repeat units, classes and source of

repeat units, classes and source of their synthesis are given in
the Table 1. Bulk segregation analysis had been completed
with all screened polymorphic primers. Primer sequence,
annealing temperature and PIC value are described in Table 2.
Results of prescreening were used to classify primer pairs as
polymorphic, monomorphic or no amplified. Screening has been
repeated for three times to confirm the polymorphism. PCR
amplification of microsatellite regions were performed in 10 μl
volumes containing 25 ng of template DNA, 1.0 μl of each
forward and reverse primers, 100 mM of each dNTPs, 0.5 unit
of taq DNA polymerase (M/S Bangalore GeneiTM, India), 1.0 μl
of 10 X PCR buffer and 2.5 mM of MgCl2. The reactions were
carried out in a thermal cycler (M J Research). Cycling
conditions were 94 0C for 5 min followed by 25 cycles of 94 0C
for 1 min, appropriate annealing temperature (50-60 0C) for 1
min, 720C for 1 min and a final extension step at 72 0C for 5 min.
PAGE, Gel Staining and Scoring
The amplified products were size separated in native PAGE
in vertical gel electrophoresis of Axygen & GeneiTM make.
PAGE were standardized for various concentration of
polyacrylamide like 6.0%, 6.5% and 7.5%.Good resolution
were evolved at 7.5% of PAGE. Band sizing was done against
50 bp ladder. Final electrophoresis was carried out in 0.5 X
TBE buffer under 120 volt current for 4 h in 7.5 % Acrylamide
(29): Bis acrylamide (1) gel matrix. Gels were stained in ethidium
bromide for 10 minutes and destained in Milli Q water for 20
minutes. The banding pattern was viewed under UV
transillumination in Alpha Imager system. PCR amplified
fragments were captured and saved automatically as Alpha
Digi Doc files. Scoring was done on the basis of presence and
absence of bands (1 or 0) and number of alleles was determined
based on the number of clear bands detected. The
Polymorphism Information Content (PIC) values were
computed using the formula of Milbourne et al. (1997) as follow

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หน่วยซ้ำ ประเภท และแหล่งที่มาของการสังเคราะห์จะได้รับในตาราง 1 วิเคราะห์แบ่งแยกจำนวนมากได้เสร็จสมบูรณ์แล้วมีทั้งหมดฉาย polymorphic ไพรเมอร์ ลำดับรองพื้นอุณหภูมิหลอมและ PIC ค่าไว้ในตารางที่ 2ผลลัพธ์ของ prescreening ถูกใช้เพื่อจัดประเภทคู่รองพื้นเป็นpolymorphic, monomorphic หรือไม่เอาต์ ได้รับการคัดกรองทำซ้ำ 3 ครั้งเพื่อยืนยันโพลีมอร์ฟิซึม PCRขยายภูมิภาคชนิด microsatellite ดำเนินใน 10 μlไดรฟ์ข้อมูลที่ประกอบด้วย 25 ng ของแม่แบบดีเอ็นเอ μl 1.0 ของแต่ละไปข้างหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์ ของ dNTPs ละ 100 มม. 0.5 หน่วยของ taq DNA พอลิเมอเรส (M/S บังกาลอร์ GeneiTM อินเดีย), 1.0 μl10 X PCR บัฟเฟอร์และ 2.5 mM ของ MgCl2 ปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการใน cycler ร้อน (M