PCR reaction and digestion ofamplif

PCR reaction and digestion of
amplified fragments were performed
according to the methods described by
Esteve-Zarzoso et al.17 For the 100 µl PCR
reactions, the primers ITS1 (5´TCC GTA GGT
GAA CCT TGC GG 3´) and ITS4 (5'-TCC TCC GCT
TAT TGA TAT GC-3') were used.
18 The PCR reaction
mixture contained 0.5 µM of each primer, 10
µM deoxynucleotides, 1.5 mM MgCl2 and 1 x
buffer (Promega). The PCR reaction mixture
was incubated at 95°C for 15 min in a PE
2400 (Perkin Elmer) thermocycler. One unit of
the Taq Polymerase was then added to each
tube. PCR conditions were as follows: 35
cycles of denaturing at 94°C for 1 min;
annealing at 55.5°C for 2 min and extension
at 72°C for 2 min; and final extension at
72°for 10 min. PCR products (10µl) were
digested without further purification with the
restriction endonucleases CfoI, HaeIII and
HinfI. PCR products and their restriction
fragments were separated on agarose gels,
stained with ethidium bromide and visualized
under UV light. Sizes were determined by
comparison against the DNA length standard
(100 bp ladder) using LabWorks 3.0.2.
software (UVP).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปฏิกิริยา PCR และการย่อยอาหารของดำเนินการแยกส่วนเอาต์ตามวิธีอธิบายไว้โดยEsteve Zarzoso et al.17 สำหรับ 100 µl PCRปฏิกิริยา ไพรเมอร์ ITS1 (5´TCC GTA GGTเฒ่า CCT TGC GG 3´) และ ITS4 (5'-TCC TCC GCTTAT TGA TAT GC-3') ใช้18 ในปฏิกิริยา PCRผสมอยู่ 0.5 µM แต่ละพื้น 10µM deoxynucleotides, 1.5 มม. MgCl2 และ 1 xบัฟเฟอร์ (Promega) ส่วนผสมของปฏิกิริยา PCRมี incubated ที่ 95° C สำหรับใน PE 15 นาทีThermocycler 2400 (เพอร์เอลเมอ) หนึ่งหน่วยพอลิเมอเรส Taq ถูกเพิ่มไปยังแต่ละหลอด เงื่อนไข PCR มีดังนี้: 35วงจรของ denaturing ที่ 94° C สำหรับ 1 นาทีการอบเหนียวที่ 55.5 องศาเซลเซียส 2 นาทีและส่วนขยายที่ 72° C สำหรับ 2 นาที และสุดท้ายภายในที่72 องศา 10 นาทีผลิตภัณฑ์ PCR (10µl) ได้ต้องไม่ฟอกเพิ่มเติมด้วยการendonucleases จำกัด CfoI, HaeIII และHinfI ผลิตภัณฑ์ PCR และข้อจำกัดของพวกเขามีแยกชิ้นส่วนบน agaroseสีกับโบรไมด์ ethidium และ visualizedภายใต้แสง UV ขนาดถูกกำหนดโดยเปรียบเทียบกับความยาวดีเอ็นเอมาตรฐาน(100 bp บันได) ใช้ LabWorks บินตกแต่ง 3.0.2ซอฟต์แวร์ (UVP)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิกิริยา PCR และการย่อยอาหารของชิ้นส่วนขยายได้ดำเนินการตามวิธีการที่อธิบายโดยEsteve-Zarzoso et al.17 สำหรับ PCR 100 ไมโครลิตรปฏิกิริยาITS1 ไพรเมอร์ (ที่ 5'TCC GTA GGT GAA CCT TGC GG 3') และ ITS4 (5 ' -TCC ทีซีซีจีซีทีการท่องเที่ยวแห่งประเทศไทยทททTGA GC-3 ') ถูกนำมาใช้. 18 ปฏิกิริยา PCR ส่วนผสมที่มีอยู่ 0.5 ไมครอนของแต่ละไพรเมอร์ 10 ไมครอน deoxynucleotides 1.5 มิลลิ MgCl2 และ 1 x บัฟเฟอร์ (Promega) ผสมปฏิกิริยา PCR ได้รับการบ่มที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาทีใน PE 2400 (Perkin Elmer) thermocycler หนึ่งหน่วยของTaq โพลิเมอร์ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วกับแต่ละหลอด เงื่อนไข PCR มีดังนี้ 35 รอบของ denaturing ที่ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที; หลอมที่ 55.5 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีและการขยายที่72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที; และการขยายรอบสุดท้ายที่72 องศาเป็นเวลา 10 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR (10μl) ถูกย่อยสลายโดยไม่บริสุทธิ์ต่อไปด้วยข้อจำกัด endonucleases CfoI, HaeIII และHinfI ผลิตภัณฑ์ PCR และข้อ จำกัด ของพวกเขาชิ้นส่วนแยกบนเจลagarose, ย้อมด้วย ethidium bromide และมองเห็นภายใต้แสงยูวี ขนาดถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบกับความยาวของดีเอ็นเอมาตรฐาน(100 บันได bp) โดยใช้ LabWorks 3.0.2. ซอฟแวร์ (UVP)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปฏิกิริยา PCR และการย่อยอาหารของชิ้นส่วนของ

มีการปฏิบัติตามวิธีการที่อธิบายโดย
esteve zarzoso et al.17 สำหรับ 100 µ L
ปฏิกิริยา PCR ไพรเมอร์ , its1 ( 5 ใหม่ TCC GTA GGT
GAA CCT TGC GG 3 ใหม่ ) และ its4 ( 5 ' - ทีซีซี ทีซีซี นอกจากนี้บริษัท การท่องเที่ยวแห่งประเทศไทย ททท. gc-3
: ' ) มาใช้ เพื่อตรวจหา

18 ส่วนผสมที่มีอยู่µ 0.5 M ของแต่ละคู่ , 10
µ M deoxynucleotides ไอโซโทป , 1.5 มม. และ 1 x
บัฟเฟอร์ ( promega )การตรวจปฏิกิริยาผสม
ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 95 องศา C เป็นเวลา 15 นาทีใน PE
2400 ( เพอร์กินเอลเมอร์ ) เทอร์มอไซเคล ์ . หนึ่งหน่วยของแท็กการเพิ่มแล้ว

เป็นแต่ละหลอด โดยเงื่อนไขดังนี้ 35
รอบี่ที่ 94 °องศาเซลเซียสนาน 1 นาที ;
annealing ที่ 55.5 ° C เป็นเวลา 2 นาทีที่ 72 ° C )
2 นาที และสุดท้ายส่วนขยายที่ 72 องศา
10 นาทีซึ่งผลิตภัณฑ์ ( 10 µ L )
ย่อยต่อไปโดยไม่บริสุทธิ์ด้วย

haeiii สงบเงียบ cfoi จำกัด , และ hinfi . ผลิตภัณฑ์ PCR และชิ้นส่วนของพวกเขาถูกแยกออกจากกันในจำกัด

, เจล , เปื้อนทิเดียมโบรไมด์และมองเห็น
ภายใต้แสงยูวี ขนาดถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบกับความยาวดีเอ็นเอมาตรฐาน

( 100 BP บันได ) การดาวน์โหลดซอฟต์แวร์ labworks .
( uvp )