HPLC Simultaneous Determination of

HPLC Simultaneous Determination of Carotenoids and Tocopherol
Identification and quantification of carotenoids and tocopherols in Gauk fruits in and out part extracts were carried out using an HPLC (Dionex, Sunnyvale, CA, USA) on a Nova-Pak C18 (3.9ⅹ150 mm, 4 μm) column (Waters Corp., Milford, MA). Wavelengths of 450 and 290 nm were used for the determination of carotenoids and tocopherols, respectively. The mobile phase for separations of both carotenoids and tocopherols consisted of methanol:acetonitril:tetrahydrofuran (50:45:5, v/v/v) and a 20 μL volume was injected and eluted with the mobile phase described above at a flow rate of 1 mL/min.
MEASUREMENT OF ANTIOXIDANT ACTIVITY
DPPH assay
Antioxidant activities of the samples were also analyzed by investigating their ability to scavenge the DPPH● free radical (modified from Kilani et al., 2005; Chen et al., 2007). DPPH● has an intense violet color with a maximum absorbance at 517 nm, but turns colorless as unpaired electrons are scavenged by antioxidants. Using 96-well micro plate, reaction mixtures containing 100 μL of sample and 100 μL of 0.2 mM DPPH● (prepared in methanol) were placed for 30 min at room temperature. The reacted mixtures were recorded at 540 nm. When geuk fruit extract and carotenoids were mixed with DPPH solution, a dark brown color was produced, which interfered with the absorbance readings at 515 nm (optimum wavelength using DPPH assay). To reduce this interference, the wavelength was changed to 540nm where DPPH still had significant absorbance but the brown color did not show up. The scavenging activity was calculated, according to following formula: (Acontrol-Asample/Acontrol) × 100.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

HPLC พร้อมกำหนด Carotenoids และ Tocopherolรหัสและนับของ carotenoids tocopherols ในผลไม้ Gauk ใน และแยกส่วนได้ดำเนินการโดยใช้ HPLC การ (Dionex, Sunnyvale, CA, USA) บน C18 ปากโนวา (3.9ⅹ150 mm, 4 μm) คอลัมน์ (น้ำ Corp. ลฟอร์ด MA) ความยาวคลื่นของ 450 และ 290 nm ถูกใช้สำหรับการกำหนดของ carotenoids tocopherols ตามลำดับ เฟสเคลื่อนที่หาของ tocopherols และ carotenoids ประกอบด้วยเมทานอล: acetonitril:tetrahydrofuran (50:45:5, v/v/v) และไดรฟ์ข้อมูล 20 μL ถูกฉีด และ eluted กับระยะเคลื่อนที่อธิบายข้างต้นที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาทีการวัดกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระDPPH assayกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระอย่างได้วิเคราะห์ โดยตรวจสอบความสามารถในการ scavenge อนุมูลอิสระ DPPH● (ปรับเปลี่ยนจาก Kilani et al., 2005 ยัง Chen et al., 2007) DPPH● มีสีอมม่วงการรุนแรงกับ absorbance สูงสุดที่ 517 nm เปิดไม่มีสีเป็นอิเล็กตรอน unpaired มี scavenged ด้วยสารต้านอนุมูลอิสระ โดยใช้แผ่นไมโครดี 96 น้ำยาผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย μL 100 ของตัวอย่างและ μL 100 มม. 0.2 DPPH● (เตรียมในเมทานอล) ถูกวางใน 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง น้ำยาผสม reacted บันทึกที่ 540 nm เมื่อ geuk สารสกัดผลไม้และ carotenoids ที่ผสม ด้วยโซลูชั่น DPPH สีน้ำตาลเข้มถูกผลิต ซึ่งยุ่งอ่าน absorbance ที่ 515 nm (เหมาะสมความยาวคลื่นโดยใช้ DPPH assay) ความยาวคลื่นมีการเปลี่ยนแปลงการ 540nm ที่ DPPH ยังมี absorbance ที่สำคัญ แต่ไม่ได้แสดงสีน้ำตาลเพื่อลดสัญญาณรบกวนนี้ กิจกรรม scavenging คำนวณ ตามสูตรต่อไปนี้: ฟิลด์ (Acontrol-Asample/Acontrol) 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

