนกชีวเคมีพื้นฐานต่อมาเปิดเผยความแตกต่างในกิจกรรมที่ตัวเร่งปฏิกิริยา specificity พื้นผิว และความมั่นคงความร้อนของเตรียม HRP บริสุทธิ์เตรียมของ isoenzymes HRP A2A และ HRP A2B พบให้ผู้สมัครที่น่าสนใจมากสำหรับการใช้งานในอนาคตในชุดวินิจฉัยมีความไวเพิ่มขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะทางชีวเคมีพื้นฐานของ 19 recombinant
isoenzymes peroxidase โรงงานผลิตใน Pichia pastoris
เอนไซม์พืชมะรุม peroxidase (HRP)
ถูกนำมาใช้ในอุตสาหกรรมและการแพทย์ที่สำคัญหลายการใช้งานซึ่งโดยเฉพาะไบโอเซนเซอร์และชุดตรวจวินิจฉัยอธิบายสนามใหม่ แม้ว่าจะมีความต้องการที่เพิ่มขึ้นสำหรับจำนวนเงินที่สูงของการเตรียมเอนไซม์บริสุทธิ์ HRP จะถูกแยกออกยังคงมาจากพืชเป็นส่วนผสมของisoenzymes ที่แตกต่างกันมีคุณสมบัติที่แตกต่างกันทางชีวเคมี ขึ้นอยู่กับที่ผ่านมาวิธีการจัดลำดับรุ่นต่อไปของยีนพืชชนิดหนึ่งที่เราผลิต 19 แต่ละ HRP isoenzymes recombinantly ในยีสต์ Pichia pastoris หลังจากที่เพิ่มประสิทธิภาพได้รายงานไปแล้ว 2 ขั้นตอนกลยุทธ์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับisoenzyme recombinant HRP C1A โดยการแทนยกเว้นขนาดเสียเปรียบขั้นตอนโคที่มีการแลกเปลี่ยนไอออนขั้นตอนโดยใช้คอลัมน์เสาหินเราบริสุทธิ์19 HRP isoenzymes กับความสำเร็จที่แตกต่างกัน ลักษณะทางชีวเคมีที่เกิดขึ้นภายหลังขั้นพื้นฐานเปิดเผยความแตกต่างในการเร่งปฏิกิริยาจำเพาะพื้นผิวและเสถียรภาพทางความร้อนของการเตรียม HRP บริสุทธิ์. เตรียมของ isoenzymes HRP A2A และ HRP A2B ถูกพบว่ามีผู้สมัครที่น่าสนใจอย่างมากสำหรับการใช้งานในอนาคตในชุดตรวจวินิจฉัยที่มีความไวที่เพิ่มขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทำให้บริสุทธิ์และคุณลักษณะทางชีวเคมีพื้นฐานของเซลล์พืชมี 19

ของที่ผลิตใน pichia pastoris พืชเอนไซม์เปอร์ออกซิเดส ( ช . ) ที่ใช้ในอุตสาหกรรมสำคัญหลายประการและการประยุกต์ใช้ทางการแพทย์
, ซึ่งโดยเฉพาะตามการอธิบายที่เกิดขึ้นใหม่และชุดสนาม แม้ว่า
มีความต้องการเพิ่มขึ้นสำหรับปริมาณสูงของการเตรียมเอนไซม์บริสุทธิ์ , HRP ยังแยกจาก
พืชเป็นส่วนผสมของของที่แตกต่างกันด้วยคุณสมบัติทางชีวเคมีที่แตกต่างกัน ตามแนวทางของรุ่นถัดไปของลำดับล่าสุด
. ทราน ริปโตม เราผลิต 19 บุคคล
HRP ของ recombinantly ในยีสต์ pichia pastoris .หลังจากการรายงานก่อนหน้านี้ ขั้นตอนที่ 2
บริสุทธิ์กลยุทธ์สำหรับ recombinant ความรู้สึก HRP c1a จากเสียเปรียบขนาดยกเว้น
ขั้นตอนกับการแลกเปลี่ยนไอออน chromatography ขั้นตอนการใช้คอลัมน์แบบเราบริสุทธิ์ 19
HRP กับค่าของความสำเร็จ ลักษณะพื้นฐานทางชีวเคมี พบความแตกต่าง
ตามมาในฤทธิ์ ,วัสดุเพาะและเสถียรภาพทางความร้อนของบริสุทธิ์ HRP การเตรียม .
การเตรียมการของของ HRP A2A HRP a2b และพบว่ามีผู้สมัครที่น่าสนใจอย่างมากสำหรับการใช้งานในอนาคต
ในชุดตรวจวินิจฉัยที่มีความไวเพิ่มขึ้น