J วิจัย) ขี่จักรยานเงื่อนไขถูก 94 0C สำหรับ 5 นาทีตามรอบของ 94 25 0Cใน 1 นาที สม (50-60 0C) อุณหภูมิในการหลอม 1นาที 720 ซีใน 1 นาที และส่วนขยายสุดท้ายขั้นที่ 72 0C สำหรับ 5 นาทีหน้า เจย้อมสี และให้คะแนนผลิตภัณฑ์เอาต์ได้ขนาดที่คั่นหน้าเป็นในแนวตั้งเจ electrophoresis ทำ Axygen และ GeneiTMหน้าที่เป็นมาตรฐานสำหรับความเข้มข้นต่าง ๆ ของpolyacrylamide เช่น 6.0%, 6.5% และ 7.5% ความละเอียดดีมีพัฒนาที่ 7.5% ของหน้า ขนาดวงทำจากบันได bp 50 สุดท้าย electrophoresis ทำออกใน 0.5 XTBE บัฟเฟอร์ปัจจุบันสำหรับ 4 h 120 โวลต์ 7.5% อะคริลาไมด์(29): bis อะคริลาไมด์ (1) เจเมตริกซ์ เจมีสีใน ethidiumโบรไมด์สำหรับ 10 นาทีและ Q ที่ destained ในน้ำสำหรับ 20นาที รูป banding ถูกแสดงภายใต้ UVtransillumination ในระบบถ่ายภาพของ Alpha PCR ที่ขยายถูกจับ และบันทึกโดยอัตโนมัติเป็นอัลฟาไฟล์ Digi Doc คะแนนเสร็จตามสถานะ และกำหนดขาดของวง (1 หรือ 0) allelesตามหมายเลขของวงใสที่ตรวจพบ ที่มีค่าข้อมูลเนื้อหา (PIC) โพลีมอร์ฟิซึมคำนวณโดยใช้สูตรของ Milbourne et al. (1997) ต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หน่วยซ้ำชั้นเรียนและแหล่งที่มาของการสังเคราะห์ของพวกเขาจะได้รับในตารางที่ 1 การวิเคราะห์แยกเป็นกลุ่มที่ได้รับการเสร็จสิ้นกับการคัดเลือกไพรเมอร์polymorphic ทั้งหมด ลำดับไพรเมอร์, อุณหภูมิการหลอมและความคุ้มค่า PIC อธิบายไว้ในตารางที่ 2 ผลการ prescreening ถูกนำมาใช้ในการจำแนกคู่ไพรเมอร์เป็นpolymorphic monomorphic หรือไม่ขยาย ได้รับการคัดกรองซ้ำสามครั้งเพื่อยืนยันความแตกต่าง PCR การขยายของภูมิภาคไมโครได้ดำเนินการใน 10 ไมโครลิตรปริมาณที่มี25 นาโนกรัมดีเอ็นเอแม่แบบ 1.0 ไมโครลิตรของแต่ละข้างหน้าและไพรเมอร์กลับ100 มิลลิของแต่ละ dNTPs, 0.5 หน่วยของดีเอ็นเอโพลิเมอร์ Taq (M / S บังกาลอร์ GeneiTM อินเดีย) 1.0 ไมโครลิตรของbuffer 10 X PCR และ 2.5 มิลลิของ MgCl2 ปฏิกิริยาถูกดำเนินการใน Cycler ร้อน (MJ วิจัย) ขี่จักรยานเงื่อนไขที่ 94 0C เวลา 5 นาทีตามด้วย 25 รอบ 94 0C เวลา 1 นาทีอุณหภูมิการอบที่เหมาะสม (50-60 0C) เป็นเวลา 1 นาที, 720C เป็นเวลา 1 นาทีและขั้นตอนสุดท้ายส่วนขยายที่ 72 0C เวลา 5 นาที. หน้า, เจลย้อมสีและเกณฑ์การให้คะแนนผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการขยายขนาดแยกหน้าพื้นเมืองในข่าวคราวในแนวตั้งของAxygen และทำให้ GeneiTM. หน้าได้รับมาตรฐานความเข้มข้นต่างๆของอะคริเลตเช่น 6.0%, 6.5% และ 7.5% ความละเอียด .Good ถูกวิวัฒนาการมาที่ 7.5% ของหน้า . ขนาดวงที่ได้กระทำกับ50 bp บันได อิเล็กรอบชิงชนะเลิศได้ดำเนินการใน 0.5 X บัฟเฟอร์ TBE ภายใต้ 120 โวลต์ปัจจุบัน 4 ชั่วโมงใน 7.5% Acrylamide (29): ทวิริลาไมด์ (1) เมทริกซ์เจล เจลมีการย้อมใน ethidium bromide 10 นาทีและในน้ำ destained พัน Q สำหรับ 20 นาที รูปแบบแถบถูกมองภายใต้ยูวีtransillumination ในระบบของอัลฟา Imager PCR ขยายเศษถูกจับและบันทึกไว้โดยอัตโนมัติในขณะที่อัลฟาDigi ไฟล์ Doc เกณฑ์การให้คะแนนที่ได้กระทำบนพื้นฐานของการแสดงตนและไม่มีตัวตนของวงดนตรี (1 หรือ 0) และจำนวนของอัลลีลที่ถูกกำหนดขึ้นอยู่กับจำนวนของวงดนตรีที่ชัดเจนที่ตรวจพบ ข้อมูลหลายรูปแบบเนื้อหา (PIC) ค่าถูกคำนวณโดยใช้สูตรของMilbourne et al, (1997) ดังต่อไปนี้