HPLC พร้อมกันการกำหนด Carotenoids
และโทโคฟีรอการจำแนกชนิดและปริมาณของนอยด์และวิตามินอีในผลไม้Gauk เข้าและออกจากสารสกัดจากส่วนที่ได้ดำเนินการโดยใช้วิธี HPLC (Dionex, ซันนีเวล, CA, USA) ในโนวาปาก C18 (3.9ⅹ150มม 4 ไมโครเมตร ) คอลัมน์ (วอเตอร์คอร์ป, ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) ความยาวคลื่น 450 นาโนเมตรและ 290 ถูกนำมาใช้ในการตรวจวัดและ carotenoids tocopherols ตามลำดับ เฟสเคลื่อนที่สำหรับการแยกของนอยด์และวิตามินอีทั้งสองประกอบไปด้วยเมทานอล: acetonitril: tetrahydrofuran (50: 45: 5 v / v / v) และปริมาณไมโครลิตร 20 ถูกฉีดและชะกับเฟสเคลื่อนที่ที่อธิบายข้างต้นที่อัตราการไหลของ . 1 มิลลิลิตร /
นาทีการวัดสารต้านอนุมูลอิสระทดสอบ
DPPH
กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของกลุ่มตัวอย่างได้รับการวิเคราะห์โดยการตรวจสอบความสามารถในการไล่ DPPH ●อนุมูลอิสระ (ดัดแปลงมาจาก Kilani et al, 2005;.. เฉิน et al, 2007) DPPH ●มีสีม่วงเข้มข้นด้วยการดูดกลืนแสงสูงสุดที่ 517 นาโนเมตร แต่จะเปลี่ยนสีเป็นอิเล็กตรอน unpaired จะถูกพายุโดยสารต้านอนุมูลอิสระ ใช้ 96 หลุมแผ่นไมโครผสมปฏิกิริยาที่มี 100 ไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างและ 100 ไมโครลิตร 0.2 มิลลิ DPPH ● (จัดทำขึ้นเมทานอล) ถูกวางไว้เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ผสมปฏิกิริยาถูกบันทึกไว้ที่ 540 นาโนเมตร สารสกัดจากผลไม้เมื่อ geuk และนอยด์ถูกผสมกับการแก้ปัญหา DPPH, สีน้ำตาลเข้มเป็นจำนวนมากซึ่งแทรกแซงด้วยการอ่านการดูดกลืนแสงที่ 515 นาโนเมตร (ความยาวคลื่นที่เหมาะสมโดยใช้การทดสอบ DPPH) เพื่อลดการรบกวนนี้ความยาวคลื่นได้เปลี่ยนไปเป็น 540Nm DPPH ที่ยังคงมีการดูดกลืนแสงอย่างมีนัยสำคัญ แต่สีน้ำตาลไม่ได้แสดง ต้านถูกคำนวณตามสูตรดังต่อไปนี้: (Acontrol-Asample / Acontrol) × 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การหาปริมาณแคโรทีนอยด์ชนิด HPLC พร้อมกันและโทโคเฟอรอล และโทโคฟีรอลและ
ปริมาณคาโรทีนอยด์ในเกาะผลไม้และสารสกัดส่วนที่ทดลองใช้ HPLC ( DIONEX Sunnyvale , CA , USA ) โนวาปาร์ค c18 ( 3.9 ⅹ 150 มม. 4 μ M ) คอลัมน์ ( น้ำคอร์ป , Milford , MA ) ความยาวคลื่น 450 และ 290 nm ใช้สำหรับการหาปริมาณแคโรทีนอยด์ และโทโคฟีรอล ,ตามลำดับ ระยะเคลื่อนที่สำหรับการแยกของทั้งสอง Carotenoids และโทโคฟีรอลประกอบด้วยเมทานอล : acetonitril : เตตระไฮโดรฟแรน ( 50:45:5 , V / v / v ) และ 20 μ L ปริมาณฉีดและตัวอย่างกับเฟสเคลื่อนที่ที่อธิบายข้างต้นที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาที
การวัดฤทธิ์ต้าน dpph assay

กิจกรรมต้านออกซิเดชันของกลุ่มตัวอย่าง ยังได้วิเคราะห์โดยศึกษาความสามารถใน 7 dpph ●อนุมูลอิสระ ( ดัดแปลงจาก kilani et al . , 2005 ; Chen et al . , 2007 ) dpph ●มีสีม่วงเข้มกับค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดที่ 517 nm แต่เปลี่ยนสีเป็น Unpaired อิเล็กตรอนคือด้วยสารต้านอนุมูลอิสระ ใช้ 96 ดีไมโครจานผสมปฏิกิริยา ( 100 μลิตรและ 100 ลิตร จำนวนμ● dpph 0.2 มม. ( ที่เตรียมไว้ในเมทานอล ) อยู่ประมาณ 30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง การทำส่วนผสมที่ถูกบันทึกไว้ 540 นาโนเมตร เมื่อสารสกัดผลไม้กุกและแคโรทีนอยด์ผสม dpph โซลูชั่นเป็นสีผลิตซึ่งแทรกแซงค่าการอ่านที่ 515 nm ( ความยาวคลื่นที่เหมาะสมโดยใช้ dpph assay )เพื่อลดการรบกวนนี้ ความยาวคลื่นที่เปลี่ยนไป 540nm ที่ dpph ยังคงมีความแตกต่างค่าแต่สีน้ำตาลไม่แสดงขึ้น ไล่กิจกรรมคำนวณตามสูตรต่อไปนี้ : ( จำนวนๆ ละ 15 / ๆ ละ 15 ) × 100